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Behavior
소설 개체 인식 및 행동 예산에 쥐에 테스트 개체 위치

Research Article

소설 개체 인식 및 행동 예산에 쥐에 테스트 개체 위치

DOI: 10.3791/58593

November 20, 2018

Jiyeon K. Denninger1, Bryon M. Smith1, Elizabeth D. Kirby1,2,3

1Department of Psychology,Ohio State University, 2Department of Neuroscience,Ohio State University, 3Center for Chronic Brain Injury,Ohio State University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

In This Article

Summary Abstract Introduction Protocol Representative Results Discussion Disclosures Acknowledgements Materials References Reprints and Permissions

Erratum Notice

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

Retraction Notice

The article Assisted Selection of Biomarkers by Linear Discriminant Analysis Effect Size (LEfSe) in Microbiome Data (10.3791/61715) has been retracted by the journal upon the authors' request due to a conflict regarding the data and methodology. View Retraction Notice

Summary

여기 우리 디자인, 비용, 및 건설의 필수 장비를 포함 하 여 murine 개체 위치 및 소설 개체 인식 행동 테스트, 경제적인 설립에 대 한 포괄적인 지침을 포함 하는 프로토콜을 제공 뿐만 아니라 행동 테스트, 데이터 수집 및 분석의 실행.

Abstract

Ethologically 관련 행동 테스트 마우스 모델을 사용 하 여 다양 한 생리 적 또는 병 적인 변화의 인지 효과 공부 하는 모든 연구의 중요 한 구성 요소입니다. 개체 위치 작업 (OLT)와 소설 개체 인식 작업 (NORT) 두 효과적인 행동 작업 기능과 메모리에 관련 된 특정 뇌 영역의 상대 건강을 일반적으로 사용 되는. 이들이 테스트의 둘 다의 고유의 특혜를 악용 하는 동안 이전에 대 한 메모리를 공개 참신에 대 한 마우스 개체 발생, OLT는 주로 hippocampal 활동에 크게 의존 공간 학습 평가. NORT, 대조적으로, 여러 뇌 영역에 의존 하는 개체 id의 공간이 아닌 학습을 평가 합니다. 두 작업은 오픈 필드 테스트 경기장, 마우스, 적절 한 환경 신호 및 비디오 녹화 장비를 해당 기본 값으로 개체 및 소프트웨어 필요합니다. 상업적으로 사용할 수 있는 시스템, 편리한 반면, 비쌀 수 있다. 이 원고는 경기장을 구축 하 고 OLT와 NORT를 수행 하는 데 필요한 장비를 설정 하는 간단 하 고 비용 효율적인 방법을 자세히 설명 합니다. 또한, 원고는 OLT와 NORT를 통합 하 고 데이터 수집 및 분석, 뿐만 아니라 대표 결과 대 한 일반적인 메서드를 제공 합니다 효율적인 테스트 프로토콜을 설명 합니다. 이러한 테스트의 성공적인 완료는 다양 한 마우스 모델 시스템의 메모리 함수에 대 한 값진 통찰력을 제공 하 고 이러한 기능을 지 원하는 기본 신경 영역 평가 수 있습니다.

Introduction

효과적인 인지 테스트 분리 하 고 제어 환경1동작을 검사 하 여 특정 뇌 영역의 신경 기능 평가. 인간에서는, 특정 작업 대상된 두뇌 지구, 전 두 엽 기능에 대 한 작업 또는 캠브리지 신경 심리적 시험 자동 배터리 (테스트 학습 짝된 동료를 정렬 하는 위스콘신 카드 등의 성능을 평가 하기 위해 설계 되었습니다. CANTAB) hippocampal 기능2,3. 이 테스트는 그 영역의 신경 활동에 기인 하는 행동을 평가 하 여 인 간에 있는 특정 뇌 영역의 기능을 연구 하도록 설계 되었습니다. 가장 생물 의학 연구의 최종 목표는 인간의 건강;의 개선 그러나, 뇌 기능 건강 또는 질병의 많은 연구와 인간의 윤리적으로 수행할 수 없습니다. 인간 참가자를 사용할 수 없는 연구, 쥐와 같은 작은 설치류는 종종 선택의 모델입니다. 마우스 모델을 사용 하 여 직접 실험 조작 유전자 발현의 변화, 상해의 유도 또는 optogenetic 기술을 통해 회로 활동의 심지어 변조를 포함 하 여 제어할 수 있습니다. 특정 지역에 의존 하는 행동을 측정 하 여 뇌 기능에 실험 변수의 영향을 평가 하는 것을 목표로 행동 테스트 쥐, 인간의 테스트와 유사 합니다.

