여기, vivo에서 microdialysis 뇌 파 기록 함께에서 간 질 및 간 질 비 쥐의 복 부 해 마에 aspartate 및 조미료 자료를 분석 하는 방법을 설명 합니다. Extracellular 농도 aspartate 및 조미료의 질병의 다른 단계와 상관 될 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
Microdialysis은 동작 또는 병리학 (예를 들어, 발작의 특정 결과와 뇌 틈새 공간으로 확산 하는 신경학 활성 물질의 변화를 상관 관계가 확고 신경 과학 기법 대 한 간 질). 간 질을 공부, microdialysis 기술 단기 또는 장기 심지어 비디오-electroencephalography (뇌 파) 자발적인 발작 빈도, 심각도, 진행 및 클러스터링을 평가 하기 위해 모니터링 종종 결합 됩니다. 결합 된 microdialysis 뇌 파 여러 메서드 및 악기의 사용을 기반으로 합니다. 여기, 우리가 쥐 모델에서 간 질의 자연 역사의 여러 단계에서 시간이 지남에 모니터 조미료와 aspartate 유출 녹음 지속적 비디오 뇌 파 vivo에서 microdialysis를 수행. 결합 된 이렇게 페어링 신경 전달 물질 방출에 변화 질병 개발 및 진행의 특정 단계를 수 있습니다. Dialysate는 아미노산 농도 액체 크로마토그래피에 의해 결정 되었다. 여기, 우리가 설명 방법 및 개요 주 예방 조치 한 비보에 microdialysis 동안 해야한다-stereotaxic 수술에 특히 주의 microdialysis, 깊이 중 기저 및 높은 칼륨 자극 뇌 파 전극 뇌 파 기록 및 aspartate 및 조미료는 dialysate에 고성능 액체 크로마토그래피 분석. 이 방법을 적용할 수 있습니다 aspartate 및 두뇌에 조미료의 생리 적 농도의 변화를 유도 하는 약물 이나 질병의 다양 한 테스트. 적절 한 분석 분석 결과의 여부에 따라 그것은 사용할 수 있습니다 더 이상 뇌 파 기록을 동시에 채용 하는 경우 다른 수용 성 분자를 테스트 하.
서론
기능 장애 조미료-중재 흥분 성의 GABAergic 금지 neurotransmission 측 두 엽 간 질 (TLE)에 자발적인 발작의 결과에 대 한 통찰력을 제공 하려면 우리는 체계적으로 extracellular 농도의 모니터링 GABA1 와 나중 자연 질병의 다양 한 시간 포인트에서 쥐의 복 부 해 마에 있는 microdialysis에 의해 조미료와 aspartate2 수준 과정, 즉, 개발 및 간 질의 진행 하는 동안. 우리는 TLE pilocarpine 모델 쥐, 모방 행동, electrophysiological 및 histopathological 변경3,4 면에서 매우 정확 하 게 질병을 이용 했다 그리고 우리 상관의 아미노 dialysate 농도 그것의 다른 단계에 산: epileptogenic 모욕, 대기 시간 단계, 첫 번째 자발적인 발작과 만성 phass5,,67시간 후 급성 단계. 질병 단계 프레임 장기 ....
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프로토콜
페라라 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 대학에 의해와 이탈리아 보건부에 의해 모든 실험 절차 승인 (승인: D.M. 246/2012-B) 유럽 공동체에 설명 된 지침에 따라 1986 년 11 월 24 일 (86/609/EEC)의 위원회 지시문입니다. 이 프로토콜은 특히 쥐 뇌 dialysates microdialysis 세션 간 질 및 간 질 비 쥐의 뇌 파 제어에서 얻은에 조미료와 aspartate 결정에 대 한 조정 됩니다. 여기는 자료의 많은 수 있습니다 쉽게 대체 뇌 파 기록 또는 microdialysis에 대 한 그의 실험실에서 사용 하는 그.
1. Microdialysis 프로브-전극 장치 조립
- 3-채널 2 트위스트 전극 (등록 전극의 길이 잘라 적어도 20 m m와 긴 전극 접지 10 cm) 사용 하 고 장치를 준비 하는 가이드 정 커플. 3-채널 전극과 가이드 정 투 그림 1A에대 한 예제를 참조 하십시오-1B.
