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방법 논문

창 자-혈액 장벽 및 간 대사 Microbiota 제품의 평가 위한 Vivo에서 방법

7.9K 조회수

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DOI:

10.3791/58456

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2018년 10월 20일

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이 논문에서

요약

영양소, microbiota 대사와 순환에 의약품의 액세스 창 자-혈액 장벽 (GBB)에 의해 제어 됩니다. 우리는 GBB 침투성에서 vivo에서, 일반적으로 사용 되는 간접 방법, 달리는 거의 영향을 받지 않습니다 간 및 신장 기능을 측정 하기 위한 직접적인 방법을 설명 합니다.

초록

창 자-혈액 장벽 (GBB) 혈 류 장 루멘에서 영양분, 세균 대사 산물과 약물의 흐름을 제어합니다. GBB 무결성 혈 류 창 자 세균 대사 산물 등 생물학적 활성 화합물의 쉽게 액세스 될 수 있습니다 위, 심혈 관 및 대사 질환에 교란 된다. 따라서,는 GBB의 침투성 장 및 extraintestinal 질병의 마커를 있을 수 있습니다. 또한, 세균 대사 산물의 증가 침투 수 있습니다 전체 유기 체의 기능에 영향을.

GBB 침투성 공부에 대 한 일반적으로 사용 되는 방법 수행 비보 전있습니다. 이러한 방법의 정확성은 창 자 혈액의 흐름에 따라는 GBB의 기능 때문에 제한. 다른 한편으로, 일반적으로 사용 되 비보에 방법 편 파 수 있습니다 간 및 신장 성능, 그 메서드는 소변의 평가 기반으로 또는 / 및 exogenous 마커의 주변 혈액 농도. 여기, 우리 장 혈액 흐름을 유지 하 고 간, 신장 기능 영향을 거의 받지 않습니다 메서드를 사용 하는 비보에 포털 혈액 샘플링에 따라 쥐에서 GBB 침투성의 직접 측정을 제시.

폴리우레탄 카 포털 정 맥에 삽입 하 고는 키 모 보다 열 등 한 베 나 정 맥 혈관 합류. 기준선에 및 위장의 원하는 부분에 선택한 마커의 관리 후 혈액 샘플링 됩니다. 여기, 선물이 TMA, 창 자 세균 대사 산물, TMA의 간 정리의 평가 (2) 및 (3) 평가의 직감 직감 포털 혈액-간-주변 혈액 통로의 콜론 침투성의 평가 (1)를 포함 하는 방법의 몇 가지 응용 프로그램 박테리아에서 파생 된 짧은 사슬 지방산입니다. 또한, 프로토콜 장내 흡수와 약물의 간 대사를 추적 또는 포털 혈압의 측정을 위해 사용할 수도 있습니다.

서론

창 자-혈액 장벽 (GBB)로 알려진 장 배리어 영양소1의 흡수를 허용 하는 동안 유해한 화합물의 통행을 제한 하기 위하여 혈 류에서 창 자 루멘을 분리 하는 복잡 한 멀티 레이어 시스템입니다. 그것은 이루어져 있다 3 개 주요 레이어: 점액 레이어, 상피와 lamina propria.

수많은 요인 GBB 무결성 및 기능2영향을 미칠 수 있습니다. 그것은 보였다 GBB 위장과 extraintestinal 질환, 심혈 관 및 대사 질환3, 혈 류4직감 세균 대사 산물의 증가 흐름으로 이어질 수 있는 포함 하 여 교란 된다. 창 자 세균 대사 산물의 증가 침투 전체 유기 체의 기능에 영향을 수 있습니다. 최근 연구 결과 순환 시스템 기능5,6,7 indoles, H2S, 짧은 사슬 지방산 (SCFA), trimethylamine N 산화물 등의 세균성 대사 산물의 상당한 영향을 표시 하는 예를 들어 <....

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프로토콜

실험 과학적인 목적을 위해 사용 하는 동물의 보호에 관한 지침 2010/63 EU에 따르면 남성 Wistar 교토 쥐에 수행 하 고 난 바르샤바에서 로컬 Bioethical 위원회에 의해 승인 했다.

1. 삽입 Intraintestinal 관리에 대 한 라인의

참고: 여기 카 테 터를 사용 하 여 마커의 intracolonic 관리를 제안 한다. 그것은 구강 관리 또는 gavage 소화 관 예 위 또는 십이지의 다양 한 수준에서 수정할 수 있습니다. 일회용 수술 복, 수술 가운, 후드와 장갑를 포함 하 여 사용 하 고 절차 1-6 동안 수술 (바늘, 등)에 사용 된 날카로운 도구에 관련 된 안전 조치에 따라 확인을 기억 하십시오.

  1. 빠른 동물 수술 전에 하룻밤. 일반 마 취, 즉, 우 레 탄 1.5 g/kg bw i.p. 평가 적절 한 anesthetization의 주입에 의해 취득 하는 종 및 각 막 반사의 부족에 의해 고 발가락-핀치 및 꼬리 핀치 메서드에서 동안 모든 절차를 수행 합니다.
  2. 소아 폴 리 카 테 터 10 층 (8 층)를 사용 하 여 저 승 카 테 터로. 콜론 (약 ....