해 마는 인간과 설치류4메모리 형성에 대 한 필수적인 구조입니다. 좀 더 구체적으로, 해 마 선언적 메모리 관련 된 관계형 표현 하지만 뇌4의 모터 센터에 절차상 메모리에 중요 한 역할을 한다. 그것은 섭 동에 절 묘하게 과민 하기 때문에 hippocampal 메모리 기능 신경 과학의 많은 분야에 걸쳐 연구의 초점을 하고있다.입니다. 뇌졸중 발작을 노화 하 고 장기간된 스트레스에 이르기까지 부정적인 섭 hippocampal 손상5와 연결 됩니다. 반면, 사회적 상호 작용, 물리적 환경 농축, 등 운동, 긍정적인 개입 hippocampal 기능6,,78향상. Hippocampal 메모리의 적절 한 테스트를 가진 설치류 학문 hippocampal 기능에 다른 환경 개입의 효과 뿐 아니라 메모리의 세포질이 고 분자 중재자에 대 한 통찰력을 밝힐 수 있다.

설치류, 몇 가지 테스트 해 마 의존 학습 및 메모리9,,1011연구 개발 되었습니다. 그들은 수 수 광범위 하 게 세분화, 행동에 변화를 이끌어내는 감정적인 원자가와 자극을 필요로 하는 작업 및 작업을 소설 자극11조사 설치류 취향에. 냉동 동작9,공포 유발11을 측정 하 여 불쾌 한 자극 (발 충격) 환경 컨텍스트 및 컨텍스트에 대 한 나중 테스트 메모리 쌍 등 상황별 두려움 컨디셔닝. 모리스 물 미로 건조 대응 반 즈 미로 부정적인 외부 보강을 사용 하 여 홍보 공간 학습4,11. 각각의 경우에 설치류 혐오 상황, 차가운 물에 잠기 다 되 고 또는 밝은 조명 플랫폼에 각각 노출에서 탈출을 추구 합니다. 광선 팔 미로 반면, 동물 자연 채집 동작 공간 메모리와 결합을 사용 하 여 검색 작은 음식 사례금4,11를 긍정적인 증강에 의존 합니다. 이러한 작업은 널리 사용 되 고 hippocampal 메모리에 대 한 기초 지식을 굴복 했다. 그러나, 부정과 긍정적인 외부 보강재 또는 충격 처럼 공포 유도 자극 이러한 행동을 한 감정적인 요소 추가 어떤 경우에 어떤 바람직하지 수 있습니다 테스트 합니다. 예를 들어 등 쪽과 복 부 된 고유 기능, 감정 조절, 각각12대 공간 메모리와 연결 됩니다. 자극에 감정적인 응답에 의존 하는 테스트 수 있습니다 정확 하 게 반영 하지 장애인된 공간 메모리 복 부 hippocampal 감정 조절 기능 또한 영향을 받는 경우.

OLT 해 마 의존 공간 메모리13의 측정을 제공 하는 간단 하 고 효과적인 테스트입니다. 작업 추가 외부 보강 없이 새로 움에 대 한 동물의 기본 환경 설정에 의존 하며 따라서 일반적으로 차동 감정적인 응답13과 관련 된 합병증을 피할 수 있습니다. OLT에 대 한 현재 프로토콜 마우스, 선물 된다 그러나 장비의 크기는 적절 하 게 크기를 조정 하는 경우 그것은 또한 쥐에 효과적 이다. Acclimating 오픈 필드 테스트 분야에 마우스를 다음 공간 환경 단서에 관하여 2 개체를 조사 하는 프로토콜에 의하여 이루어져 있다. 마우스는 다음 경기장에서 제거 하 고 지연 시도 간 간격 (ITI), 하는 동안 개체 중 하나 이동. ITI, 후 마우스 경기장 reintroduced 이며 자유롭게 탐색을 허용 합니다. 일반적으로 쥐 참신, 선호 하 고 만약 그들이 그들의 초기 노출에서 개체의 위치를 기억, 그들은 이동된 개체를 조사 하 고 더 많은 시간을 보낼 것입니다. 동물 hippocampal 병 변으로 공간 상황별 학습 장애는 고 결과적으로 보여주는 소설 위치14,15에서 개체에 대 한 기본 설정이 없습니다.

