여기, 선물이 placental chondroitin 황산 염 A 바인딩 펩 티 드 (plCSA-BP)의 합성에 대 한 프로토콜-지질 고분자 나노 입자를 통해 단일 단계 쥡니다 bioconjugate 기법을 활용. 이 입자는 가장 인간의 종양 및 암 및 태 반 장애 치료에 태 반 trophoblasts 치료제의 대상된 배달에 대 한 새로운 도구를 구성 합니다.
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방법 논문
합성 및 Placental 콘의 황산 (plCSA)-지질 타겟팅-고분자 나노 입자
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
효과적인 암 치료 방법 감소 하 고 최소한의 조직 독성으로 종양을 제거 합니다. 적극적으로 대상 나노 암 치료 하는 유망한 접근 방식을 제공합니다. glycosaminoglycan placental chondroitin 황산 염 (plCSA)에 다양 한 암 세포와 태 반 trophoblasts 및 말라리아 단백질 VAR2CSA plCSA 바인딩할 수 있는 구체적으로 표현 된다. 암 세포와 태 반 trophoblasts plCSA 보고 placental chondroitin 황산 염 A 바인딩 펩 티 드 (BP plCSA), 말라리아 단백질 VAR2CSA에서 파생 또한 구체적으로 바인딩할 수 있습니다. 따라서, plCSA BP 활용 된 나노 입자는 인간의 암 및 placental trophoblasts 대상된 약물 전달에 대 한 도구로 사용 될 수 있습니다. 이 프로토콜에서 설명 하는 독 소 루비 (plCSA-DNPs); 로드 plCSA BP 활용 된 지질 고분자 나노 입자를 합성 하는 방법 단일 쥡니다 단계 및 bioconjugate 기술 방법에 의하여 이루어져 있다. 또한, plCSA-DNPs, 그들의 물리 화학적 특성 및 태 반 choriocarcinoma (JEG3) 셀에 의해 세포질 통풍 관을 결정 하는 포함 한 특성화를 위한 여러 가지 방법은 설명 합니다.
서론
효과적인 암 치료 방법 감소 하 고 최소한의 조직 독성으로 종양을 제거 합니다. 따라서, 선택적 종양을 대상으로 성공적인 치료 방법을 탐구 하는 열쇠입니다. 암 치료를 위한 유망한 기회를 제공 하는 나노 입자 그리고 다른 기능적인 그룹 분자 어셈블리 약물 효능을 강화 하 고 관련된 부작용1,2감소. 또한, 나노 시스템은 주로 수동 및 활성 대상 종양3연결할 대상 사용 합니다.
수동 타겟팅 나노 입자와 향상 된 침투성 및 종양 세포에 도달 하는 보존 (EPR) 효과의 타고 난 특성을 이용 한다. 양이온 리 종양 임상 응용4,,56에 다양 한 항 암 제 약물 전달에 성공적으로 사용 되었습니다. 잠재적인 효과적인 암 치료 효과도 불구 하 고 종양과 정상 조직에서 종양 세포를 구별 하는 무 능력에서 낮은 약물 농도 수동 타겟팅 나노7의 두 가지 주요 제한.
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프로토콜
1입니다. 재고 솔루션의 준비
- 초순의 100 mL와 절대 에탄올의 4 mL를 희석 하 여 4% 에탄올 용액을 준비 합니다. 4 ° c.에 솔루션 저장
참고: 초순 박테리아, 입자, 이온, 또는 nucleases 등 오염 물질 없이 물으로 정의 됩니다. 초순 까지의 18.2 ㏁, 낮은 음이온 오염 즉 대상 저항력과 물 정화 시스템에서 얻은 했다. - 20 mg의 콩 레 시 틴 4% 에탄올 용액 20 mL에 용 해 하 여 1 mg/mL 콩 레 시 틴 재고 솔루션을 준비 합니다. 4 ° c.에는 콩 레 시 틴 재고 솔루션 저장
- 100mg DSPE-말뚝-COOH의 4% 에탄올의 수성 해결책의 4 mL에 용 해 하 여 25 mg/mL DSPE 말뚝 (2000)-COOH 재고 솔루션을 준비 합니다. -20 ° c.에 재고 솔루션 저장
- 초순의 5 mL에 DOX의 50 밀리 그램을 용 해 하 여 10 mg/mL DOX 재고 솔루션을 준비 합니다. 어둠 속에서 4 ° C에 DOX 재고 솔루션을 저장 합니다.
- 20mg PLGA의 이기의 10 mL에 용 해 하 여 2 mg/mL PLGA 재고 솔루션을 준비 합니다. 4 ° c.에서 PLGA 재고 솔루션 저장
주의: 이기는 가연성 및 독성. 증기 두건에 주의 하며 적절....
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결과
이 프로토콜에서 PLGA, DSPE-말뚝-COOH와 콩 레 시 틴은 대표적인 폴리머, 지질-말뚝-COOH 공액 및 지질, 각각. EDC/NHS 기술과 쥡니다 메서드 를 통해 단일 단계 plCSA 대상 지질-폴리머 나노 입자의 합성은 그림 1에 나와 있습니다. 첫째, 조건 하에서 쥡니다, 콩 레 시 틴, PLGA와 DSPE-말뚝-COOH 자기 조립 형태의 코어-쉘 구조 DNPs. 핵심 PLGA와 캡슐화 된 DOX 이루어져, 셸 구성 DSPE-말뚝-COOH, 그리고 껍질과 코어의 인터페이스에는 콩 레 시 틴 단층. 다음,-COOH 그룹 DNP 표면에 노출 되는 펩 티 드 를 통해 EDC/NHS 기술을 합성 plCSA DNPs의-NH2 그룹으로 활용 했다.
