이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.

방법 논문

시각화 Axonal 성장 콘 붕괴 교양된 마우스 신경에 있는 초기 아 밀 로이드 β 효과

7.2K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/58229

⸱

2018년 10월 30일

1Division of Neuromedical Science, Institute of Natural Medicine, University of Toyama

이 논문에서

요약

여기 아 밀 로이드 β (Aβ)는 뇌에서의 초기 효과 조사 하기 위해 프로토콜 제공 됩니다. 이것은 clathrin 중재 된 endocytosis 및 axonal 성장 콘의 붕괴 유도 하는 Aβ 보여준다. 프로토콜 axonal 성장 콘에 Aβ의 초기 효과 공부에 유용 하 고 알 츠 하이 머 병의 예방을 촉진 수 있습니다.

초록

아 밀 로이드 β (Aβ)는 Alzheimer의 질병 (광고)에 메모리 장애를 발생합니다. 치료제 광고 환자의 두뇌에서 Aβ 수준을 줄이기 위해 표시 되었습니다, 비록 이러한 메모리 기능을 향상 되지 않습니다. Aβ 메모리 손상의 모양 전에 뇌에 집계, 이후 Aβ를 대상으로 수 있습니다 이미 메모리 적자 전시 광고 환자 치료에 대 한 효율적. 따라서, Aβ 증 착으로 인해 다운스트림 신호 광고 개발 하기 전에 차단 합니다. Aβ 신경 네트워크 및 메모리 손상의 방해로 이어지는 axonal 변성을 유도 합니다. Aβ 독성의 기계 장치에 많은 연구 들이 있더라도, Aβ 독성의 소스를 알 수 없는 남아 있습니다. 소스를 식별 하려면 우리는 현미경 검사 법, 유전자 transfection, 라이브 셀 이미징 교양된 뉴런의 axonal 성장 콘에 Aβ에 의해 발생 하는 초기 변화를 조사 하기 위해 사용 하는 새로운 프로토콜을 제안 합니다. 이 프로토콜은 Aβ 억제 endocytosis의 Aβ 독성을 방지 시연 clathrin 중재 된 endocytosis axonal 성장 콘 성장 콘 붕괴 뒤에 유도 밝혔다. 이 프로토콜은 Aβ의 초기 효과 공부에 도움이 될 것입니다 하 고 보다 효율적이 고 예방 광고 치료로 이어질 수 있습니다.

서론

아 밀 로이드 β (Aβ) 예금 Alzheimer의 질병 (광고) 환자의 뇌에서 발견 되 고 메모리 장애2,,34로 이어지는 광고1 신경 네트워크를 방해 하는의 중요 한 원인으로 간주 됩니다. 많은 임상 약물 후보 아 밀 로이드 β (Aβ) 생산을 효과적으로 방지 또는 Aβ 예금을 제거 표시 되었습니다. 그러나, 아무도 AD 환자5에 메모리 기능을 개선에 성공 했다. Aβ는 메모리 장애6;의 발병 전에 뇌에 이미 입금 됩니다. 따라서, 환자의 두뇌에서 Aβ 수준 감소 전시 메모리 장애 수 있습니다 효과. Aβ 증 착은 전 임상 광고 환자; 그러나, 이러한 환자는 거의 신경 변성 및 메모리 적자6제시. Aβ 증 착 및 메모리 장애 사이의 지연 시간입니다. 따라서, 광고의 예방을 위한 중요 한 전략 광고, 이전에 메모리 적자의 개발의 초기 단계 동안 신호 Aβ 독성을 차단 합니다. Aβ 착 유도 축 삭 변성7,,89,10,11,12,13의 중단으로 이어질 수 있는 신경 네트워크 그리고 메모리 기능의 영구 장애입니다. 많은 연구 조사 Aβ 독성;의 메커니즘 예를 들어 광고 쥐 두뇌의 퇴 화 한 축 삭 autophagy14증가 표시 되었습니다. Calcineurin 활성화 Aβ 유도 axonal 변성15;의 가능한 메커니즘으로 보고 되었습니다. 그러나, 직접 트리거 axonal 변성의 알 수 없는 남아 있습니다.