OLT은 메모리 신경 활동에 여러 뇌 영역에서 그리는 소설 개체 인식 작업 (NORT)의 추가 테스트와 독립적으로 또는 조합에서 사용할 수 있습니다. NORT는 OLT 때 개체 중 하나를 새 위치로 이동 하는 대신 새로운 개체로 대체 됩니다 테스트 단계까지. OLT 마찬가지로 개체의 메모리와 마우스 소설 개체를 조사 하 고 자발적으로 선호 합니다. 개체 인식 메모리 hippocampal 기판에 크게 의존, 개체 위치 메모리와 달리 다양 한 뇌 영역에 의존에 나타나고 해 마의 참여는 정착. 많은 연구 보고서는 hippocampal 병 변 또는 비활성화 영향을 주지 않습니다 소설 개체 기본 설정10,13,,1617, 다른 반대18,19찾을. 그러나, 그것은 여전히 설치류에 일반 메모리 기능을 평가 하 일반적으로 사용 되는 작업입니다.

여기에 제시 된 프로토콜 둘 다 오픈 필드 테스트 경기장을 사용 하 여 시작 하 고 OLT와 NORT, 실행에 관련 된 단계를 구분. 상업적으로 사용 가능한 행동 테스트 장비 비용 금지, 특히 더 작은 실험실에 대 한 될 수 있습니다. 이 프로토콜에는 경기장 최소의 비용 및 전문된 도구 없이 사내 구축 설계 및 간단한 단계 포함 되어 있습니다. 또한,이 프로토콜에는 이상적인 행동 테스트 지역, 경기장, 문맥 단서 및 OLT와 NORT 프로토콜의 구현에 대 한 무대를 설정 하는 비디오 녹화 시스템의 배치를 포함 하 여 자세히 설명 합니다. 성공적으로 결함이 연구에 대 한 대표적인 결과, 모든 재료와 각 연구에 대 한 절차를 최적화의 중요성을 강조 표시 됩니다.

설명 옵션 수량
파트 a: 아크릴 시트-불투명 화이트 (0.635 cm x 40 cm x 40.64 c m) 라우트된 가장자리 2
파트 b: 아크릴 시트-불투명 화이트 (0.635 cm x 40 cm x 41.91 c m) 라우트된 가장자리 2
파트 c: 아크릴 시트-불투명 화이트 (0.635 c m x 41.91 c m x 41.91 c m) 라우트된 가장자리 1
Acryllic 시멘트 (1 태평양 표준시.) NA 1
16 게이지 Hypo 주걱 NA 1
조합 광장 NA 1
HD 웹캠 NA 1
비디오 캡처 소프트웨어 NA 1
USB 2.0 연장 케이블 NA 1
케이블 도관 NA 1

표 1: 행동 테스트에 필요한 장비와 재료의 항목별된 목록입니다.

Protocol

다음 프로토콜 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 오하이오 주립 대학 (OSU)에 의해 승인 되었습니다.

1. 건물은 경기장

  1. 표 1에 제시 된 재료 주문: 아크릴, 아크릴 시멘트 및 16 G 5 시트 hypo 주걱.
  2. 눈, 피부, 그리고 보호의 다른 종류를 포함할 수 있는 제조업체의 지침에 따라 적절 한 안전 장비를 착용 하십시오.
  3. 아크릴 시트에서 보호 종이 코팅을 제거 합니다.
  4. 드라이 맞는 크기 올바른 (그림 1A)는 것인지 모든 자료.
  5. 조립 및 아크릴 시멘트로 주사기를 로드 합니다.
  6. Base (C 파트)의 위쪽 가장자리와 외부 벽 (Part B)의 긴 가장자리를 정렬 하 고 조합 또는 준 사관 스퀘어를 사용 하 여 서로 수직인 지 확인.
  7. 주사기를 사용 하 여 직접 조인 되는 두 조각의 모서리에 시멘트의 작고 꾸준한 구슬을 적용.
  8. (약 5 분) 처음 설정 될 때까지 보류 두 장소에서 (부품 B와 C)를 조각.
    참고: 일반적으로, 그들은 80% 됩니다 24 h에 강화 하지만 어셈블리는 5 분 후에 계속 수 있습니다.
  9. 동일한 자료를 다른 외부 벽 (Part B) 1.5-1.7 단계를 반복 합니다.
  10. 베이스 단계 1.5-1.7를 사용 하 여 두 내부 벽 (A), 한 번에 하나씩 연결 합니다.
  11. 또한 주사기를 사용 하 여 작은 적용 하 고 직접 시멘트의 꾸준한 구슬 내부와 외부 벽 (Part B)에 의해 형성 되 고 지금 코너에 벽 (A).
  12. 5 분에 대 한 장소에서이 잡으십시오.
  13. 24-48 h 후 진행 행동 테스트 환경을 설정 합니다.

