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방법 논문

쥐에서 담 즙이 폐쇄 증 증후군 장황 하는 실버 나노 방법

7.3K 조회수

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DOI:

10.3791/58158

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2018년 10월 13일

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이 논문에서

요약

이 문서는 장황 실험 담 즙이 폐쇄 증 마우스 모델에서 담 즙이 폐쇄 증 증후군에 대 한은 나노 입자에 따라 하는 방법을 자세하게에서 설명 합니다. 시 약 준비 과정 및 신생아 마우스 주입 기술을 이해 신생아 마우스 모델 연구에 사용 되는 방법에 익숙해지도록 연구 하는 데 도움이 됩니다.

초록

담 즙이 폐쇄 증 (바)의 병 인은 아직 완전히 이해 하는 아이 들에 있는 높은 사망률과 염의 심각한 유형입니다. 바이러스 성 감염 원인 중 하나 있을 수 있습니다. 학사 학위를 공부에 대 한 사용 되는 전형적인 동물 모델 붉은 털으로 타 바이러스와 신생아 마우스 접종으로 설정 됩니다. 나노 항균 및 항 바이러스 효과; 발휘 표시 되었습니다. 바 마우스 모델에서 그들의 기능은이 연구에서 평가 됩니다. 현재, 바 동물 실험, 바 쥐의 증상을 개선 하는 데 사용 하는 방법을 통해 음식이 나 다른 약물을 주어진 일반적으로 증상 치료입니다. 이 연구의 목적은 쥐에서 바 증후군은 나노 입자의 복 주입 장황 하는 새로운 방법을 설명 하 고은 나노 젤 배합을 준비 하기 위한 자세한 방법을 제공입니다. 이 메서드는 간단 하 고 광범위 하 게 적용 하며 바, 뿐만 아니라 임상 치료 메커니즘을 연구 하는 데 사용할 수 있습니다. 쥐 전시 황 달 때 바 마우스 모델에 따라, 준비 된은 나노 젤 낮은 간 표면에 intraperitoneally 주입 됩니다. 생존 상태를 관찰 하 고 생화학 지표 및 간 histopathology 검사. 이 메서드는 두 바 모델 및 소설 바 트리 트 먼 트의 설립의 더 직관적인 이해를 수 있습니다.

서론

바는 cholestasis 영구적인 황 달 특징의 한 형태 이며, 간 이식의 부재에 높은 사망률을 있다. 바이러스 성 감염 바의 병 인에 밀접 하 게 연관 된다. 세포, reovirus, 그리고로 모두 바1,2,3병원 균으로 제안 되었습니다. 추가-intrahepatic 및 담 관, 담 즙 상피 세포 apoptosis, 포털에서 선 동적인 세포 침투를 선도 대 한 면역 dysregulation 신생아 기간 동안 바이러스 감염에 대 한 미숙한 면역 시스템의 응답 결과 지역, intrahepatic 및 extrahepatic 담 관 방해, 그리고 마지막으로, 간 섬유 증4,,56.

학사 연구에 대 한 일반적으로 사용 되 동물 모델에서는 붉은 털으로 타 바이러스 (RRV)와 신생아 마우스의 접종 합니다. 마우스는 일반적으로 낮은 몸 무게 및 acholic 변 5-6 일 후 황 달 개발. 질병 과정에서 면역 반응의 역할....

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프로토콜

모든 동물 실험 프로토콜 기관 동물 관리 및 사용 Sun 야만 센 대학 실험실 동물 센터 (#IACUC-DB-16-0602)의 위원회에 의해 승인 되었습니다가지고.

1. 담 즙이 폐쇄 증 마우스 모델 구축

  1. 압력가 마로 소독 차 우 광고 libitum에 대 한 액세스와 25 ° C에서 12 h 다크/라이트 사이클에서 특정 병원 체 자유로운 환경에서 임신 BALB/c 마우스를 유지.
  2. 준비 하려면 RRV 스트레인 MMU 18006, MA104 세포에 바이러스를 증폭 하 고 상 패 분석 결과19바이러스 titers을 측정 한다.
    참고: MA104 셀 교양 Dulbecco의 수정된이 글의 중간 (DMEM)에 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS) 인큐베이터에 함께 포함 된 5% CO2습도 분위기. 증폭 단계는 간략하게 아래 설명 됩니다.
    1. MA104 세포를 감염 (1.5 x 107) 30 ml 혈 청 자유로운 매체의 트립 신 활성화 RRV [1.5 x 106 플 라크 형성 단위 (PFU)]와 150 cm2 문화 플라스 크에. 5% CO2와 37....