이 연구는 성장 원뿔 이라고 axonal 엔딩의 붕괴에 초점을 맞추고. Axonal 성장 콘의 붕괴 semaphorin 3A와 ephrin A516,17,18,,1920같은 axonal 성장 방수 제에 의해 발생할 수 있습니다. 축소 같은 dystrophic axonal 엔딩 광고 환자21,22의 두뇌에서 관찰 되었습니다. 또한, 성장 콘 기능 실패 axonal 변성23을 자극 수 있습니다. 그러나, 그것 아니다 알려진 Aβ 성장 콘 붕괴를 유도 하는 여부. 따라서,이 연구는 교양된 신경에 있는 Aβ의 초기 효과 관찰 하 고 Aβ 유도 성장 콘 붕괴를 조사 하는 새로운 프로토콜을 선물 한다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

프로토콜

모든 실험 관심과 도야마 대학 스기타 캠퍼스에서 실험 동물의 사용에 대 한 지침에 따라 실시 했다 및 동물 관리 및 사용의 실험실 동물의 스기타 캠퍼스에 대 한 위원회에 의해 승인 된 대학교의 도야마 (A2014INM-1, A2017INM-1).

1. 붕괴 분석 결과

  1. 폴 리-D-리 코팅
    1. 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS)에 5 μ g/mL 폴 리-D-라이 신 (PDL)의 400 μ와 8 잘 문화 슬라이드 코트 하 고 37 ° C에서 밤새 그들을 품 어.
    2. PDL 솔루션을 제거 하 고 세척 3 번 증류수와 우물.
  2. 신경 문화24
    1. 신경 문화 매체 12% 말 혈 청, 포도 당 0.6%, 그리고 2 mM L-글루타민 (중형 A) microscissors와 배아 하루 14 (E14) ddY 쥐에서 갓 고립된 대뇌 외피가 말하다. 항생제를 추가 하지 마십시오.
      참고:이 프로토콜 ddY 마우스 사용 됩니다. 이것은 일본에서 일반적으로 사용 되는 outbred 긴장 이다. 이 신경 세포 문화 프로토콜 쥐 대뇌 피 질의 뉴런7,25도 적용할 수 있습니다.
    2. 3 분 87 x g에서 조직 원심
    3. 제거는 상쾌한. 다음은 펠 릿 0.05 %trypsin 2 개 mL를 추가 고 37 ° c.에 15 분 동안 품 어 매 5 분을 활용 하 여 혼합.
    4. 활용 하 여 매체와 혼합의 4 mL를 추가 합니다.
    5. 178 x g 3 분에 조직 원심
    6. 상쾌한, 제거 하 고 품 어 어 0.3 mg/mL 콩 트립 신 억제 물에에서 녹아 있는 PBS 37 ° c.에 15 분 동안 600 U/mL DNase와 조직 매 5 분을 활용 하 여 혼합.
    7. 부 화, 후 두 드려서 중간 A와 섞어 4 mL를 추가 합니다.
    8. 178 x g 3 분에 조직 원심
    9. 제거한 후에 상쾌한, 매체 A의 4 mL를 추가 하 고 세련 된 파스퇴르 피 펫과 조직 triturate.
    10. 70 µ m 기 공 크기 메쉬 triturated 조직 필터링. 여과 후 한 hemocytometer 셀의 밀도 계산 합니다.
    11. 문화 8 잘 문화에서 셀 104 셀/잘 매체 A와 x 0.8에 슬라이드 하 고 37 ° c.에 10% CO2 의 습도 분위기와 CO2 배양 기에서 그들을 유지 하는 것
    12. 후 경작의 4 h, 0.6% 포도 당, 신경 문화와 2 mM L-글루타민 (매체 B)에 대 한 포함 한 2% 보충으로 문화 매체를 교체 합니다.
      참고: 뉴런의 순수성은 약 75%,26위에서 설명한 대로.
  3. 붕괴 분석 결과27
    1. 상업적으로 얻은 전장 녹말 체 β1-42 (Aβ1-42) 0.5 m m의 농도에서 증류수에 녹이 고 7 일 동안 37 ° C에서 품 어. 부 화 후 사용까지 사용-30 ° C 냉동 고에서 집계 된 Aβ1-42 솔루션을 저장 합니다.
      참고:이 외피는 집계 및 Aβ27,,2829,30의 독성에 필요 합니다.
    2. 신경 문화 4 일 새로운 매체 B의 100 μ와 우물, 치료 후 1 시간에 대 한 Aβ1-42 또는 차량 솔루션 (증류수) 집계 0.5 μ M를 포함.
      참고: Aβ1-42의 효과 했다 복용량 의존 5 μ M, 0.1에서 증가 하 고 앞에서 설명한270.5 μ M에서 정점. Aβ1-42 신경 문화31의 3 일 후 1 시간에 대 한 치료에 의해 때 비슷한 결과 관찰할 수 있습니다.
    3. 문화 매체를 제거 하 고 즉시 뜨거운 접시에 37 ° C에서 1 시간에 대 한 PBS에 4% 자당을 포함 하는 4 %paraformaldehyde 뉴런을 수정.
    4. 고정, 후 PBS로 3 회 신경 세척 하 고 수성 설치 매체와 함께 탑재. 2-4 일 동안 4 ° C에서 설치 매체를 건조.
    5. 각에 거꾸로 한 현미경 20 X 건조 목적 렌즈의 전체 지역을 (7.8 x 9 m m2)를 캡처하십시오.
    6. 앞에서 설명한32,33단계 3 또는 4로 축 삭, 각 뉴런의 긴 neurites를 분류 합니다.
    7. 다음 기준에 따라 성장 콘 분류: 1) axonal 성장 콘 lamellipodia 부족 또는 2) 3 filopodia를 가진 것으로 간주 됩니다 축소 성장 콘,17설명한 대로.
      참고: 건강 한 성장 콘; 0 점으로 득점 하 축소 된 성장 콘 1 점으로 득점 된다. 각 치료에 대 한 점수 계산 하는 붕괴를 의미 합니다.