2. 행동 테스트 환경 및 장비 설정

  1. 장소 환경 단서 (토론 섹션에 설명 된) 서로 테스트 영역 (그림 1B)에 경기장을 직면 하 고 건너편.
  2. 4 테스트 경기장 바닥 또는 단서와 생쥐 (그림 1B)에 시각 입력을 최대화 하기 위해 카메라에서 적절 한 거리에서 건장 한 테이블에 2-2 방식으로 정렬 합니다.
  3. 이 거리는 경기장 사이 단서는 적절 한 것인지 단서도 벽을 통해 각 경기장 바닥에서 누워 미터 막대기를 사용 하 여 시력의 라인을 확인 합니다.
  4. 카메라의 높이 테이블의 높이 조정 하 여 모든 4 개의 경기장의 비디오 설명서를 수 있는 최적의 광학 경로 길이 확인 합니다. (그림 1B)입니다.
  5. USB 연장 케이블에 카메라를 연결 합니다.
  6. 케이블 raceways를 사용 하 여 천장에 걸쳐 케이블을 실행 하 고 비디오 실행 하는 컴퓨터를 벽 아래 캡처 소프트웨어.
  7. (그림 1C) 연구원에서 테스트 영역에서 마우스를 분리 하는 커튼 뒤에 컴퓨터를 숨깁니다.
  8. 4 각 약 2-5 cm 길이 폭에서 적어도 3 다른 개체의 조립 (그림 1D)를 테스트 하기 위해 사용 하는 높이 10 c m 최대.

다이어그램 및 장비를 사용한 공간 인식 설정; 심리 실험 측정 도구.
그림 1: 행동 테스트 준비. (A) 오픈 필드-테스트 아레나 어셈블리 부품 A 및 해당 하는 내부 벽, 외부 벽으로 파트 B 파트 C 기반으로. 완성 된 무대 자료 (파트 C)의 인접 한 가장자리에 외부 벽 사이 들어갈 두 내부 벽 (부품 A) 두 외벽 (부품 B) 기지의 전체 가장자리를 실행 하는 있을 것 이다. 모든 벽은 기지 위에 휴식 것입니다. (B)는 0.62 m 높은 테이블, 60 x 90 cm 환경 신호, 빛, 및 동시에 모든 4 개의 분야의 캡처 수 있도록 테스트 영역에 대 한 카메라에 경기장의 대표적인 배열. (C) A 커튼 실험 쥐에서 실험 및 컴퓨터 시스템을 숨깁니다. 오버 헤드 조명에이 사진을 가기의 목적에 대 한 하지만 테스트 중에 바닥 램프는. 또한, 환경 단서 중 테스트 영역의이 사진에 대 한 제거 되었습니다 하지만 테스트 중 모두 검은색 큐 테이블 뒤에 직면 하 고, 경기장 앞 4 큐. (D) A 대표 개체 (및 규모에 대 한 눈금자) 하는 OLT 또는 NORT 마우스 테스트 적합 합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

  1. 이러한 개체를 확인 합니다.
    1. 사용 될 실험 쥐의 섹스, 스트레인, 그리고 연령 집단 대표에 8 야생-타입 마우스의 최소 얻기 (예: 6 9 주 된 여성 및 남성 C57Bl/6 쥐).
    2. 매일 3-5 일 전에 테스트의 과정을 통해 1 분에 대 한 모든 쥐를 처리 합니다.
    3. 4의 그룹으로 마우스를 분할 하 고, 이미 홀로 지 내게 하지 그들이 경우 깨끗 한 감 금 소를 들고 개별으로 이동.
    4. 시험장에 갖다 고 적어도 30 분 적응 하도록 허용.
      참고: 이러한 30 분을 위한 공간에서 실험의 존재 줄일 것입니다 쥐에 대 한 스트레스는 작업 하는 동안 특히 경우에 실험 자 남성20.
    5. 새 환경 순응 이루어집니다는 실험 시작, 비디오 녹화를 시작 하는 후에.
    6. 각 마우스 (릴리스 코너 라고 함)는 경기장의 한 모퉁이의 벽을 직면 하 고 (그림 2A).
    7. 10 분 동안 자유롭게 경기장 탐험 쥐를 수 있습니다.
    8. 동영상을 기록 중지 합니다.
    9. 20 분 동안 그들의 깨끗 한 들고 연습장에 마우스를 반환 합니다.
    10. 깨끗 한 동물 시설 모든 경기장 청소 방법, 다음 사용 하기 전에 후 각 신호를 최소화 하기 위해 70% 에탄올으로 닦아 같은 것이 좋습니다.
    11. 개체는 경기장, 6 x 6 cm2 (그림 2B) 그 코너의 각 벽에 균형 세력 그런 2 비 릴리스 모서리 근처 2 다른 개체를 부착 양면 테이프를 사용 하 여.
    12. 비디오 녹화를 시작 합니다.
    13. 릴리스 모서리에 벽을 직면 하는 각 마우스를 놓습니다.
    14. 무대와 10 분 동안 자유롭게 개체를 조사 하는 쥐를 수 있습니다.
    15. 동영상을 기록 중지 합니다.
    16. 장소 쥐 20 분 동안 그들의 깨끗 한 지주 장에 다시.
    17. 깨끗 한 모든 경기장 및 동물 시설 개체 청소 후 각 신호를 최소화 하기 위해 70% 에탄올으로 닦아 같은 방법을 권장 합니다.
    18. 모든 개체 (적어도 3 개의 다른 개체 OLT와 NORT 실시 하는 경우) 각 마우스와 함께 테스트 되었습니다 때까지 동일한 위치에 부착의 새로운 개체 2 개 교육 실험을 반복 합니다.
    19. 개체 위에 앉아 마우스를 허용 하는 개체를 제외 합니다.
    20. 4 단계에 따라 각 개체를 각 마우스의 조사 시간을 분석 합니다.
    21. 음수 또는 양수 값이 기본 개체를 제외 합니다.

