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방법 논문

감기 응답 MicroRNAs의 연구에 대 한 호모-그리고 수 박 및 호리병박 사이 Heterografts를 생성

7.3K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/58242

⸱

2018년 11월 20일

 ,  ,  ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

여기 우리는 효율적으로 만들기 위한 호모-수 박, 병 조롱 박, 감기 응답 microRNAs의 조사에 대 한 조직 샘플링, 데이터 생성 및 데이터 분석의 방법 이외에 사이 heterografts 상세한 프로토콜을 제시.

초록

MicroRNAs (miRNAs)는 작은 비 코딩 RNAs의 약 20-24 생 nt, 알려진 식물 개발 및 적응에 중요 한 역할을. 보여주는 특정 miRNAs의 식을 접목 때 변경 되는 축적 증거는 biotic 및 abiotic 스트레스에 작물 허용 오차를 개선 하기 위해 농부에 의해 일반적으로 사용 하는 농업 연습. 호리병박은 많은 다른 주요 cucurbits, 수 박 등, 하나는 후자에 대 한 가장 널리 사용 되 감지의 렌더링에 비해 본질적으로 기후 탄력 자르기. 높은 처리량 시퀀싱 기술의 최근 발전 감기 응답 miRNAs와 heterograft 장점;에 그들의 기여를 조사 하기 위해 좋은 기회를 제공 하고있다 그러나, 적절 한 실험 절차는이 목적에 대 한 필수. 여기, 우리는 효율적으로 호모-및 감기 취약 수 박과 조직 샘플링, 데이터 생성 및 데이터 분석의 방법 이외에 감기 허용 호리병박 사이 heterografts를 생성 하기 위한 상세한 프로토콜을 제시. 제시 메서드는 또한 다른 식물 이식 시스템가 열, 가뭄, 염 분 등 다양 한 환경 스트레스에 따른 miRNA 규정에 대 한 유용 합니다.

서론

접목은 오래 고용 농업 기술로 개선 작물 생산 그리고 공차 biotic 및 abiotic 스트레스1,2,3. Heterografting 시스템에서 엘리트 감지 수 있습니다 식물의 물과 양분 통풍 관을 강화, 강화 토양 병원 균에 저항 하 고 금속 독성4,5,이 이식 된 향상 된 부여 수 있습니다 부정적인 영향을 제한 성장 활력 그리고 환경 스트레스를 증가 허용입니다. 대부분의 경우에서 heterografting 수 있습니다 또한 과일 자질 향상 된 과일 맛과 건강 관련 화합물6,7의 증가 콘텐츠를 선도 하는 원 예 식물에 영향을. Scion는 rootstock 사이 phytohormones, RNAs, 펩 티 드, 단백질의 장거리 전송 성장과 개발 프로그래밍 scion 식물8,9의 변조 하는 근본적인 메커니즘입니다 발견 되었습....

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프로토콜

1. 살 균 및 발 아 씨앗

  1. 표면 살 균, 병 조롱 박 씨앗 가끔 교 반, 물 온도 40 ° c.에 떨어질 때까지 58 ° C에 물으로 채워진 500 mL 비 커에 담가
  2. 한편, 나일론 가방 그리고, 소독, 토 탄 토양의 3 kg을 넣어 압력솥 120에서 ° C/0.5 MPa 20 분.
  3. 4-5 시간 더 없는 감동 병 조롱 박 씨앗을 몸을 담글 유지.
    1. 물에는 실내 온도 도달 하면, x-증류수와 함께 3 x 2 씨앗을 씻어.
    2. 과잉의 물을 배수 하 고 어둠 속에서 성장 챔버에 28 ° C에서 거 즈 가방에 새싹 씨앗을 허용.
    3. 발 아, 후 소독된이 탄 토양으로 채워진 플라스틱 냄비 (지름에서 6cm)에 씨앗을 뿌린.
  4. 때 병 조롱 박 묘 두 병합된 cotyledons 개발, 단계 1.1-1.3 수 박 씨앗을 반복 합니다.
    참고:이 시간 관리 접 순과 rootstock의 크기 잘 성공적인 접목에 대 한 일치를 보장 합니다.

2. 묘 종 성장과 접목

  1. 온도 28 ° C (빛) 낮에 밤 동안 22 ° C에서 (어두운)로 유지 16 h 라이트 /8-h 어두운 주기와 성장 챔버에 묘 ....

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결과

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그림 2: 실내 온도 및 감기 스트레스 조건에서 다양 한 이식의 고기. (한)이이 패널이 보여줍니다 호모-및 heterografted 묘 실 온에서 제어. (b)이이 패널 호모-및 heterografted 묘 목 감기 치료의 48 h 후에 보여준다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

설명한 방법을 사용 하 여, 우리가 획득 접목에 대 한 98.......

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토론

이 프로토콜에서 우리 자세히 호모-고 수 박 및 호리병박 사이 heterografts 고 재현 방법 설명. 필요한 특정 장비,이 방법은 매우 운영 하 게 쉬운 이며 일반적으로 접목의 매우 높은 생존 율을가지고. 메서드 또한 수 박, 오이, 호박 사이 다른 cucurbits에 대 한 이식을 만들기 위해 사용할 수 있습니다.

그것은 rootstock 및 접 순의 상대적 크기 (나이)은 성공적인 이식 ( 프로토콜의 단계 2.2)를 만들기 위해 중요 한 지적 가치가 있다. 우리는, 사용 rootstock scion에 비해 너무 큰 했다, 이식 연합 있었다면 양식에 더 어려운 scion의 줄기는 다소 빈 때문에 관찰. 우리의 이전 proteomic 데이터31에 따라, 컨트롤로 자동 이식할된 접 순 및 자체 이식할된 rootstock의 포함이 좋습니다 ( 프로토콜의 단계 2.3)에 게, .......

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공개 사항

저자는 공개 없다. 작은 RNA 시퀀싱 데이터 취득 번호 SRP136842에서 은행에 입금 됩니다.

감사의 글

이 작품은 국립 자연 과학 재단의 중국 (31772191), 강성 (2017 C 32027) 공익에 대 한 연구 프로젝트, 키 과학 프로젝트의 식물 Breeding 절 (2016 C 02051)에서 및을 위한 국가 프로그램에 의해 지원 되었다 최고 수준의 젊은 전문가 (P.X.)의 지원.

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
TRIzol 시약Invitrogen15596026
RNA-free DNase ITakaraD2270A
Truseq Small RNA sample prep KitIlluminaRS-200-0012
2100 BionalyserAgilent5067
DNA PolymeraseThermo Fisher ScientificF530S
UEA sRNA 워크벤치 2.4-plant 버전  (소프트웨어)NANAhttp://srna-workbench.cmp.uea.ac.uk/
Rfam 11.0 데이터베이스 ( 웹사이트)NANA http://rfam.janelia.org
miRBase 22.0 ( 웹사이트)NANA http://www.mirbase.org/
MIREAP(소프트웨어)NANA https://sourceforge.net/projects/mireap/
TargetFinder ( 소프트웨어)NANAhttp://targetfinder.org/

참고문헌

  1. Schwarz, D., Rouphael, Y., Colla, G., Venema, J. H. Grafting as a tool to improve tolerance of vegetables to abiotic stresses: Thermal stress, water stress and organic pollutants. Scientia Horticulturae. 127, 162-171 (2010).
  2. Li, Y., et al. Mechanisms of tolerance differences in cucumber seedlings grafted on rootstocks with different tolerance to low temperature and weak light stresses. Turkish Journal of Botany. 39 (4), 606-614 (2015).<....

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