2. 아 밀 로이드 β Immunostaining

  1. 1.2 단계에서 설명한 대로 3 일 동안 마우스 대뇌 피 질의 뉴런을 문화.
  2. 집계 된 Aβ1-42와 치료 (5 μ M) 또는 CO2 배양 기에서 37 ° C에서 4 h에 대 한 차량.
  3. 매체를 제거 하지 않고 4 %paraformaldehyde 포함 하는 각 음에 PBS에 4% 자당의 동일한 볼륨을 추가 하 고 5 분 동안 뜨거운 접시에 37 ° C에서 문화를 유지.
  4. PBS에 4% 자당을 포함 하는 4 %paraformaldehyde 400 μ와 솔루션을 교체 하 고 1 시간에 대 한 핫 플레이트에 37 ° C에서 유지. 이 기정 프로토콜 이전 보고서34에서 수정 되었습니다.
  5. 3 회 PBS 가진 뉴런을 씻어.
  6. PBS에서 5% 정상 염소 혈 청으로 차단 합니다.
  7. 마우스 방지 아 밀 로이드 β 면역 글로불린 G와 뉴런 (IgG) (1:50) 및 1% 소 혈 청 알 부 민 PBS에 4 ° C에서 밤새 품 어.
  8. 3 회 PBS 가진 뉴런을 씻어.
  9. 형광 활용 된 이차 항 체 (1:400)와 1% 소 혈 청 알 부 민 PBS에서 2 h에 대 한 실 온에서 뉴런을 품 어.
  10. 3 회 PBS 가진 뉴런을 세척 하 고 수성 설치 매체와 함께 탑재.
  11. 거꾸로 현미경 B.에 40 X 건조 대물 렌즈를 사용 하 여 형광 이미지와 간접 조명으로 밝은 필드 이미지 캡처

