단일 벽 탄소 나노튜브 (SWCNT)에 의해 생체 내에서 여러 Myeloma 세포 성장 억압-MALAT1 센스 Oligos 전달

요약

이 원고는 단일 벽 탄소 나노튜브 (SWCNT)의 합성에 설명 합니다-는 SWCNT의 안정적인 납품과의 강력한 치료 효과 보여 주는 MALAT1 센스 gapmer DNA oligonucleotide (SWCNT-안티-MALAT1) 활용 안티-MALAT1 생체 외에서 그리고 vivo. 합성, 수정, 활용, 사용 하는 방법 그리고 주입 SWCNT-안티-MALAT1의 설명.

초록

단일 벽 탄소 나노튜브 (SWCNT)는 새로운 유형의 나노, 세포, 단백질, oligonucleotides, 합성 작은 분자 약물 등으로 약의 여러 종류를 제공 하는 데 사용 되었습니다. SWCNT 사용자 정의 크기, 큰 표면 영역 있고 유연 하 게 표면;에 다른 수정 마약으로 바인딩할 수 있습니다. 따라서, 셀으로 마약을 수송 하는 이상적인 시스템 이다. 긴 noncoding RNAs (lncRNAs)는 200 이상 noncoding RNA의 클러스터 nt는 단백질에 번역 될 수 없습니다 하지만 생물 학적 및 병 태 생리 과정에 중요 한 역할. 전이 관련 된 폐 선 암 사본 1 (MALAT1)은 매우 보존된 lncRNA 이다. 그것은 상부 MALAT1 여러 발성 (MM)를 포함 한 다양 한 암에서의 빈약한 예 지에 관련 된 시연 했다. 우리 MALAT1 mm; DNA 수리 및 세포 죽음 통제 밝혀졌다 따라서, MALAT1 m M에 대 한 치료 대상으로 간주 될 수 있습니다. 그러나, 센스 oligo의 억제/최저 MALAT1 vivo에서 효율적인 배달 여전히 문제입니다. 이 연구에서 우리 못 2000 SWCNT 수정 그것에 안티 MALAT1 올리고 켤레, 테스트 생체 외에서 화합물의 배달, 전파 m M 마우스 모델, 정 맥 주입 하 고 나타내는 m M 진행의 중요 한 금지를 관찰 그 SWCNT 안티 MALAT1 gapmer DNA에 대 한 이상적인 배달 셔틀 이다.

서론

SWCNT 소설을 접한 제공할 수 있는 다양 한 유형의 약물, 단백질, 작은 분자, 핵 산 등 안정적이 고 효율적으로 이상적인 tolerability와 시험관¹ 에 vivo에서²최소 독성입니다. 기능성된 SWCNT 좋은 생체 적합성 및 물 가용성, 작은 분자에 대 한 셔틀으로 사용 될 수 있으며 세포 막^3,,45에 침투 하는 그들을 가져올 수 있다.

lncRNAs는 RNA의 클러스터 (> 200 nt) 게놈에서 mRNA를 복사할 수는 있지만 단백질에 번역 될 수 없습니다. LncRNAs 유전자 식⁶ 의 규칙에 참여 하 고 개시와 대부분의 유형의 암, m M^7,8,9등의 진행에 관련 된 증거를 증가 보이고 있다. MALAT1 핵 농축 noncoding 사본을 2 (NEAT2)은 매우 보존....

프로토콜

모든 실험 동물 관련 된 사전 (기관 동물 관리 및 사용 위원회) 클리블랜드 클리닉 IACUC에 의해 승인 되었다.

1입니다. 기능성된 SWCNTs의 합성

1. SWCNTs, DSPE-PEG2000-아민의 5 mg 및 유리 섬광 유리병 (20 mL) 소독된 nuclease 무료 물 5 mL의 혼합 1 밀리 그램. 흔들어 모든 시 약을 완전히 분해 하는 게.
2. 실 온에서 1 h 40 W의 전력 레벨에서 물 목욕 sonicator에 유리병을 sonicate (RT, 20 분 x 3, 과열 방지를 위해 물 매 20 분을 변경). 그리고, 24000 x g 6 h에서 원심 표면에 뜨는 솔루션을 수집 합니다. 이 기능 SWCNT 솔루션 2 개월 동안 4 ℃에 저장할 수 있습니다.
3. 이어서 소독된 nuclease 무료 물 4 mL 100 kDa MWCO 원심 필터 장치, 단계 1.2에서에서 SWCNT 솔루션의 1 mL를 추가 합니다. 여분의 DSPE-PEG2000-아민을 제거 하는 RT에 4000 x g 에서 10 분 원심 분리기. 물과 원심 분리 5의 4 mL의 추가 반복 x. 남은 SWCNT 솔루션의 0.5 mL 이상 각 원심 분리 후 필터에 남아 있을 것입니다.
....