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결과

우리는 성공적으로 GBB 침투성 및 간 허가 TMA의 쥐에서 측정 됩니다. 우리는 고혈압 쥐 normotensive 쥐 (그림 2)4에 비해 TMA 증가 콜론 침투성을 증명 하고있다. 또 다른 연구에서 우리는 높은 소금 섭취가 TMA (그림 3)14의 GBB 침투성 및 간 허가 영향을 주지 않습니다 발견.

변, 포털 혈액 및 말 초 혈액에서 SCFA의 농도 측정, 우리 주변 혈액에 창 자에서 분자의 경로 추적. 그 실험에 대 한 모범적인 결과 표 3에 표시 됩니다.

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토론

설명 직접 vivo에서, GBB 침투성 측정 방법을 유지 closetophysiological 조건 위장 시스템 (장 혈액의 흐름을 유지), 그리고 간, 신장 기능 영향을 거의 받지 않습니다.

이 기술의 중요 한 단계는 포털 카 테 터의 삽입 이다. 이 수행 되어야 합니다 부드럽게 하 고 결정적으로 같은 시간에. 온화 하 고, 짧은 출혈이 문맥;의 올바르게 수행된 펑크에서 발생할 수 있습니다. 그러나, 그것은 그릇에 바늘이 삽입 될 때 중지 됩니다. 지속적인 출혈 포털 정 맥 천공을 나타냅니다. 촉진 하기 위해 카 테 터 삽입, 포털 정 맥 잘 드러내 야 한다. 내장, exteriorizing 후 mesenteric 루트 잘 드러낼 때, 상단 mesenteric 정 맥도 볼 수 있어야 (mesenteric 정 맥은 문맥에 cranially 입력). 포털 정 맥 측으로 이동 하는 간 엽 일반적으로 적용 됩니다. 때문에 카 테 터의 움직임은 포털 정 맥 파열 및 출혈.......

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

작품은 과학과 고 등 교육 공화국 폴란드의 지원, 다이아몬드 부여 no: DI2017 009247.

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
바늘 OD: 9 mmBecton Dickinson  미국301300
폴리에틸렌 카테터 ID: 0.025", OD: 0.040" 과학 상품, Inc.#BB520-40
폴리에틸렌 카테터 ID: 0.012", OD: 0.025" 과학 상품, Inc.#BB520-25
C-Flex 튜빙, 불투명 화이트 1/50"ID x 1/12 " OD   콜 - 파머 악기 (주)06424-59
소아용 폴리 카테터(크기 10F 또는 8F) Sigmed0000 80305
수술용 합자 3/0Yavo Sp. Z o.o. P48JE
흡수성 수술용 봉합사 - 폴리글락틴 910 4/0KRUUSE Polska Sp. Zo.o.
조직 접착제 - 록타이트 454시아노아크릴레이트 접착제록타이트;
Povidone 요오드EGIS Pharmaceuticals PLC4449 11
Heparin - Heparinium WZF WZF 폴파 S.A.02BK0417생리학적 식염수 글리세린으로 10배 희석
86%Laboratorium Farmaceutyczne Avena5.90999E+12대장 카테터 삽입에서 윤활제 역할을 함
Xylocaine 2%AstraZenca 
우레탄시그마-알드리치(머크) U2500-500G
트리메틸아민 용액 45%시그마-알드리치(Merck) 92262-1L
주사기 2 mLB.Braun Melsungen AG4606027V
식염수 250 mLFraesenius Kabi Polska Sp. Z oo15LL707WL
외과 용 가위, 직선, 길이 115mm, 4 1/2 "뭉툭한 끝BraunNS-010-115-PKM
동맥 집게 유형 Micro-Adson 구부러진, 길이 140mm 5 1/2 "BraunKN-008-140-ZMK
해부학 집게, 길이 95mm, 3 3/4 "날카로운 0.7x0.55BraunPO-001-007-ZMK
마이크로 가위 유형 Vannas,  스트레이트, 길이 85mm, 블레이드 길이 3 3/8 "6mmBraun NO-010-085-PMK
타월 클램프 타입 백하우스, 길이 130 mm, 5 1/8" BraunHO-128-130-PMK
바늘 홀더, 길이 150 mm, 6" t=0.4 1/2 브라운 IM-927-150-PZMK
섬세한 가위, 길이 110 mm, 직선, 4 3/8" 샤프 브라운NO-052-110-PMK
해부학 집게, 길이 95mm, 3 3/4" 샤프브라운PO-022-001-PMK
15233613701279941342

참고문헌

  1. Camilleri, M., Madsen, K., Spiller, R., Greenwood-Van Meerveld, B., Verne, G. N. Intestinal barrier function in health and gastrointestinal disease. Neurogastroenterology and Motility: The Official Journal of the European Gastrointestinal Motility Society. 24 (6), 503-512 (2012).
  2. Keita, A. V., Soderholm, J. D.

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