3. 행동 테스트 실시

  1. 테스트 하기 전에 1 주: 행동 테스트를 실시 하는 개인에 게 친 하 게
    1. 성인 6 9 주 된 여성 및 남성 C57Bl/6 마우스 매일 3-5 일 전에 테스트의 과정을 통해 1 분에 대 한 처리 합니다.
  2. 제 1 일: habituation 세션
    1. 4의 그룹으로 마우스를 분할 하 고, 이미 홀로 지 내게 하지 그들이 경우 깨끗 한 감 금 소를 들고 개별으로 이동.
    2. 시험장 갖다 고 적어도 30 분 동안 시험장에 적응 하도록 허용.
      참고:: 이 분을 위한 공간에서 실험의 존재는 실험 자 남성20인 경우에 특히 작업 동안 쥐에 대 한 스트레스를 줄일 것입니다.
  3. 새 환경 순응 이루어집니다는 실험 시작, 비디오 녹화를 시작 하는 후에.
  4. 경기장 (경기장 당 한 마우스)에서 각 마우스를 놓습니다 릴리스 모서리 (그림 2A)의 벽을 직면 하 고.
  5. 6 분 동안 자유롭게 경기장 탐험 쥐를 수 있습니다.
  6. 동영상을 기록 중지 합니다.
  7. 시도 간 간격 (ITI) 동안 그들의 깨끗 한 들고 연습장에 마우스를 반환 합니다.
  8. 깨끗 한 동물 시설 모든 경기장 청소 후 각 신호를 최소화 하기 위해 70% 에탄올으로 닦아 같은 방법을 권장 합니다.
  9. 각 마우스에 대 한 3 habituation 세션의 총 단계 3.3-3.9 두 번 더 반복 합니다.
  10. 자신의 집 새에 모든 쥐를 반환 합니다.
  11. 동물 시설 70% 에탄올으로 닦아 같은 청소 권장 사용 다음 날 전에 후 각 신호를 최소화 하기 위해 모든 경기장을 청소.
  12. 제 2 일: 교육 시험, OLT, NORT
    참고:는 NORT 옵션 테스트입니다.
    1. 24 시간 후 테스트 룸에 쥐의 동일한 그룹을 가져오고 적어도 30 분 전날에 habituation 세션 전에 해 서 시험장에 적응 하도록 허용.
    2. (그림 2B) 경기장에 배치 하는 2 개체를 사용 하 여 훈련 시험을 실시 합니다.
      1. 그들은 경기장에 균형 세력 그런 개체 6 x 6 cm2 2 비 릴리스 모서리에서 부착 양면 테이프를 사용 하 여.
      2. 비디오 녹화를 시작 합니다.
      3. Habituation 세션 동안 릴리스 코너 벽에 직면 하는 각 마우스를 놓습니다.
      4. 무대와 10 분 동안 자유롭게 개체를 조사 하는 쥐를 수 있습니다.
      5. 동영상을 기록 중지 합니다.
      6. 20 분의 일일이 그들의 깨끗 한 지주 장에 다시 장소 마우스.
      7. 깨끗 한 모든 경기장 및 동물 시설 개체 청소 후 각 신호를 최소화 하기 위해 70% 에탄올으로 닦아 같은 방법을 권장 합니다.
    3. OLT를 수행 합니다.
      1. 새로운 비 자료 코너에 예 심 훈련에 사용 되는 개체 중 하나를 이동 하 고 개체 더블 양면 테이프 (그림 2C)와 그 코너의 각 벽에서 6 cm을 부착.
        참고: 다른 개체 예 심 훈련 기간 동안 그것이 있어야 합니다.
      2. 비디오 녹화를 시작 합니다.
      3. 릴리스 모서리에 벽을 직면 하는 각 마우스를 놓습니다.
      4. 10 분에 대 한 개체를 조사 하는 쥐를 수 있습니다.
      5. 동영상을 기록 중지 합니다.
      6. 20 분의 일일이 그들의 깨끗 한 지주 장에 다시 장소 마우스.
      7. 깨끗 한 모든 경기장 및 동물 시설 개체 청소 후 각 신호를 최소화 하기 위해 70% 에탄올으로 닦아 같은 방법을 권장 합니다.
    4. NORT를 수행 합니다.
      1. 개체를 새로운 개체와 OLT 동안 이동 하지 교체 하 고 새로운 개체 더블 양면 테이프 (그림 2D)와 코너의 두 벽에서 6 cm을 부착.
      2. 비디오 녹화를 시작 합니다.
      3. 릴리스 모서리에 벽을 직면 하는 각 마우스를 놓습니다.
      4. 10 분에 대 한 개체를 조사 하는 쥐를 수 있습니다.
      5. 동영상을 기록 중지 합니다.
      6. 자신의 집 새에 다시 마우스를 놓습니다.
      7. 깨끗 한 모든 경기장 및 동물 시설 개체 청소 다음 사용 하기 전에 후 각 신호를 최소화 하기 위해 70% 에탄올으로 닦아 같은 방법을 권장 합니다.