결과

안티 MALAT1 gapmer m M에서 DNA의 억제 효과 보여, 우리 MALAT1의 식을 무 너 뜨 하 고 H929 및 MM.1S 세포에 그것을 사용. 48 시간 후, 셀 눕 힘 효율성의 분석을 위해 수집 하 고 안티 MALAT1 gapmer 또는 컨트롤 DNA transfected 세포에 있는 apoptosis 상태. qRT-PCR 결과 안티 MALAT1 gapmer DNA 뜨 MALAT1 식 H929 및 MM.1S 세포에 효율적으로 나타났다 (그림 2A). Apoptosis의 상태 cytometry 아래로 MALAT1 크게 apoptosis 유도 공개에 의해 결정 되었다 (그림 2B).

이 .......

토론

LncRNAs m M^7,,89;를 포함 하 여 암에 수많은 생리 및 병 태 생리 절차의 규칙에 참여를 보이고 있다는 증거 그들은 센스 oligonucleotides^20,,2122에 의해 실현 될 수 있는 암 치료에 대 한 타겟이 될 가능성이 있다. 미국 식품 및 의약품 안전 청 (FDA)는 세포 망막²³, homozygous 가족성 콜레스테롤 혈 증²⁴에 대 한 nusinersen mipomersen fomivirsen를 포함 하 여 여러 센스 oligonucleotide 약물 승인 척추 근육 위축

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
SWCNTs	Millipore-Sigma	704113
DSPE-PEG2000-Amine	Avanti Polar Lipids	880128
bath sonicator	VWR	97043-992
4 mL 원심 필터	Millipore-Sigma	Z740208-8EA
UV/VIS 분광분석기	Thermo Fisher Scientific	accuSkan GO UV/Vis Microplate 분광광도계	808nm에서 0.0465L/mg/cm의 흡광 계수
Sulfo-LC-SPDP	ProteoChem	c1118
DTT 용액	Millipore-Sigma	43815
NAP-5 컬럼	GE Healthcare	17-0853-01
생체 내 이미징 시스템	PerkinElmer
NOD. CB17-Prkdcscid/J 마우스	Charles River lab	250
유세포 분석기	Becton Dickinso
Lipofectamine	Invitrogen	11668019	Lipofectamine2000
Fetal bovine serum (FBS)	Invitrogen	10437-028
RMPI-1640 medium	Invitrogen	11875-093
MALAT1-QF:	IDT에 의해 합성 회사		5'- GTTCTGATCCCGCTGCTATT - 3'
MALAT1-QR:	IDT Company		5'- TCCTCAACACTCAGCCTTTATC - 3'
GAPDH-QF :	IDT Company		5 '- CAAGAGCACAAGAGGAAGAGAG - 3 '
GAPDH-QR:	IDT Company		5'- CTACATGGCAACTGTGAGGAG - 3'
SYBR Green PCR 마스터 믹스를 사용한 정량적 PCR	Thermo Fisher Scientific	A25780
RevertAid first-stand cDNA 합성 키트	Thermo Fisher Scientific	K1621
anti-MALAT1	synthesized by IDT Company		5'-mC*mG*mA*mA*mA*C*A*T*T *G*G*C*A*C*A*mC*mA*mG*mC*mA-3'
세포 생존도 분석 키트	Promega Corporation	G7570	CellTiter-GloLuminescent 세포 생존도 분석 키트
accuSkan GO UV/Vis 마이크로플레이트 분광 광도계	Thermo Fisher Scientific
원심 필터	Millipore-Sigma	UFC910008
SPSS 소프트웨어	IBM	버전 24.0
D-Luciferin	Millipore-Sigma	L9504

에 의해 합성에 의해 합성 에 의해 합성됨 (영어)