가 여러 명의 병렬 접시 흐름 챔버를 사용 하 여 스트레스에 노출 된 내 피 세포의 유전자 표정 분석

H.S. Jeffrey Man; Aravin N. Sukumar; Kyung Ha Ku; Michelle K. Dubinsky; Noeline Subramaniam; Philip A. Marsden

doi:10.3791/58478

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방법 논문

가 여러 명의 병렬 접시 흐름 챔버를 사용 하 여 스트레스에 노출 된 내 피 세포의 유전자 표정 분석

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DOI:

10.3791/58478

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2018년 10월 21일

H.S. Jeffrey Man¹^,² , Aravin N. Sukumar¹^,² , Kyung Ha Ku²^,³ , Michelle K. Dubinsky¹^,² , Noeline Subramaniam¹^,² , Philip A. Marsden¹^,²^,³^,⁴

¹Institute of Medical Science, University of Toronto, ²Keenan Research Centre in the Li Ka Shing Knowledge Institute, St. Michael's Hospital, ³Department of Laboratory Medicine and Pathobiology, University of Toronto, ⁴Department of Medicine, University of Toronto

이 논문에서

요약

여기, 유체 전단 응력에서 내 피 세포의 문화 및 유전자 표정 분석에 대 한 워크플로 제공 됩니다. 포함 된 동시에 주택 및 제어 환경에 양이 많은 PCR에 대 한 참조 외 인 RNA 사용 하 여 여러 흐름 챔버 모니터링에 대 한 물리적 배열이입니다.

초록

우리는 여러 모니터링된 병렬 플레이트 흐름 챔버를 사용 하 여 지속적인 층 흐름에 따라 내 피 세포에서 유전자 발현의 분석에 대 한 워크플로 설명 합니다. 내 피 세포는 혈관의 내벽 세포를 형성 하 고 만성 혈 라는 전단 응력 마찰력에 노출 되는. 생리 적 조건, 내 피 세포 기능 다양 한 전단 응력 조건 존재. 따라서, 생체 외에서 모델에 전단 응력 조건의 응용 프로그램 내 피 응답 비보에 큰 통찰력을 제공할 수 있습니다. 병렬 플레이트 흐름 챔버 레인 외. 이전 출판 ⁹ 는 존재 및 지속적인 (비 타악기) 층 흐름의 부재에 내 피 유전자 규칙을 공부에 적응. 여기에 제시로 층 류 흐름에 대 한 설정에 있는 주요 적응 포함 집 동시 흐름 회로, 유량에서의 모니터링에 큰, 전용 환경 실시간, 고는 외 인 RNA에 대 한 참조는 정규화의 포함 양이 많은 실시간 PCR 데이터입니다. 전단 응력의 응용 프로그램과 함께 여러 치료/조건을 평가 하기 위해 여러 흐름 회로 및 펌프 사용 됩니다 동시에 같은 온수 및 humidified 인큐베이터 내에서. 각 흐름 회로의 유량에 지속적으로 측정 하는 실험을 통해 전단 응력 조건 표준화 실시간. 이러한 실험 여러 조건 때문에, 우리는 또한 RNA 추출 및 첫번째 물가 cDNA 합성 효율성의 정규화에 대 한 RNA 추출 시 아군에 있는 외 인 참조 RNA를 사용 합니다. 이 단계 샘플 사이 가변성을 최소화합니다. 이 전략은 병렬 플레이트 흐름 챔버를 사용 하 여 전단 응력 실험 유전자 표정 분석에 대 한 우리의 파이프라인 고용 하지만 외 인 등이 전략의 부분 참조 RNA 스파이크, 쉽게 및 비용 효율적으로 사용할 수 다른 응용 프로그램입니다.

서론

혈관 내 피 세포는 높은 종의 닫히는 심장 혈관 시스템에 혈관의 내벽 세포를 형성합니다. 그들은 혈액과 조직 사이의 인터페이스를 형성 하 고 luminal 특징으로하 고 abluminal 표면. Endothelium 혈액 흐름, 영양소 밀매, 내성 및 새로운 혈액 혈관¹의 성장을 조절 하는 다양 한 활동과 적응 시스템입니다. 본문에 내 피 세포는 순환, 전단 응력²의 마찰력에 노출 되는 환경에서 일반적으로 존재 한다. 전단 응력은 내 피 세포 유전자 식³의 중요 한 레 귤 레이 터 그리고 내 피 세포가 주어진된 범위²^,⁴내의 전단 응력을 유지 하려고. 내 피 세포 신생 조직 관류를 향상 시킬 수 있는 전단 응력⁵ 의 부재에 패턴을 보여 줍니다. 방해 흐름 및 변경 된 전단 응력의 지역 패턴 자극적인 유전자⁶ 의 표현과 롬⁷^,⁸의 개발에 관련이 있습니다. 따라서, 전단 응력을....