식별, 조직학 특성화 및 체 외 3D 회전 타원 체 문화 모델에 대 한 마우스 전립선 돌출부의 해 부

Summary

유전자 조작된 생쥐 전립선 암 메커니즘을 조사를 위해 유용한 모델이 있습니다. 여기를 식별 하 고 마우스 비뇨 생식 기 시스템에서 전립선 엽 해 부, 조직학에 따라 구분 하 고 분리 다운스트림 분석에 대 한 spheroids로 기본 전립선 세포에는 생체 외에서 문화 프로토콜 선물이.

Abstract

유전자 조작된 마우스 모델 (GEMMs) 인간의 암, 전립선 암 (PCa) 등의 대부분의 종류를 조사에 대 한 효과적인 전 임상 모델 역할을 합니다. 해부학 및 조직학 마우스 전립선의 이해 하는 것이 효율적인 사용과 같은 동물 모델의 적절 한 특성에 대 한 중요 합니다. 마우스 전립선 엽 각각 그들의 자신의 특성의 4 가지 쌍 있다. 이 문서에서는 적절 한 해 부 방법 및 질병 분석에 대 한 마우스 전립선 엽의 식별 합니다. 후 해 부, 전립선 세포 배양 체 외에 기계적 이해에 대 한 추가 될 수 있습니다. 마우스부터 전립선 1 차 셀 그들의 일반적인 특성을 잃게 하는 경향이 때 교양 생체 외에서우리는 개요 여기 세포를 분리 하 고는 생리 보존에 대 한 효과 3D 회전 타원 체 문화로 그들을 성장 하는 방법 셀의 특성입니다. 이러한 3D 문화 세포 형태학 및 조사 근처 생리 적 조건에서 동작 변경 수준 및 주요 단백질 및 경로 개발에 참여의 지 방화는 질병의 진행을 분석 및 보고에 사용할 수 있습니다. 약물 치료에 응답 합니다.

Introduction

사회 과학 수십 년 동안 인간의 암 개발의 복잡 한 메커니즘을 명료 하 게 시도 되었습니다. 반면 잠재적인 핵심 선수 및 마약 대상 환자 세포와 조직 연구 시작, 종종 이러한 결과의 변환 응용 프로그램 전 임상 동물 모델의 사용을 해야 합니다. 유전자 조작된 생쥐 모델 (GEMMs) 모델 인간의 암 마우스 모델의 인간 암 컨소시엄 (NCI-MMHCC), 설명 및 마우스 암의 특성을 통합 하는 위원회의 설립 이후 꾸준히 상승 했다의 사용 과학자 들은 전세계^1,2에 대 한 모델. 마우스 모델 개발, 진행, 치료에 응답을 이해 하기 위한 암 대부분의 종류의 전 임상 연구에서 기계 론 적인 연구에 대 한 필요성을 충족 하 고 저항³인수.

전립선 암은 남성, 모든⁴이상 160000 남자에 영향을 미치는 가장 일반적으로 발생 한 암이 이다. 적극적인 형태의 질병 생활 매년 수천 수만의 주장. 그러나, 질병의 진행의 메커니즘은 여전히 가난 하 게 이해 된다. 고급 전립선 암 환자⁴에서 높은 사망 율 알 수 있듯 고급 및 전이....

Protocol

여기에 설명 된 모든 마우스 실험 SUNY Upstate 의학 대학에서 기관 IACUC 승인 프로토콜에 명시 된 지침에 따라 수행 했다.

1. 비뇨 생식 기 시스템 (UGS) 해 부

참고: 회로도 그림 1에 표시 됩니다.