행동 테스트 설정, 마우스 탐색 활동 평가를 위한 상자 안의 개체; 이미지 시리즈 A-D.
그림 2: 재판에 대 한 경기장 구성. (A) 오픈 필드 개체 없이 아레나 habituation 세션에 대 한 테스트. 검은색 화살표 릴리스 모서리를 나타냅니다. 이 코너 각 분야에서 동일한 상대 위치와 모든 마우스 테스트 한 모든 재판에 대 한 일관성 있어야 합니다. (B) 훈련 재판에 대 한 두 개의 서로 다른 개체는 그들의 각각 벽에서 6 x 6 cm에 오픈 필드에 확보. (C)에 OLT, 하나의 개체는 새로운 위치, 벽과 하지 릴리스 코너 또한 6 x 6 cm 이동 합니다. (D)에 대 한 the NORT, OLT에서 고정 된 개체는 OLT에서 이동된 개체는 이제 익숙한 개체 소설 개체로 바뀝니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

4. 행동 테스트 데이터 분석

참고: 비디오의 분석 이상적으로 적어도 2 명의 독립적인, 멀게 경험에 의해 완료 되어야 한다.

  1. 비디오 파일을 엽니다.
  2. 적극적인 수사를 확인 하는 데 화면을 통해 각 개체 주위 2 cm의 테두리를 제공 하는 투명 한 원 적용. 경기장에 배치 하는 통치자와 비디오 파일 이미지를 사용 하 여이 표를 보정.
  3. 마우스 동작을 관찰 하 고 기록 시간 마우스 적극적으로 조사 하 고 그것의 코 2 cm의 최대 거리에 있는 개체에서 해당 개체에서 지적으로 구성 된 개체.
    1. 레코드 타임 스탬프 마우스 개체를 조사 하 고 중지 하는 경우 개체 및 타임 스탬프를 조사 하기 시작 합니다.
    2. 재판 기간에 대 한 경기장에서 두 개체에 대해이 반복 합니다.
    3. 마우스 조사 각 개체, 개체의 각 인스턴스에 대 한 정지 시간에서 시작 시간을 뺀 모든 이러한 값을 추가 하 여 누적 시간을 계산 합니다.
  4. 총 조사 시간 또는 다음 수식 차별 색인의 %를 계산.
    1. 총 조사 시간 % 계산 =
      참신성 인식 공식: 인지 행동 분석을 위한 비율 방정식도.
      참고: 값을 50% 이상 소설 위치 또는 개체의 큰 조사를 나타냅니다.
    2. 차별 지 계산 =
      참신성 선호도 비율 방정식; 인지 행동 분석을 위한 수학 공식.
      참고: 양수 값 소설 개체를 조사 하 고 더 많은 시간을 나타냅니다. 0의 차별 색인 동등한 시간 두 개체와 함께 보낸 나타냅니다.
  5. 그래픽으로 결과 비교 되는 그룹의 수에 대 한 적절 한 t-검정 또는 ANOVA를 사용 하 여 완전 한 통계 분석을 나타냅니다.

