조직화 학적인 얼룩과 겨울 휴면 중 달콤한 체리의 난소 Primordia에서 전 분을 계량 하기 이미지 분석

요약

우리는 조직화 학적인 기술을 결합 하는 이미지 분석 시스템을 사용 하 여 겨울 휴면 중 달콤한 체리 (벚나무 avium L.)에서 난소 primordia에서 녹말 함유량을 계량 하는 방법론을 제시.

초록

작은 구조에서 전 분에 변경 수정 하 열매를 맺은의 발병 수 분에서 생식 단계를 포함 하 여 여러 식물 발달 과정, 동안 주요 이벤트와 연결 되어 있습니다. 그러나, 꽃 감 별 법 동안에 전 분 유사 알려져 있지 않습니다 완전히, 꽃 primordia의 특히 작은 구조에서 녹말 함유량 측정의 어려움 때문에 주로. 여기, 우리는 다른 단계와 녹말 함유량에 있는 변화를 관련 된 수 있는 현미경에 부착 된 이미지 분석 시스템을 사용 하 여 달콤한 체리 (벚나무 avium L.)의 난소 primordia에서 전 분의 정량화 하는 방법 설명 봄가을 휴면. 이 위해 꽃 봉 오리의 휴면 상태 제어 조건에 겨울 시간에 다른 순간에 전송 하는 촬영의 새싹 성장 평가 하 여 결정 됩니다. 난소 primordia에서 전 분의 정량화에 대 한 꽃 봉 오리는 순차적으로 수집, 고정, 파라핀 왁 스에 포함 된, sectioned, 그리고 난 물₂Kl (요오드 화 칼륨 요오드). 준비는 현미경 관찰 하 고 명확 하 게 배경에서 전 분을 구분 하는 이미지 분석기에 의해 분석. 전 분 콘텐츠 값 공부 프레임의 녹말 함유량의 추정으로 각 픽셀의 광학 밀도의 합계를 고려 하 고 묻은 전 분에 해당 하는 이미지의 광학 밀도 측정 하 여 얻을 수 있습니다.

서론

온화한 우 디 사계절 그들의 성장과 발전을 변조 하 여 계절에 적응. 그들은 봄, 여름 동안 개발 하는 동안 그들은 휴면 겨울¹에 서가 동안 성장 하 고 중지 합니다. 휴면 낮은 겨울 온도에서 살아남을 수 있습니다, 재미는 적절 한 budburst 봄²에 대 한 전제 조건. 온대 과일 생산 및 임업에 휴면의 중요 한 의미를 확인 하 고 예측 하는 휴면 기간³다양 한 노력을 끌고있다. 과일 나무 종에 경험적 실험 조건 및 꽃의 데이터를 기반으로 하는 통계 예측 강제 촬영 전송 가지 현재 추정 하는 연구를 수 있는 휴면의 날짜를 결정 하는 각 품종에 대 한 요구 사항을 재미 그러나, 생물 학적 과정에 따라 휴면 상태를 확인 하는 방법 불분명³남아 있습니다.

달콤한 체리 (벚나무 avium L.), 등 온대 과일 나무에 꽃이 피는 일년에 한 번 발생 하 고 보름 정도 지속. 그러나, 꽃을 차별화 하 고 이전 여름⁴기간 동안 약 10 개월 이전에 개발 시작. 꽃 primordia 겨울 동안 휴면 새싹 안에 남아가 동안 성장....

프로토콜

1. 휴면 결정과 식물 자료를 수집

1. 예제 필드에 꽃 봉 오리. 휴면 연구 장기 실험 하 고 필요 성인 싹 수집 하 큰 만큼 나무와 나무의 개발 다음 봄 동안 손상 없이 모든 겨울을 쏘고. 특별 한 과수원 관리 훈련 시스템;에 따라 필요한 수 있습니다. 따라서, 가지 치기 과일 생산 목적 보다 덜 심각한 수 있습니다.
   1. 새싹 틈의 발병까지가 시작에서 매주 수집 하 고 10 꽃 봉 오리를 무게.
   2. 모자와 함께 10 mL 유리 튜브에 그들을 배치 하 여 꽃 봉 오리를 수정 하 고 샘플 4 ° c.에 24 h 이상 에탄올/아세트산 산 (3:1)의 통 솔루션에 흠뻑 젖어 그리고는 정착 액을 버리고 75% 에탄올, 넉넉한 샘플 포함 보장을 추가 합니다. 샘플 사용까지 4 ° C에서이 솔루션에 보존 될 수 있습니다.
      참고: 꽃 봉 오리 안에 기포를 제거 하 고 부동에서 그들을 방지 하는 진공 침투를 사용할 수 있습니다. 이 조직에는 정착 액의 침투를 용이 하 게 하지만 조직의 구조를 손상 될 수 있습니다. 필요 하지 않은 경우 그것을 방지 하려고 합니다.
2. 필드에서 촬영 샘플.
   1. 각 주, 버드 휴식의 발병까지가 시작에서 15-30 cm 길이 직경, 10 꽃 싹을 포함 된 5 m m의 3 개의 촬영을 ....

결과

휴면 연구 재미 요구 사항이 충족 되는 때 순간의 결정을 해야 합니다. 필드 조건 (그림 1A)에서 겨울 동안 phenological 변화의 부족에도 불구 하 고 벚꽃 복구할 수 없습니다 적당 한 조건에서 성장의 용량 낮은 온도에서 일정 기간을 통과할 때까지. 겨울 시간 동안 제어 조건 약 실 (그림 1B)에 촬영의 정기 전이 꽃 봉 오리의 휴면 상태의 평가 허용. 꽃 봉 오리 성장의 평가 버드 체중 증가 측정 하 여 이루어졌다. 반면, 휴면, 동안 변경 관찰 될 수 있었다 적당 한 조건 (그림 1C)의 10 일 후 일단 휴면 극복, 새싹 늘어났다 고 성장 챔버 (그림 1D)에 버스트. 이 분석의 결과 허용을 싹의 휴면 상태. 겨울 동안 발생 하는 다른 온도 .......

토론

우 디 사계절에 휴면 휴면 뒤에 생물 학적 과정 불분명 남아 있지만 과일 생산에서 명확한 의미와 변화 하는 기후에 있는 임업을 선물 한다. 휴면 연구는 다른 관점에서 접근 될 수 있다 하지만 겨울 휴면에 대 한 생물 학적 마커를 찾는 연구는 지난 년 동안을 강화 하고있다. 그러나 때 새싹 휴면 고장이 보여주는 명확한 지표를 찾을 대부분의 시도 실패³되었습니다. 분석 이미지, 조직화 학적인 기법¹⁸ 결합 여기에서 설명한 방법론 특정 조직의 탄수화물 보유와 달콤한 체리 새싹에서 그것의 생리 적인 활동의 관계를 검토 하 매우 유용 했습니다. 휴면⁵ 의 여러 단계와 다른 종 및 조직^10,,1320에 적용할 수 있습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
정밀 스케일	Sartorius	CP225D
입체 현미경	Leica Microsystems	MZ-16
건조 스토브	Memmert	U15
파라핀 임베딩 스테이션	Leica Microsystems	EG1140H
회전식 마이크로톰	Reichert-Jung	1130/Biocut
마이크로톰 블레이드	깃털	S35	스테인레스 스틸
명시야 현미경	Leica Microsystems	DM2500
디지털 카메라	Leica Microsystems	DC-300
이미지 분석 시스템	Leica Microsystems	Quantiment Q550