- (그림 1C)을 제거 하 고 동물에 microdialysis 프로브에 대 한 그것의 스위치의 순간에 (그림....
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결과
프로브 복구
평균 복구 (즉, 유리병 솔루션의 동일 볼륨에 콘텐츠의 perfusate에 평균 아미노산 콘텐츠) 되었고 2 μ/min와 조미료 3 μ/분 6.32 ± 0.64의 유량에서 15.49 ± 0.42 .89 ± 0.36 %2의 흐름 율에 Μ/분 고 10.13 ± 0.51 aspartate cuprophane 막 프로브를 사용 하는 경우에 대 한 3 μ/분. 평균 복구 조미료 3 μ/분 6.55 ± 1.07의 2 μ/min 흐름 속도로 13.67 ± 0.42% 이었고 2 μ/min와 aspartate 3 μ/분 8.49 ± 0.15의 흐름 율 14.29 ± 0.62 %polyacrylonitrile 막 프로브를 사용 하는 경우 (그림 4A-4B). 그것은 명확 하.......
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토론
이 작품에서는, 우리는 TLE의 실험 모델에서 연속 비디오-뇌 파 기록 microdialysis와 결합을 수행 하는 방법을 보여줍니다. 비디오-뇌 파 기록 기법 올바르게 다른 동물에 있는 질병의 진행 단계를 진단 하는 데 사용 됩니다 및 microdialysis 기술 (변경 되었습니다 발견에 대 한 시간에 발생 하는 조미료 릴리스의 변경 사항을 설명 하는 이전에 게시 연구2에 aspartate). 좋습니다는 단일 장치/임 플 란 트를 수행 하기 위해를 사용 하 여 각 동물에서 둘 다 소개에서 설명 하는 이유로.
때마다, 행동 방해를 최소화 하 고 피해 위험 및 동물54에 대 한 고통을 감소 radiotelemetry 만성 뇌 파 기록에 대 한 속박 되 시스템을 선호 해야 합니다. 그러나, 곁된 EEG 기록은 이다 원격 측정법 보다 훨씬 저렴.
우.......
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공개 사항
저자는 공개 없다.
감사의 글
저자 안 나 Binaschi, 파올로 Roncon 우선 출판 원고에 그들의 공헌에 대 한 엘 레 노어 팔 마를 감사 하 고 싶습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 3채널 2연전극 | Invivo1, Plastic One, Roanoke, Virginia, USA | MS333/3-B/SPC | 재료 |
| 가이드 cannula | Agn Tho's, Lindigö, Sweden | MAB 4.15.IC | 재료 |
| 수지 KK2 Plastik | Elettra Sport, Lecco, Italy | KK2 | 재료 |
| Super Attack gel Loctite | Henkel Italia Srl, Milano, Italy | 2047420_71941 | 재료 |
| Imalgene-Ketamine | Merial, 툴루즈, 프랑스 | 221300288 (AIC) | Solution |
| Xylazine | Sigma, Milano, Italy | X1251 | Material |
| Isoflurane-Vet | Merial, 툴루즈, 프랑스 | 103120022 (AIC) | Solution |
| Altadol 50 mg/ ml - tramadol | Formevet, Milano, Italy | 103703017 (AIC) | Solution |
| Gentalyn 0.1% crm - gentamycine | MSD Italia, Roma, Italy | 20891077 (AIC) | Material |
| simplex rapid dental cement | Kemdent, Associated Dental Products Ltd, Swindon, United Kingdom | ACR811 | Material |
| GlasIonomer CX-Plus Cement | Shofu, Kyoto, Japan | PN1167 | Material |
| probe clip holder | Agn Tho's, Lindigö, Sweden | p/n 100 5001 | Equipment |
| 히스토아크릴® Blue Topical Skin Adhesive | TissueSeal, Ann Arbor, Michigan, USA | TS1050044FP | 재질 |
| 발륨 10 mg/2 ml - diazepam | Roche, Monza, Italy | 019995063 (AIC) | 재질 |
| 1 mL 주사기, 25G 바늘 | Vetrotecnica, Padova, Italy | 11.3500.05 | 재질 |