이 프로.......
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토론
이 프로토콜에는 plCSA BP 활용 된 지질 고분자 나노 입자를 합성 한 효율적이 고 재현 가능한 방법을 제공 한다. 지질 고분자 나노 입자를 준비 하는 단일 단계 쥡니다 메서드는 재현할 수 빠르고 난방, vortexing, 또는 증발을 포함 하는 일반적인 nanoprecipitation 방법에서 다른. 따라서, 개발된 방법은 크게 합성 시간을 줄일 수 있습니다. 또한,이 프로토콜에 사용 된 EDC/NHS bioconjugate 켤레 펩 티 드 및 나노 입자에 항 체를 일반적으로 사용 하 고 편리한 기술입니다. 따라서, 조합 plCSA을 대상으로 지질-폴리머 합성 EDC/NHS bioconjugate 기술로 단일 단계 쥡니다 메서드의 나노 확장할 수 있습니다 임상 응용 프로그램에 대 한.
특정 절차는 성공적으로 합성 및 plCSA DNPs에 대 한 중요 합니다. 첫째, 레 시 틴, PLGA와 DSPE-말뚝-COOH의 상대 농도 지질 고분자 나노 입자 크기와 증가할수록 결정합니다.......
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공개 사항
X.F.와 B.Z.는 특허 PCT/CN2017/108646와 201710906587.6 님 민 plCSA 대상 나노 입자 합성 방법 및 응용 프로그램에 발명가. 잠재적인 충돌의 관심은 다른 작가 의해 공개 됐다.
감사의 글
이 작품에는 자연 과학 재단의 광둥 성 (2016A030313178), 국가 자연과학 기초 (81571445 및 81771617)와 중국의 개발 프로그램 (2016YFC1000402), 국가 핵심 연구에서 교부 금에 의해 지원 되었다 X.F. 및 X.F.에 심천 기본 연구 기금 (JCYJ20170413165233512)
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| plCSA 펩타이드 | 상하이 GL Biochem | 펩타이드 합성을위한 | 573518 |
| 에탄올 절대 | Sinopharm 나 | 노 입자 합성을위한 | 10009218 |
| 대두 레시틴 | Avanti Polar Lipids | 나노 입자 합성을위한 | 441601 |
| DSPE-PEG-COOH | Avanti Polar Lipids | 나 | 노 입자 합성 |
| 을위한 880125독소루비신 | 나노 입자 합성을 위한 | 체미컬 | 113424 |
| 아세토니트릴 | 상하이 링펑 | 나 | 노 입자 합성을 위한 |
| 1008621 PLGA | 시그마-알드리치 | 719897 | 나노 입자 합성을 위한 |
| 초음파 프로세서 | Sonics | VCX130 | 나노 입자 합성을 위한 |
| 원심분리기 필터 (MWCO 10 kDa) | 밀리포어 | 나노 입자 정제 | |
| 원심분리기 | 노 입자 정제 | 시그마 | 3-18KS |
| -[모르폴리노]에탄술폰산(MES)펩 | 타이드 접합용 | 시그마-알드리치 | M3671 |
| 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카르보디이미드 염산염(EDC) | 펩타이드 접합용 | 시그마-알드리치 | 3450 |
| N-하이드록시숙신이미드(NHS) | 펩타이드 접합용 | Sigma-Aldrich | 56480 |
| 투석 백 | 나노 입자 정제용 | Spectrum | 132592T |
| 세포 배양용 | PBS | Hyclone | SH30028.01 |
| 10mL 원심분리 튜브, 폴리프로필렌 | 나노 입자 합성용 | Aladdin | S-025 |
| 15mL 원심분리기 튜브, 폴리프로필렌 | Corning | 430791 | 다양한 응용 분야용 |
| 0.22 &무; m 멸균 주사기 필터 | 나노 입자 정제 용 | Millipore | SLGV033RB |
| 1ml 주사기, 폴리 프로필렌 | BD | 328421 | 나노 입자 합성용 |
| Malvern Zetasizer | Malvern | Nano ZS | 입자 크기 분석기 |
| 포스 포 텅스텐 산 | TEM | ||
| 그리드 | EMCN | BZ10024a | TEM |
| TEM용 UV-VIS 분광계 | Leagene | DZ0035 | |
| 투과 전자 현미경 | JEOL | JEM-100CXII | 입자 크기 분석기 |
| BCA 시약 A | Thermo Fisher Scientific | 23228 | BCA 분석용 |
| BCA 시약 B | Thermo Fisher Scientific | 23224 | BCA 분석용 |
| 96-Well Plate | Corning | 3599 | 어세이 |
| 플레이트 리더 | Thermo Fisher Scientific | Multiskan ™ | 위한 BCA 분석 |
| 12웰 플레이트 | 배양을 위한 | Corning | 3513 |
| JEG3 세포 | TCHu195 | 인간 태반 | |
| DMEM/F12 | Hyclone | SH30272.01 | 페놀 레드-프리 |
| 소 태아 혈청(FBS) | GIBCO | 10100 | 세포 배양을 위한 |
| 페니실린/스트렙토마이신 | GIBCO | 세포 배양을 위한 | 15070063 |
| 세포 흡수 | 형광 현미경 | OLYMPUS | CKK53 |
| 파라포름알데히드 | 상하이 링펑 | 1372021 | 세포 흡수를 위한 |
| DAPI | Sangon Biotech | A606584 | 세포 흡수를 위한 |
| 장착 매체 생명 | P36961 | 셀룰라 흡수를 위한 |
참고문헌
- Davis, M. E., Shin, D. M. Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer. Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771(2008).
- Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. Nanotechnology applications in cancer. Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).
- Jabir, N. R., et al.
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