3. axonal Immunostaining27

  1. 1.3.3 단계에서 설명한 대로 교양된 신경 고정 후 PBS로 3 회 신경을 씻어.
  2. 마우스 반대로 tau-1 뉴런을 품 어 IgG (1: 500), 토끼 방지 microtubule 관련된 단백질 2 (MAP2) 5% 정상 염소 혈 청, 그리고 0.3 %t -octylphenoxypoly-ethoxyethanol PBS에 4 ° c 하룻밤에 IgG (1: 500).
  3. 3 회 PBS 가진 뉴런을 씻어.
  4. 형광 활용 된 이차 항 체 (1:400)와 0.3 %t -octylphenoxypolyethoxyethanol PBS에 2 h에 대 한 실 온에서 뉴런을 품 어.
  5. 3 회와 함께 PBS, 뉴런을 세척 하 고 수성 설치 매체를 사용 하 여 탑재.
  6. 거꾸로 현미경 대답에 20 × 건조 대물 렌즈를 사용 하 여 형광 및 차동 간섭 콘트라스트 (DIC) 이미지를 캡처

4. 라이브 셀 이미징27

  1. PDL의 500 μ와 함께 요리를 유리 코트 (5 μ g/mL), 1.1.1 단계에서 설명한 대로.
    참고:이 프로토콜에서 수 제 유리 기반 요리 사용 되었다. 상업적으로 이용 가능한 유리 기반 요리 또한 라이브 이미징에 대 한 사용할 수 있습니다. 수 제 유리 기반 요리 다음과 같이 준비 되었다: 1) 35 m m 접시의 중앙에 지름에서 약 1.4 m m 구멍을 만들어 손 펀치, 고 2) 실리콘 접시의 뒷면에 유리 coverslip (22 m m의 직경) 첨부.
  2. 1.1.2, 단계에서 설명한 대로 증류수를 가진 격판덮개를 세척 하 고 3 x 104 셀/접시 1.2 단계에서 설명한 대로 중간 A에서 유리 접시에 대뇌 피 질의 뉴런 문화.
  3. 세포 배양의 4 일의 새로운 매체 B, 2 mL와 전송 매체 대체 후 접시에 거꾸로 현미경 A. 유지 37 ° c.에 10% CO2 의 습도 분위기에서 문화

5. endocytosis 실험

  1. 1.2 단계에 설명 된 대로 마우스 대뇌 피 질의 뉴런을 문화.
  2. 4 일 후, 새로운 매체 1 분 20 μ M 형광 막 프로브를 포함 하는 B의 100 μ 매체를 바꿉니다.
  3. Pipetting으로 1 μ 0.05 m m 집계 Aβ1-42 (마지막 0.5 μ M) 또는 차량 (증류수) 솔루션 및 믹스를 추가 합니다. 20 분 동안 품 어.
  4. 매체를 제거 하 고 세척 매체 B 37 ° c에 미리 데워 되었습니다와 두 번 웰 스
  5. 해결 하 고 세척, 1.3.3, 1.3.4 단계에 설명 된 대로 뉴런을 탑재.
  6. 형광 및 거꾸로 한 현미경 대답에 오일 렌즈 X 63 DIC 이미지 캡처
  7. 이미지 소프트웨어를 사용 하 여 각 건강 한 성장 콘에 형광 막 프로브-긍정적인 영역의 밀도 계량.