Representative Results

그림 3 남성과 여성의 성인 C57Bl/6 마우스이 프로토콜6을 사용 하 여 얻은 전형적인 긍정 및 부정적인 결과의 예를 제공 합니다. OLT와 NORT 데이터의 해석 항상 그룹의 집계 데이터에 적용 됩니다 (아래 내용 참조). 단일 마우스에 대 한 조사 시간 메모리 또는 메모리의 부족으로 해석 될 수 없습니다. 그러나, 쥐의 그룹의 성능 (즉., 여러 샘플) 또는 통계 테스트를 사용 하 여 고정된 기회 수준에 다른 그룹에 비교 될 수 있다. 전형적인 훈련 재판 중 쥐의 그룹 표시 되지 않습니다 중요 한 기본 평균 개체 중 하나에 대 한 그들은 둘 다 동등 하 게 소설 그리고 쥐 (그림 3A 와 3B) 본질적으로 음수 또는 양수 값을 필요가 없습니다. 쥐의 그룹의 집계 데이터 훈련 기간 동안 다른 한 개체에 대 한 상당한 선호를 보여주면, 그 고유한 기본 설정/혐오 후속 실험에서 결과 혼동 것입니다 때문에 이러한 개체 사용 하지 해야 합니다. 또한, 모든 마우스의 총 조사 시간 최소 기준을 충족 해야 합니다 (일반적으로 20 초21에서 설정) 메모리의 후속 테스트에 영향을 미칠 수 있습니다 조사에서 기준 차이가을 비교 한다.

OLT, 동안 메모리 개체 위치에 대 한 지출 평균 이동된 개체 (그림 3A)와 총 조사 시간의 50% 이상 크게 쥐에 의해 반영 된다. 개별 마우스의 총 조사 시간은 크게 다릅니다, 결과 (그림 3B) 개체에 대 한 차별 색인으로 묘사 더 나은. 그림 3B 에서 평균 차별 색인에 크게 증가 이동 했다 쥐 개체와 함께 더 많은 시간을 보낸 것을 나타냅니다. 증가 백분율 시간 또는 차별 색인에 의해 측정 여부 개체 이동 후의 조사에서 증가 쥐 개체는 훈련 기간 동안 위치 기억 나왔다.

이 프로토콜의 마지막 재판 개체 인식 메모리를 평가합니다. 1 쥐 그룹이 대표적인 예를 들어 각각 50%와 0, 고정된 컨트롤 값에 비해 긍정적인 차별 지 (그림 3D) 뿐만 아니라 조사 시간 (그림 3C)의 더 높은 평균 백분율을 보여 줍니다. 과 같이 OLT 데이터 개별 쥐 간의 총 조사 시간에 중요 한 변화는 경우 차별 색인이 이다 가능성이이 데이터를 시각화 하려면 더 나은 방법. 그림 3E 는 NORT에이 테스트 (내용 참조)에서 발생할 수 있는 통계 합병증 중 일부 2-그룹 비교의 예를 보여 줍니다. 그룹 B에 대 한 1-표본 t-검정 조사 50% 이상 크게 보여, 같은 테스트 그룹 A는 하지 않습니다. 이 A와 B는 서로 다른 의미 하지 않는다. 그룹의 차이 확인 하려면 비교 하는 a 그룹 B 별도 2 표본 비패라메트릭 맨-휘트니 검정을 수행 합니다. 이 대표적인 그룹 데이터의 2-표본 비패라메트릭 맨-휘트니 검정 큰 차이 보여줍니다 (p = 0.66) 소설 개체 조사 시간에 두 그룹 사이.

모두는 OLT와 NORT는 개체의 본질적인 가치에 매우 민감한 이며 개체 등가의 철저 한 테스트 결과 혼동 수 없는 본질적인 바이어스 인지 확인 하는 데 필요한. 그림 3 층 및 3g 부적절 한 개체 선택의 예를 보여줍니다. 파일럿 테스트에서 4의 샘플 크기와, 마우스 동향 지출 개체 개체 B (그림 3 층)에 대 한 쌍이 될 때 A와 조사 시간의 50% 미만으로 보였다. 이러한 개체 소설 개체 및 16의 큰 샘플 크기 NORT 개체 A에에서 사용 했다, 쥐 크게 50% 미만 개체 A와 조사 시간 (그림 3)를 보냈다. 소설 개체에이 혐오는 쉽게 인식할 수 있는 실험에 기술 결함으로 여기 고 고유의 기본 설정/혐오에 대 한 개체의 파일럿 테스트 하는 것은 필수적입니다 하는 이유를 보여준다.

