Vivo에서 하는 방법 마우스 혈액 고환 방 벽 완전성을 공부

요약

여기, 선물이 testes에 눌린 FITC를 주입 하 여 혈액 고환 방 벽 완전성을 평가 하는 프로토콜. 이것은 유전과 환경 요소에 의해 손상 될 수 있습니다 혈액 고환 방 벽 무결성 공부 효율적인 vivo에서 방법.

초록

Spermatogenesis는 고환의 seminiferous tubules에서 성숙한 정 충으로 spermatogonia의 개발 이다. 이 과정은 Sertoli 세포 접합 혈액 고환 방 벽 (도 서 구매), 포유류 몸에 있는 가장 단단한 조직 장벽 이며 2 개의 구획로 기초는 adluminal seminiferous 상피를 분리에 의해 지원 됩니다. 웨스트가 감수 분열 생식 세포에 대 한 독특한 microenvironment 만듭니다 I / II와 spermiogenesis 통해 정 충으로 postmeiotic spermatids의 개발에 대 한. 여기, 우리가 마우스 고환에서 vivo에서의 서 구매 무결성을 모니터링 하는 데 신뢰할 수 있는 분석 결과 설명 합니다. 그대로 웨스트가 seminiferous tubules의 꼭대기 구획에는 기저에서 FITC 활용 눌린의 확산을 차단합니다. 이 기술은 유전자 후보, 바이러스, 또는 서 구매 기능 또는 무결성, 쉬운 절차와 다른 방법에 비해 수술 능력의 최소한의 요구 사항에 영향을 미칠 수 있는 환경 유독 공부 위해 적당 하다.

서론

포유류 spermatogenesis spermatogonial 자체-갱신 및 감 별 법 spermatocytes 통해 유사 분열, 감수 분열, 그리고 spermiogenesis를 통해 단일 정 충에는 극적인 고도로 구조화 된 과정으로 간주 됩니다. 생화학 및 형태학 상 변화 발생합니다. 개발 생식 세포는 루멘으로 seminiferous 관의 기지에서 점차적으로 이송 됩니다. 이 프로세스는 세균 세포와 Sertoli 세포^1,2사이 세포 세포 접촉에 의해 통제 된다. 인접 한 Sertoli 세포 형성 seminiferous 관의 기지 근처에 있는 서 구매. 도 서 구매 실제로 나눕니다 상피는 기저 및 adluminal 구획. 8 조-IX 상피 주기의 단계 preleptotene/leptotene spermatocytes 기저 구획에서도 서 구매, adluminal 구획³입력에 걸쳐 마이그레이션합니다. 따라서,는 서 구매의 함수 감수 분열 및 spermiogenesis^4,,56의 완료에....

프로토콜

모든 수행된 동물 실험 난징 의학 대학 위원회에 의해 승인 되었습니다가지고. 남성 C57BL/6 마우스 제어 photoperiod 조건 하에서 유지 했다 그리고 음식과 물을 함께 제공 했다.

1입니다. 준비

1. Microinjection 모 세관
   1. 외경, 내부 직경와 1.0 m m, 0.8 m m와 10.0 c m, 길이 microinjection 모세를 각각 사용 합니다.
   2. 모 세관 끌어당기는 사람 (그림 1A)와 유리 모 세관을 당겨. 테스트 하 고 사용 되는 모 세관 끌어당기는 기계에 따라 설정을 조정 합니다.
   3. 사용 하는 끝에 50 µ m 직경의 모 세관을 가져오는 집게와 피 펫 팁을 휴식.
      참고: 도움말은 고환에 침투 하는 너무 오래 있을 수 있습니다.
   4. Micropipette beveler (그림 1C)을 사용 하 여 30 ° 각도에서 팁을 선명 하 게.
2. 시 약
   1. 1 %pentobarbital 나트륨 준비: pentob....

결과

도 서 구매 무결성 분석 결과 수행 하기 위한 실험 설정 그림 1에 표시 됩니다. 고 각각 모 세관 끌어당기는 사람와 micropipette beveler microinjection 모 세관을 선명 하 게 (그림 1A 및 1c). 서 모스 탯 히터 및 microinjection에 대 한 장비는 그림 1B 및 1 D에 나와 하 고 있습니다.

그림 2 눌린 FITC의 주입에 대 한 주요 단계 중 일부를 표시합니다. 가 위를 사용 하 여 마우스 완전 마 취 (그.......

토론

Spermatogenesis seminiferous 상피에서 고은 체세포와 생식 세포에 의해 경 세 되 매우 정렬 된 동적 과정 이다 (예를 들어, Sertoli 세포)¹³. Sertoli 세포 구성, 웨스트가 구조가 나눕니다 seminiferous 상피는 기저와 꼭대기 구획. Meiotic 및 단일 세균 세포의 개발은 면역 장벽¹⁴을 형성 하는 꼭대기에 발생 합니다.

유독 하거나 세포 접합, 남성 불 임에 이르는의 형성에 관여 하는 유전자 결함 때문도 서 구매 기능을 손상 수 있습니다. 웨스트가 무결성을 검사 하기 위하여는 시험관에 는 밀접 하 게 형성 기능 상피의 수 있는 Sertoli 세포 문화 시스템 설립 되었습니다¹⁵ vivo에서도 서 구매를 싫어 하지. 이 체 외에

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
모세관 풀러	SUTTER INSTRUMENT (USA)	P-97
10x PBS	Hyclone (USA)	SH30258.01	dilution to 1× in ddH2O
4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)	Sigma (USA)	F6057
접착 현미경 슬라이드	CITOGLAS (중국)	80312-3161
염화 카드뮴	Sigma (미국)	655198-5G
컨포칼 현미경	Zeiss (독일)	LSM700
Dust-free paper	Kimberly-Clark (USA)	34120
Inulin-FITC	Sigma (USA)	F3272
Microinjection capillaries	Zhengtianyi (China)	BJ-40	1.0 mm × 0.8 mm  × 100 mm
Micropipette beveler	NARISHIGE (일본)	EG-400
OCT SAKURA	(일본)	4583
Paraformaldehyde	Sigma (미국)	P6148
Pentobarbital sodium	Merck (독일)	P11011
면도기	Yashen (중국)
실체 현미경	Nikon (일본)	SMZ1000
설탕	Sangon Biotech (중국)	A610498
Surgical Instrument	Stronger (중국)		가위, 겸자, 바늘 홀더
주사기	KDL (중국)	20163150518	0.45 mm × 0.16 mm RW LB
온도 조절 히터	KELL (Nanjing, China)	KEL-2010
10x TBS, pH 7.6
0.2 M Tris	Sangon Biotech (중국)	A600194
1.37 M Nacl	Sangon Biotech (중국)	A610476