방법 논문

절단 및 파라핀 끼워 넣어진 조직 단면에 대 한 부동 방법

DOI:

10.3791/58288

⸱

2018년 9월 5일

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Life Science, Nanchang University, 2Queen Mary School, Medical Department, Nanchang University, 3School of Life Science, Nanchang University

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

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여기, 선물이 파라핀 단면 개선 하는 프로토콜. 이 메서드는 절단 하 고 종래의 방법에 필요한 전송 프로세스를 피하기 위해 간단한 온도 챔버를 사용 하 여 부동을 결합 합니다. 그 결과, 효율과 그대로 파라핀 섹션 수가 크게 개선 했다.

초록

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파라핀 끼워 넣어진 조직의 단면 조직학 및 병 리에 널리 사용 됩니다. 그러나, 그것은 지루한입니다. 이 방법을 개선 하기 위해, 여러 상업 회사 유체 물을 사용 하 여 복잡 한 섹션 전송 시스템을 고안 했다. 단순화 하기 위해이 기술을, 우리가 만든 결합 절단 및 간단한 항 온 챔버; 내 부동 수 제 장비를 사용 하 여 간단한 방법 따라서, 섹션 자동으로 물 표면에 물 목욕을 입력합니다. 성인 쥐 두뇌, 성인 마우스 신장, 배아 마우스 두뇌, 및 성인 zebrafish 눈에서 해 마는 비교에 대 한 전통적인 파라핀 단면 및 제시 방법 모두를 사용 하 여 절단 했다. 통계 분석이 보여줍니다 우리의 개선된 방법 시간을 저장 하 고 높은 품질 섹션을 생산. 또한, 짧은 시간에 전체 견본의 파라핀 단면 주니어 연산자에 대 한 쉽습니다.

서론

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형태학 연구 생물학 연구에서 중요 하다입니다. 새로운 기술 얼룩 뒤에 그들의 목표는 전체 조직 또는 생물1,2,3, 얇은 섹션으로는 시료를 절단에서 직접 관찰 하는 연구를 허용 했다, 남아 있다 기본 메서드 fornot 유일한 조직 형태 뿐만 아니라 조직에서 직접 대상으로 하는 단백질. 가벼운 현미경 검사 법 사용 하 여 세 가지 섹션 유형: 파라핀, 냉동, 그리고 semithin. 비록 cryosectioning 조직 antigenicity을 보호 하는 것이 일반적 이며 견본 준비는 간단 하다, 가난 하 고 얇은 단면4,5에 대 한 부적 절 한 유지 조직 형태가 이다. 파라핀 단면 전시 잘 보존 된 형태에 대 한 가장 자주 사용 되는 방법입니다. 표본은 완전히 탈수 하 고 왁 스에 포함 된, 파라핀 블록 무기한으로 저장할 수 있습니다. 또한, 파라핀 단면 얇은 섹션 추가 실험에서 생물학 프로브 액세스를 개선 하 고 셀 레이어 오버레이 Z 방향으로 감소 생산 합니다.

그러나....

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프로토콜

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여기에 설명 된 모든 방법은 동물 관리 및 사용 위원회의 남 창 대학에 의해 승인 되었습니다가지고.

1. 장비를 조립 하 고는 톰을 연결

  1. 디자인 요구 사항 (보충 그림 1) 당 매개 변수.
  2. 아크릴 보드 제조에 현지 공장에 매개 변수를 제출 합니다.
  3. 순서 대로 모든 부품을 조립: 클로 프롬을 사용 하 여 결합 7 상업 아크릴 보드 탱크로 섹션 채널 및 물 목욕 (그림 1).
    주의: 클로 프롬 때 그것은 빛과 산소 독성 물질을 생성 합니다. 증기 두건에서 장치를 조립 한다.
  4. 아크릴 보드 #1 (그림 2A, 화살촉)에 구멍을 통해 전기 요소를 설치 합니다.
  5. 온도 컨트롤러를 설치 하는 전기 드릴을 사용 하 여 #2 아크릴 보드에 작은 구멍을 만들고 온도 검출기 (그림 2A, 화살표)를 설치 합니다. 탱크 (그림 2A