새로운 물체 인식 테스트 결과 차트; 차별 지수; 행동 분석
그림 3: 야생 타입 성인 C57Bl/6 마우스 행동 테스트 데이터. (A) 조사, 개체 이동 후의 OLT 쇼 크게 증가 대 예 심 훈련 기간 동안 이동된 개체의 % 총 조사 시간의 비교. p < 0.0001, 쌍체 t 검정입니다. (B) 대표 결과 훈련과 OLT 재판 차별 색인으로 표시 하는 동안 이동된 개체 조사에 대 한 유사 하 게 보여 크게 증가 개체의 조사에서 이동 후. p < 0.0001, 쌍체 t 검정입니다. (C)는 NORT에 소설 개체의 % 총 조사 시간 소설 개체 조사에 대 한 중요 한 선호를 보여줍니다. * * p = 0.0024, 1-표본 t-검정 vs. 50 %입니다. (D) 대표 소설 개체 조사 NORT 차별 색인 마찬가지로 소설 개체 조사에 대 한 기본 설정 표시 표시에 대 한 결과. * * p = 0.0024, 1-표본 t-검정 vs 0. (E) 마우스의 두 개의 서로 다른 그룹을 포함 NORT 분석의 대표적인 결과. B 조 1-표본 t-검정에 의해 50%에서 크게 다릅니다 (* * p = 0.0024), 그룹 A는 하지 않습니다만 (p = 0.5837). 별도 분석에서 그룹을 비교 하는 2 표본 맨-휘트니 검정 고르지 그룹 크기 때문에 사용 되 고 조사에 큰 차이 발견 (p = 0.66, ns). (F) % 시간 유효성 검사 실험 작은 샘플 크기에 개체와 개체에 대 한 반감으로 추세를 보여줍니다. p = 0.2159, 1-표본 t-검정. (G) 더 큰 샘플 크기와는 NORT에 새로운 개체로 사용 (F)에서 개체, 개체에 상당한 혐오 감을 발견 되, 비록 소설 개체. * p = 0.0270, 1-표본 t-검정. 이 개체 선택에서 기술적인 실패의 예입니다. 데이터는 C-E6이전 간행물 적응 패널에서 ± SEM. 데이터를 의미 하는 대로 표시 됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Discussion

저자는 공개 없다.

Disclosures

여기 우리 디자인, 비용, 및 건설의 필수 장비를 포함 하 여 murine 개체 위치 및 소설 개체 인식 행동 테스트, 경제적인 설립에 대 한 포괄적인 지침을 포함 하는 프로토콜을 제공 뿐만 아니라 행동 테스트, 데이터 수집 및 분석의 실행.

Acknowledgements

이 작품은 NIH에서 R00 NS089938 및 EDK 만성 뇌 손상 및 오하이오 주립 대학에서 발견 테마에서 씨앗 자금에 의해 투자 되었다.

Materials

570691 양면 테이프 가변 NA
사인 화이트 - 9% 반투명 및 불투명 컬러 캐스트 아크릴(Chemcast)TAP 플라스틱NA1/4" x 15.75" x 15.75" with 라우팅 엣지
사인 화이트 - 9% 반투명 및 불투명 컬러 캐스트 아크릴(Chemcast)TAP 플라스틱NA1/4" x 15.75" x 16.5" 라우팅 엣지
사인 화이트 - 9% 반투명 및 불투명 컬러 캐스트 아크릴(Chemcast)TAP 플라스틱NA1/4" x 16.5" x 16.5", 라우팅 가장자리
TAP 아크릴 시멘트(1pt.)TAP PlasticsNA
16 G 하이포 애플리케이터TAP PlasticsNA
Debut 비디오 캡처 소프트웨어 프로 에디션NCH 소프트웨어NA
Stanely SAE/Metric Comb SquareGrainger6R171
Logitech Pro Stream 웹캠 C922xCDW4429927
Belkin 16' USB 2.0 액티브 연장 케이블CDW
Panduit Pan-Way LD Surface Raceway (8')CDW300902
공간적/환경적 단서변수NA
테스트를 위한 개체변수NA
70% 에탄올가변NA

References

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