6. 유전자 Transfection

  1. 1.2 단계에서 설명한 대뇌 피 질의 뉴런을 준비 합니다. 1.2.1 1.2.10 단계를 완료 한 후 3 분 동안 178 x g에서 뉴런 원심.
  2. 제거는 상쾌한, 캘리포니아2 +의 4 개 mL를 추가-무료 및 Mg2 +-행 크 스 균형된 소금물 (HBSS CMF), 자유롭고 pipetting으로 혼합.
  3. 178 x g 3 분에 셀 원심
  4. 제거는 상쾌한 CMF HBSS 4 mL를 추가 하 고 pipetting으로 혼합. 1.2.10 단계에서 설명한 대로 다음 셀 밀도 계산 합니다.
  5. 1.5 mL 튜브를 1 분 동안 1,677 x g에서 원심 분리기 5 x 106 셀을 전송 합니다.
  6. 제거는 상쾌한 보충과 transfection 솔루션의 100 μ와 인코딩 EGFP 또는 EGFP AP180 C-말단, DNA 플라스 미드의 3 μ g을 추가 하 고 pipetting으로 혼합.
  7. 인증된 베트를 위의 솔루션 (단계 6.6)를 전송 및 제조업체의 프로토콜에 따라 transfect는 electroporator와 함께.
  8. Transfection, 직후에 멧 매체 A의 500 μ를 추가 하 고 솔루션 인증된 피펫은 1.5 mL 튜브에 전송. 1.2.10 단계에서 설명한 대로 다음 셀 밀도 계산 합니다.
  9. 1.2.11 및 1.2.12 단계에 설명 된 대로 잘/104 셀, x 0.8에서 8 잘 문화 슬라이드에 세포 문화.
  10. 1.3 단계에서 설명한 대로 세포 배양의 4 일 후 붕괴 분석 결과 수행 합니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

결과

이 프로토콜에서 Aβ1-42는 incubated 37 ° C에서 사용 하기 전에 7 일 동안 부 화 Aβ1-42의 독성 형태27,28,,3035생산 필요 했다 때문에. 이 부 화 후 Aβ의 집계 된 형태 (그림 1A)를 관찰 했다. Aβ1-42의 비슷한 인큐베이션 fibril 형태 Aβ36의 생산으로 보고 되었습니다. 치료 후이 집계 Aβ1-42와 함께, immunostaining Aβ,3537 의 유독한 올리고 머에 대 한 항 체와 함께 수행한...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

토론

이 연구에서 설명 하는 프로토콜 Aβ1-42 치료 후 axonal 성장 콘에 초기 현상의 관찰을 사용할 수 있습니다. Aβ1-42 유도 axonal 성장 콘 20 분 이내에 endocytosis 그리고 성장 콘 축소 치료의 1 시간 이내에 관찰 되었다. 이 endocytosis clathrin에 의해 아마 중재 했다. 이 프로토콜을 사용 하 여 억제 clathrin 중재 된 endocytosis의 Aβ1-42-유도 된 성장 콘 붕괴와 교양된 신경27axonal 변성을 방지 하기 위해 확인 되었다. 또한, clathrin 중재 된 endocytosis의 저해 감쇠 axonal 변성 Aβ1-42-유도 및 메모리 적자 vivo에서27. 이러한 결과 clathrin 중재 된 endocytosis 광고 방지를 위한 유망 치료 애비뉴 나타냅니다.

이 프로토콜 개발 되었다에서 축소 3A와 e...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

공개 사항

저자는 공개 상관이 있다.

