우리는, 사용 하 여 인간의 혈 청 기본 인간 세포 감염 부 량 정량 실시간 중 합 효소 연쇄 반응에 의해 Zika 바이러스 감염에 뎅기열 바이러스에 대 한 기존의 면역의 효과 평가 하는 방법을 설명 합니다.
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이 논문에서
요약
초록
Flavivirus Zika Guillain-바레 증후군 등 유아, microcephaly 신경 합병증의 최근 출현은 심각한 공공 안전 문제를 가져왔다. 위험 요인 중 항 체 의존 향상 (ADE) 포즈 가장 중요 한 위협을 Zika 바이러스 (ZIKV)의 최근 재 출현은 주로 지역 인구는 다른 밀접 하 게 관련을 사전 면제의 상태 flaviviruses, 특히 뎅기열 바이러스 (DENV) 여기, 우리 ZIKV 감염 기본 인간 세포 또는 세포에 DENV에 대 한 인간의 혈 청 항 체의 효과 측정에 대 한 프로토콜을 설명 합니다.
서론
모기 품 어진 바이러스 성 질병 가운데 Zika 감염1가장 임상적으로 중요 한 중 하나입니다. 감염은 flavivirus ZIKV는, 대부분의 경우에는 기본 벡터1,2 Aedes aegypti 사용에 의해 발생 합니다. 그러나, 일부 ZIKV 발생3주 벡터로 Aedes albopictus 보고 연구 있다. 많은 경우에서 무 증상 감염 이지만, 가장 일반적인 증상은 발열, 두통, 근육 통증2. 아무 치료 또는 백신 ZIKV 감염에 사용할 수 있는 이며 사용 가능한 치료는 주로 지원. 남아메리카에 있는 ZIKV의 최근 발발 microcephaly2라는 태아에 neurodevelopmental 장애에 약 20-fold 증가 질병의 심한 경우에 지도 했다. 남미 지역 여러 arboviruses DENV 및 웨스트 나 일 바이러스에 발병으로 조사 여부 다른 flavivirus(es)에 이전 면역 역할 ZIKV 감염 및 질병의 심각도에 결정적 이다.
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프로토콜
이 연구에 사용 된 혈 청 샘플은 콜롬비아에서 코 호트의 인간 참가자에서 얻은 했다. 샘플 컬렉션 대학 데 팜 플로 나 (콜롬비아, 남 아메리카)와 로스 Potios 병원8내부 검토 위원회 (IRB)에 의해 승인 되었다. 샘플 제공 익명으로 하 고 조사 했다 환자 정보에 액세스할 수 없습니다. 혈 청 샘플 DENV serotype 확인 했다. 샘플 추가 DENV 감염을 중화 확인 되었다 생체 외에서. 컨트롤에 대 한 미국에서 건강 한 개인 (HC)에서 혈 청 샘플 사용 되었다.
참고: 이 프로토콜은 Fcγ 수용 체를 표현 하는 모든 인간 세포 종류에 에이드의 ZIKV 복제 검사를 사용할 수 있습니다. 프로토콜의 구성 부품 (그림 1).
1. 셀 시드 및 감염 설치
참고: 이 특별 한 연구, 인간의 기본 세포 또는 U937 myelomonocytic 셀 라인 (ATCC-CRL-1593.2)에 대 한 사용 되었다. 셀 5% 이산화탄소 (CO2)와 함께 37 ° ....
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결과
그림 1, 에이드 프로토콜 수행에 관련 된 모든 단계의 단계별 도표 그림이 이다. 그것은 DENV에 기존의 면역 인 에이드의 ZIKV의 전체 절차를 보여주는 회로도입니다. 그림 2 는 어떻게 인간의 혈 청 샘플 세 가지 그룹으로 분류 되었다: DENV 감염 확인 샘플 이라고 DENV에 감염 된 그룹, DENV 항 체 확인 샘플은 DENV 노출 그룹으로 하 고 건강 한 DENV 중화 항 체 또는 RNA 개인 세라 건강 한 제어 (HC) 그룹을 이라고 합니다. (그림 2)입니다.
모든 혈 청 샘플 ZIKV와 단지를 만들기 위해 허용 되었다 고 대 식 세포 세포를 감염 하는 데 사용 했다. 48 h 바람직합니다.......
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토론
다른 DENV serotypes 에이드로 이어지는 DENV 항 체의 분11효과적인 백신 개발을 방해 했다. ZIKV 같은 가족 Flaviviridae에 속해 있으며 다른 flaviviruses, 특히 DENV12와 상당한 상 동. ZIKV와 DENV에 대 한 항 체를 중화의 주요 목표 두 바이러스13,,1415사이 매우 높은 구조 및 제 사기 순서 상 동을 공유 하는 봉투 단백질 이다. 그것은 DENV 또는 ZIKV를 사전 면제 다른 바이러스8,16의 감염을 향상 시킬 수 입증 되었습니다.
상 패 분석 실험
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공개 사항
저자는 선언할 수 없다.
감사의 글
이 작품 (T.M.C.)에 1R21AI129881-01, 국가 신흥 전염 성 질환 연구소, 그리고 보스턴 대학 학부에서 시작 자금 아낌없이 지원 했다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 소 태아 혈청 | 제미니 | 100-106 | |
| 아이사이클러 | BioRad | 785BR02188 | 모델 번호 CFX96 광학 모듈 |
| 마이크로퓨지 18 원심분리기 | Beckman Coulter | 367160 | |
| Nanodrop-1000 | 열과학 | 1072 | |
| Quantifast SYBR-One step RT-PCR 키트 | 키아겐 | 204154 | 1단계 RT-qPCR |
| RNeasy RNA 분리 키트에 사용됩니다 | 키아겐 | 74106 | RNA 추출에 사용 |
| RPMI-medium | Gibco | 11875093 |
참고문헌
- Hayes, E. B. Zika virus outside Africa. Emerging Infectious Diseases. 15, 1347-1350 (2009).
- Grard, G., et al. Zika virus in Gabon (Central Africa) - 2007: a new threat from Aedes albopictus. PLoS Neglected Tropical Diseases. 8 (2), ....
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재인쇄 및 허가