1. CO₂ inhalational 안락사 메서드 또는 다른 승인 된 기술을 사용 하 여 3 개월 남성 C57BL/6 마우스 안락사
   참고: 3과 12 개월의 나가 사이 쥐 실험을 위해 성공적으로 사용할 수 있습니다. 이전 마우스 (> 6 개월) 대부분 맑게 될 필요가 있을 것 이다 UGS 주위에 더 많은 지방을 해야한다. 식별 및 돌출부의 분리는 종종 3 개월 보다 젊은 쥐에서 어려운. 다른 긴장 실험, 또한을 위해 사용할 수 있습니다.
2. 그것의 뒤에 마우스를 놓고 동물의 복 부 측 노출 되도록 핀을 사용 하 여 다리를 확보 합니다.
3. 마우스의 복 부에 70% 에탄올을 스프레이 하 고 그것을 깨끗 하 게 닦아.
   참고: 절 개는 필요 하지 않습니다 하기 전에 복 부 머리를 면도.
4. 중간 무딘 집게의 쌍에서 복 부 근육 층과 함께 피부를....

Results

마우스 전립선 엽 확인 될 수 있다 고 정액 소포 및 요도 위치를 사용 하 여 해 부. 마우스 전립선 4 쌍 dorsally 있는 돌출부의 ventrally 정액 소포 및 요도 구성 됩니다. 그림 4a 와 4b (맨 위) 그대로 전립선, 정액 소포 및 요도의 등 쪽과 복 부 뷰를 표시합니다. 하단 패널 (그림 4 c 및 4 d) 다른 엽 식별에 대 한 설명을 표시 합니다. 돌출부는 3 개월 어린 쥐에서 분리 수 있습니다.

다른 전립선 엽 조직학 (그림 5)에서 크게 다르다. 모든 마우스 전립선 엽 분 비 상피 세포; 둘러싸여 루멘의 구성 하는 여.......

Discussion

이 문서는 마우스 전립선의 해 부 및 개별 돌출부의 식별 방법을 설명합니다. 또한 생체 외에서 분석에 대 한 3 차원 문화에 마우스 전립선 세포 배양에 대 한 프로토콜이입니다.

해 부 프로토콜의 중요 한 단계가입니다 (1) 마우스에서 전체 UGS를 수확 하 고 분리 해 부 현미경 아래 개별 기관. 전립선 조직 이며 매우 작은 UGS;의 나머지 부분에 의해 둘러싸인 따라서, 그것은 불가능 사실상 그대로 돌출부의 모든 4 개 쌍을 조달 하는 동안 신체 구멍에서 직접 장기를 수확 합니다. 따라서, 그것은 마우스에서 전체 UGS를 수확 하 고 전립선을 추출 진행 하는 것이 중요입니다. 그것은 또한 (2)이이 프로토콜에 중요 한 시기의 단계를 수행 하지만 세심 한 유지. 시간은 본질의 해 부 동안 조직 저하를 최소화 하기 위하여 이다. 마우스에서는 UGS를 추출에 대 한 여기에 설명 된 특정 기술 대안에 비해 더 빨리 하 고는 것이 좋습니다. 전체 해 부와 엽 격리 절차는.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
마우스 수술 기구(마우스 해부 키트)	World Precision Instruments	MOUSEKIT
해부 현미경
RPMI 배지	Thermofisher Scientific	11875093
해부 배지(DMEM + 10%FBS)	Thermofisher Scientific	11965-084
소 태아 혈청	Thermofisher Scientific
PBS (Phosphate buffered saline)	Thermofisher Scientific	10010031
콜라겐 분해 효소	Thermofisher Scientific	17018029	RPMI로 10배 (10mg/ml) 제조, 여과 살균, 분취 및 -20°C에서 보관; C
트립신-EDTA (0.05%)	Thermofisher Scientific	25300054
DNase I	시그마-알드리치	10104159001  ROCHE
주사기 및 바늘	Fisher Scientific
Fisherbran  멸균 세포 여과기, 40μ m	Fisher Scientific	22-363-547
PrEGM BulletKit	Lonza	CC-3166	모든 구성 요소, 부분 표본을 추가하고 -20°C에서 보관합니다.
Matrigel 멤브레인 매트릭스	Thermofisher Scientific	CB-40234
Dispase II 분말	Thermofisher Scientific	17105041	PrEGM에서 10x 재고(10mg/ml)를 만들고 필터 살균, 분취 및 -20°에서 보관합니다. 씨