감사의 글

이 작품은 부분적으로 JSP에서 연구 보조금 지원 (KAKENHI 18 K 07389), 일본, 다케다 과학 재단, 일본, 그리고 고바야시 제약, 일본.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
ddY 마우스SLC
8웰 배양 슬라이드팔콘354108
폴리 D 라이신Wako168-19041
배양 배지, Neurobasal 배지Gibco21103-049
하우스 세럼Gibco26050-088
포도당Wako049-31165
L-글루타민Wako074-00522
0.05% 트립신Gibco25300-054
DNase IWorthingtonDP
대두 트립신 억제제Gibco17075-029
70 µ 필터; m 메쉬 크기, 셀 스트레이너Falcon352350
B-27 보충제Gibco17504-044
CO2 인큐베이터AstecSCA-165DS
아밀로이드 &베타; 1-42Sigma-AldrichA9810
파라포름알데히드Wako162-16065
자당 Wako196-00015
수성 장착 매체, Aqua-Poly/Mountpolysciences18606-20
반전 현미경 ACarl ZeissAxio Observer Z1 AxioCam MRm, 히팅 유닛 XL S, CO2 모듈 S1 및 TempModule S1과 연결
Objective Plan-Apochromat 20xCarl Zeiss420650-9901
Objective Plan-Apochromat 63xCarl Zeiss440762-9904
Objective, CFI Plan Apo Lambda 40XNikon
anti-MAP2 IgGAbcamab32454
anti-tau-1 IgGChemiconMAB3420
anti-amyloid β 항체IBL10379클론 11A1
일반 염소 혈청Wako143-06561
소 혈청 알부민Wako010-25783
t-octylphenoxypolyethoxyethanolWako169-21105
AlexaFluor 594와 접합 염소 anti-mouse IgGInvitrogenA11032
AlexaFluor 488과 접합된 염소 anti-rabbit IgGInvitrogenA11029
핫 플레이트NISSINNHP-M30N
커버 유리피셔 사이언티픽12-545-85
35mm 접시IWAKI1000-035
실리콘 RTVShin-EtsuKE42T
핸드 펀치Roper WhitneyNo.
형광 멤브레인 프로브, FM1-43FXInvitrogenF35355
Ca2+- 및 Mg2+-free Hanks' Balanced Salt solutionGibco14175-095
Transfection solution, Nucleofector solutionLonzaVPG-1001
Electroporator, Nucleofector IAmaxa
도립 현미경 BKeyenceBZ-X710
이미지 소프트웨어, ImageJNIHhttps://imagej.nih.gov/ij/
XX