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결과

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개선된 방법 그대로 파라핀 섹션의 수를 증가 했다. 성인 마우스 hippocampal 조직, 성인 마우스 신장, 배아 마우스 두뇌, 그리고 zebrafish 눈에이 새로운 방법을 테스트 했습니다. 물 탱크에 추가 되었다 그리고 40.0 ° c 38.0 ° C 사이 수 온 유지 되었다 순차적으로 준비 후 조직 샘플, 그들은 구분 하 고 기존의 단면에 비해 했다. 새로운 메서드는 섹션 손실을 피할 하 고 성인 마우스 해 마, 성인 마우스 신장, E15.5 마우스 두뇌, 및 성인 zebrafish 눈 (그림 4A4c, 4E, 4 G)에 그대로 섹션의 비율. 결론적으로, 우리의 방법 섹션 손실을 방지 하 고 견본 당 더 많은 그대로 섹션을 수확 하 여 단면 개선.

개선된 방법 견본 당 소.......

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토론

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파라핀 섹션 형태를 개선 하 고 기존의 파라핀 단면 동안 시간을 낭비의 문제를 해결, 우리는 향상 된 파라핀 단면 절단 및 전개 방법을 만들었습니다. 이 향상 된 방법은 간단한 장비 섹션 채널, 물 목욕, 온도 감지 스위치 히터에 의존 합니다. 섹션 리본 섹션 채널을 통해 물 목욕을 입력 하 고 자동으로 절단 하는 동안 펼쳐져. 따라서,이 방법은 파라핀 품질과 효율성, 파라핀 성인 마우스 해 마, 성인 마우스 신장, E15.5 마우스 두뇌, 및 성인 zebrafish 눈의 단면에 의해 확인 된 단면을 향상 시킵니다.

전통적인 파라핀 단면 동안 컬링 섹션을 피하기 위해, 많은 조정 되었습니다, 조직 표면 보습, 왁 스 블록을 냉각, 습도, 증가 및 cryosectioning6,7, 결합 등 8; 그러나, 이러한 조.......

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공개 사항

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저자는이 장치에 대 한 특허를가지고 하 고 아무 경쟁 관심사를 선언 합니다.

감사의 글

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이 작품은 국립 자연 과학 재단의 중국 (보조금 번호 31400936, 31460260)에 의해 지원 되었다, 자연 과학 재단의 장시 성 중국 (20171BAB215020). 우리는 또한이 작업을 지원 하기 위한 난창 대학과 런던 퀸 메리 대학 간의 공동 프로그램을 감사 합니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
인큐베이터Boekel Scientific133000-2
에탄올 Sinopharm 화학 시약 Co., 뚜껑64-17-5
자일렌 Sinopharm 화학 시약 유1330-20-7
Paraplast라이카39601006
가열 파라핀 임베딩 모듈라이카
상업용 아크릴 보드
트리클로로 메탄Sinopharm 화학 시약 유한67-66-3
관형 전기 발열체 (12 V 200 W)
온도 조절기(12 V 120 W)MingsuoXH-W3002
로터리 마이크로톰 라이카
중성 실리콘 실란트마이크로톰 나이프 홀더로 수로를 연결
전압 변압기DearllS-250-12
일회용 블레이드Accu-Edge4689
HematoxylinBaso Diagnostics Inc.BA-4025
에오신 바소 진단 Inc.BA-4025
MicroslideSail Brand7105
중립 발삼Sinopharm 화학 시약 Co., 뚜껑10004160
커버슬립 Citoglas10212424C
현미경Carl Zeiss
염산Xilong Chemical7647-01-0
파라핀 섹션용 수조Leica
HistoCore Arcadia C - Cold PlateLeica
파라핀 방제 스프레이 Thermo Scientific9990420
한 뚜껑 뚜껑

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chung, K., Deisseroth, K. CLARITY for mapping the nervous system. Nature Methods. 10 (6), 508-513 (2013).
  2. Fujita, S. Analysis of neuron differentiation in the central nervous system by tritiated thymidine autoradiography. Journal of Comparative Neurology. 122 (3), 311-327 (1964).
  3. Mironov, V., Boland, ....

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