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결과

설치 바 마우스 모델을 기반으로, 감염 된 신생아 쥐 관리 되었다 준비 AgNP 콜라겐 혼합물 2의 i.p. 주사 황 달 전시 후 x. 마우스 생존은 매일, 확인 하 고 간 기능 검사, 간 병 리, 그리고 cytometry 수행 했다. 치료 컨트롤 바 쥐에 비해, AgNP 처리 쥐 감소 황 달 그리고 유지 하는 그들의 정상적인 몸 무게 (그림 3). 빌리 루빈 물질 대사 및 간장 transaminase 레벨 정상 제어 값, AgNPs는 크게 (표 1) 간 기능 개선 제안에 떨어졌다. Methylene 청색 얼룩과 extrahepatic cholangiography (그림 4) AgNP 치료 후 담 즙 덕트 patency 확인. H & E 염색 (그림 5) 마우스 컨트롤 마우스.......

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토론

AgNPs 전시 강력한 넓 스펙트럼 항균 특성 및 강한 침투성22; 또한, 그들은 항균 의료 제품23의 범위를 생산 하는 데 사용 됩니다. 그러나, AgNPs는 일단 그들은 장기에 축적 하 고이 속성은 독성 효과24,25이어질 수 있습니다 취소 하는 데 시간이 오래 걸릴 수 있습니다. 이전 연구는 쥐 실험에서 단일 i.v. 주입 후 급성 독성과 AgNPs의 genotoxicity 검사 하 고 결과 보였다 AgNPs 급성 간 및 신장 손상 발생할 수 있습니다. AgNPs는 thymus, 비장17등 주요 면역계 장기에 축적. 이 마우스 바 모델 AgNPs는 치료 ameliorated NK 세포 억제에 의해 부분적으로 중재를 제안 하는 우리의 데이터 바 증후군. 그러나, AgNPs의 장기 효과 마우스 개.......

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

여기 사용 AgNPs C. M. 체 화학의 부, 홍콩의 대학에 선물 했다. 이 작품은 국립 자연 과학 재단의 중국 (No. 81600399) 및 과학 기술 프로젝트의 광저우 (No.201707010014)에 의해 투자 되었다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
BALB/c 마우스광동 의학 실험 동물 센터SYXK2017-0174동물 실험
붉은털 로타바이러스 (RRV)ATCC ATCC  VR-1739담즙 폐쇄증 마우스 모델
MA104 세포ATCCATCC  CRL-2378.1실험실 전용
DMEMThermo Fisher10569010포유류 세포 배양
태아 소 혈청Thermo Fisher10099141포유류 세포 배양
콜라겐 유형I CORNING354236연구용
PBS 완충액OXOIDBR0014G세척
NaOHSigma1310-73-2pH 값
조정 AgNPAntibacterial
참고: AgNps는 홍콩 대학교 화학과의 CM Che. 교수의 선물이었습니다.
인슐린 주사기(통합 바늘 포함BD9161635S의료용
15 mL 원심분리기 튜브Corning430791실험실 전용
1.5 mL 마이크로 원심분리기 튜브GEBCT0200-B-N실험실 전용
현미경NikonECLIPSE-Ci실험실용
해부/생체 내 현미경NikonSMZ 1000실험실용
안티-마우스 NKp46 FITCeBioscience11-3351연구용
전용 안티-마우스 CD4 PE-Cyanine5eBioscience15-0041연구용
전용 단클론 마우스 Anti-Human CD4DAKO20001673연구용
전용 anti-NKG2DRDMAB1547연구용
BD FACSCanto 유세포 분석기BD BiosciencesFACS Canto Plus실험실 전용
)

참고문헌

  1. Szavay, P. O., Leonhardt, J., Czechschmidt, G., Petersen, C. The role of reovirus type 3 infection in an established murine model for biliary atresia. European Journal of Pediatric Surgery. 12 (04), 248-250 (2002).
  2. Coots, A., et al.

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