참고문헌

  1. Selkoe, D. J., Hardy, J. The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease at 25 years. EMBO Molecular Medicine. 8 (6), 595-608 (2016).
  2. Dickson, T. C., Vickers, J. C. The morphological phenotype of beta-amyloid plaques and associated neuritic changes in Alzheimer's disease. Neuroscience. 105 (1), 99-107 (2001).
  3. Hardy, J., Selkoe, D. J. The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics. Science. 297 (5580), 353-356 (2002).
  4. Perl, D. P. Neuropathology of Alzheimer's disease. Mount Sinai Journal of Medicine. 77 (1), 32-42 (2010).
  5. Graham, W. V., Bonito-Oliva, A., Sakmar, T. P. Update on Alzheimer's Disease Therapy and Prevention Strategies. Annual Review of Medicine. 68, 413-430 (2017).
  6. Jack, C. R. Jr, et al. Hypothetical model of dynamic biomarkers of the Alzheimer's pathological cascade. Lancet Neurology. 9 (1), 119-128 (2010).
  7. Kuboyama, T., Tohda, C., Komatsu, K. Neuritic regeneration and synaptic reconstruction induced by withanolide A. British Journal of Pharmacology. 144 (7), 961-971 (2005).
  8. Tohda, C., Urano, T., Umezaki, M., Nemere, I., Kuboyama, T. Diosgenin is an exogenous activator of 1,25D3-MARRS/Pdia3/ERp57 and improves Alzheimer's disease pathologies in 5XFAD mice. Scientific Reports. 2, 535(2012).
  9. Jawhar, S., Trawicka, A., Jenneckens, C., Bayer, T. A., Wirths, O. Motor deficits, neuron loss, and reduced anxiety coinciding with axonal degeneration and intraneuronal Abeta aggregation in the 5XFAD mouse model of Alzheimer's disease. Neurobiology of Aging. 33 (1), e129-e140 (2012).
  10. Postuma, R. B., et al. Substrate-bound beta-amyloid peptides inhibit cell adhesion and neurite outgrowth in primary neuronal cultures. Journal of Neurochemistry. 74 (3), 1122-1130 (2000).
  11. Tohda, C., Nakada, R., Urano, T., Okonogi, A., Kuboyama, T. Kamikihi-to (KKT) rescues axonal and synaptic degeneration associated with memory impairment in a mouse model of Alzheimer's disease, 5XFAD. International Journal of Neuroscience. 121 (12), 641-648 (2011).
  12. Tsai, J., Grutzendler, J., Duff, K., Gan, W. B. Fibrillar amyloid deposition leads to local synaptic abnormalities and breakage of neuronal branches. Nature Neuroscience. 7 (11), 1181-1183 (2004).
  13. Wirths, O., Weis, J., Kayed, R., Saido, T. C., Bayer, T. A. Age-dependent axonal degeneration in an Alzheimer mouse model. Neurobiology of Aging. 28 (11), 1689-1699 (2007).
  14. Sanchez-Varo, R., et al. Abnormal accumulation of autophagic vesicles correlates with axonal and synaptic pathology in young Alzheimer's mice hippocampus. Acta Neuropathologica. 123 (1), 53-70 (2012).
  15. Wu, H. Y., et al. Amyloid beta induces the morphological neurodegenerative triad of spine loss, dendritic simplification, and neuritic dystrophies through calcineurin activation. Journal of Neuroscience. 30 (7), 2636-2649 (2010).
  16. Campbell, D. S., Holt, C. E. Chemotropic responses of retinal growth cones mediated by rapid local protein synthesis and degradation. Neuron. 32 (6), 1013-1026 (2001).
  17. Jurney, W. M., Gallo, G., Letourneau, P. C., McLoon, S. C. Rac1-mediated endocytosis during ephrin-A2- and semaphorin 3A-induced growth cone collapse. Journal of Neuroscience. 22 (14), 6019-6028 (2002).
  18. Luo, Y., Raible, D., Raper, J. A. Collapsin: a protein in brain that induces the collapse and paralysis of neuronal growth cones. Cell. 75 (2), 217-227 (1993).
  19. Nicol, X., Muzerelle, A., Rio, J. P., Metin, C., Gaspar, P. Requirement of adenylate cyclase 1 for the ephrin-A5-dependent retraction of exuberant retinal axons. Journal of Neuroscience. 26 (3), 862-872 (2006).
  20. Wu, K. Y., et al. Local translation of RhoA regulates growth cone collapse. Nature. 436 (7053), 1020-1024 (2005).
  21. Benes, F. M., Farol, P. A., Majocha, R. E., Marotta, C. A., Bird, E. D. Evidence for axonal loss in regions occupied by senile plaques in Alzheimer cortex. Neuroscience. 42 (3), 651-660 (1991).
  22. Masliah, E., et al. An antibody against phosphorylated neurofilaments identifies a subset of damaged association axons in Alzheimer's disease. American Journal of Pathology. 142 (3), 871-882 (1993).
  23. Zhou, F. Q., Snider, W. D. Intracellular control of developmental and regenerative axon growth. Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological sciences. 361 (1473), 1575-1592 (2006).