| 랫 플렉시블 피드 니들 17G | Agn Tho's, Lindigö 스웨덴 | 7206 | 재료 |
| 잔디 기술 장치 | Grass Technologies, Natus Neurology Incorporated, Pleasanton, California, USA | M665G08 | 장비 (AS40 증폭기, 헤드 박스, 상호 연결 케이블, 텔레팩터 모델 RPSA S40) |
| 모듈식 데이터 수집 및 분석 시스템 MP150 | Biopac, Goleta, California, USA | MP150WSW | 장비 |
| 디지털 비디오 감시 시스템 | AverMedia Technologies, Fremont, California, USA | V4.7.0041FD | 장비 |
| 미세 투석 프로브 | Agn Tho's, Lindigö 스웨덴 | MAB 4.15.1.Cu | 재료 |
| 미세투석 프로브 | Synaptech, Colorado Springs, Colorado, USA | S-8010 | 재료 |
| 블록 히터 | Grant Instruments, Cambridge, England | QBD2 | 장비 |
| 교반기 | Cecchinato A, Aparecchi Scientifici, Mestre, Italy | 711 | 장비 |
| 주입 펌프 | Univentor, Zejtun, Malta | 864 | 설비 |
| 미세 보어 폴리에틸렌 튜빙 | Smiths Medical International Ltd., Keene, New Hampshire, USA | 800/100/100/100 | 재질 |
| 파란색 튜빙 어댑터 | Agn Tho's, Lindigö 스웨덴 | 1002 | 재질 |
| 빨간색 튜브 어댑터 | Agn Tho's, Lindig ö 스웨덴 | 1003 | 재질 |
| 2.5 mL 주사기(22G 바늘 포함 | Chemil, Padova, Italy | S02G22 | 재질 |
| 바이알 캡 | Cronus, Labicom, Olomouc, Czech | Republic VCA-1004TB-100 | 재질 |
| 셉텀 | Thermo Scientific, Rockwoood, Tennessee, USA | National C4013-60 8 mm TEF/SIL 셉텀 | 재질 |
| 하단 스프링이 있는 유리 인서트 | Supelco, Sigma, Milano, | Italy 27400-U | Material |
| autosampler vial | National Scientific, Thermo Fisher Scientific, Monza, Italy | C4013-2 | Material |
| Smartline manager 5000 시스템 컨트롤러 및 탈기 장치 | Knauer, Berlin, Germany | V7602 | Equipment |
| Smartline 1000 quaternary gradient pump | Knauer, Berlin, Germany | V7603 | Equipment |
| 분광형광 검출기 | Shimadzu, 교토, 일본 | RF-551 | 장비 |
| 크로마토그로픽 컬럼 | Knauer, Berlin, Germany | 25EK181EBJ | 재료 |
| chromatogrphic pre-column | Knauer, Berlin, Germany | P5DK181EBJ | 재료 |
| 이동상 용액 A | 0.1M 인산나트륨 완충액, pH 6.0 | 용액 | |
| 이동상 용액 B | 40% 0.1M 인산나트륨 완충액, 30% 메탄올, 30% 아세토니트릴, pH 6.5 | ||
| 용액 링거 용액 | 조성(mM): MgCl2 0.85, KCl 2.7, NaCl 148, CaCl2 1.2, 0.3% BSA | 용액 | |
| 변형 링거 용액 | 조성(mM): MgCl2 0.85, KCl 100, NaCl 50.7, CaCl2 1.2, 0.3% BSA | 용액 | |
| 식염수 | 0.9% NaCl, ph 7.0 | 용액 | |
| 당 용액 | 10% 증류수 | 용액 |
참고문헌
- Soukupova, M., et al. Impairment of GABA release in the hippocampus at the time of the first spontaneous seizure in the pilocarpine model of temporal lobe epilepsy. Experimental Neurology. 257, 39-49 (2014).
- Soukupova, M., et al.
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