  24. Teshigawara, K., et al. A novel compound, denosomin, ameliorates spinal cord injury via axonal growth associated with astrocyte-secreted vimentin. British Journal of Pharmacology. 168 (4), 903-919 (2013).
  25. Kuboyama, T., Tohda, C., Komatsu, K. Withanoside IV and its active metabolite, sominone, attenuate A beta(25-35)-induced neurodegeneration. European Journal of Neuroscience. 23 (6), 1417-1426 (2006).
  26. Tanabe, N., Kuboyama, T., Tohda, C. Matrine Directly Activates Extracellular Heat Shock Protein 90, Resulting in Axonal Growth and Functional Recovery in Spinal Cord Injured-Mice. Frontiers in Pharmacology. 9 (446), (2018).
  27. Kuboyama, T., Lee, Y. A., Nishiko, H., Tohda, C. Inhibition of clathrin-mediated endocytosis prevents amyloid beta-induced axonal damage. Neurobiology of Aging. 36 (5), 1808-1819 (2015).
  28. Pike, C. J., Walencewicz, A. J., Glabe, C. G., Cotman, C. W. In vitro aging of beta-amyloid protein causes peptide aggregation and neurotoxicity. Brain Research. 563 (1-2), 311-314 (1991).
  29. Uchida, N., et al. Yokukansan inhibits social isolation-induced aggression and methamphetamine-induced hyperlocomotion in rodents. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 32 (3), 372-375 (2009).
  30. Pike, C. J., Burdick, D., Walencewicz, A. J., Glabe, C. G., Cotman, C. W. Neurodegeneration induced by beta-amyloid peptides in vitro: the role of peptide assembly state. Journal of Neuroscience. 13 (4), 1676-1687 (1993).
  31. Kuboyama, T., Hirotsu, K., Arai, T., Yamasaki, H., Tohda, C. Polygalae Radix Extract Prevents Axonal Degeneration and Memory Deficits in a Transgenic Mouse Model of Alzheimer's Disease. Frontiers in Pharmacology. 8, 805(2017).
  32. Dotti, C. G., Sullivan, C. A., Banker, G. A. The establishment of polarity by hippocampal neurons in culture. Journal of Neuroscience. 8 (4), 1454-1468 (1988).
  33. Arimura, N., Kaibuchi, K. Neuronal polarity: from extracellular signals to intracellular mechanisms. Nature Reviews: Neuroscience. 8 (3), 194-205 (2007).
  34. De Felice, F. G., et al. Alzheimer's disease-type neuronal tau hyperphosphorylation induced by A beta oligomers. Neurobiology of Aging. 29 (9), 1334-1347 (2008).
  35. Izuo, N., et al. Toxicity in Rat Primary Neurons through the Cellular Oxidative Stress Induced by the Turn Formation at Positions 22 and 23 of Aβ42. ACS Chemical Neuroscience. 3 (9), 674-681 (2012).
  36. Fujiwara, H., et al. Uncaria rhynchophylla, a Chinese medicinal herb, has potent antiaggregation effects on Alzheimer's beta-amyloid proteins. Journal of Neuroscience Research. 84 (2), 427-433 (2006).
  37. Murakami, K., et al. Monoclonal antibody against the turn of the 42-residue amyloid beta-protein at positions 22 and 23. ACS Chemical Neuroscience. 1 (11), 747-756 (2010).
  38. Ford, M. G., et al. Simultaneous binding of PtdIns(4,5)P2 and clathrin by AP180 in the nucleation of clathrin lattices on membranes. Science. 291 (5506), 1051-1055 (2001).
  39. Tojima, T., Itofusa, R., Kamiguchi, H. Asymmetric clathrin-mediated endocytosis drives repulsive growth cone guidance. Neuron. 66 (3), 370-377 (2010).
  40. Ahmed, G., et al. Draxin inhibits axonal outgrowth through the netrin receptor DCC. Journal of Neuroscience. 31 (39), 14018-14023 (2011).
  41. Brennaman, L. H., Moss, M. L., Maness, P. F. EphrinA/EphA-induced ectodomain shedding of neural cell adhesion molecule regulates growth cone repulsion through ADAM10 metalloprotease. Journal of Neurochemistry. 128 (2), 267-279 (2014).
  42. Tojima, T., et al. Attractive axon guidance involves asymmetric membrane transport and exocytosis in the growth cone. Nature Neuroscience. 10 (1), 58-66 (2007).
  43. Ooashi, N., Futatsugi, A., Yoshihara, F., Mikoshiba, K., Kamiguchi, H. Cell adhesion molecules regulate Ca2+-mediated steering of growth cones via cyclic AMP and ryanodine receptor type 3. Journal of Cell Biology. 170 (7), 1159-1167 (2005).
  44. Biswas, S., Kalil, K. The Microtubule-Associated Protein Tau Mediates the Organization of Microtubules and Their Dynamic Exploration of Actin-Rich Lamellipodia and Filopodia of Cortical Growth Cones. Journal of Neuroscience. 38 (2), 291-307 (2018).
  45. Kuboyama, T., et al. Paxillin phosphorylation counteracts proteoglycan-mediated inhibition of axon regeneration. Experimental Neurology. 248, 157-169 (2013).

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재인쇄 및 허가

태그

Tau 1MAP 2
시각화 Axonal 성장 콘 붕괴 교양된 마우스 신경에 있는 초기 아 밀 로이드 β 효과
문의하기
도서관에 추천하기

개인정보 처리방침

이용 약관

정책

저작권 © 2026 MyJoVE Corporation. 모든 권리 보유.