Folate 수용 체 베타 대 식 세포와 거 대 세포 동맥에서 혈관 면역 Microenvironment를 프로 파일링 하는 Immunohistopathologic 연구

요약

프로토콜은 조직 검사 및 immunohistochemistry folate 수용 체 베타 macrophage와 총 면역 세포와의 관계는 거 대 세포 동맥 생 검 측 두 엽 동맥에에서 침투 하는 프로 파일의 사용을 보여 줍니다.

초록

거 대 세포 동맥 (GCA) 만성 면역 중재 매체-큰 크기의 동맥의 영향을 미치는 질병 노인 이다. GCA 매니페스트 관절염과 두통의 폐색 증상, 뇌졸중 또는 손실 비전. 대 식 세포 및 T-헬퍼 세포 혈관 벽에 침투 하 고 선박 손상 및 허 혈 이어질 프로 염증 반응을 생산. 날짜 하려면, 아무 GCA 바이오 마커 질병 활동 및 가이드 치료 응답을 감시할 수 있는 있다.

Folate 수용 체 베타 (FRB)는 glycosylphosphatidylinositol 단백질을 세포 막에 정박 하 고 일반적으로 myelomonocytic 혈통 및 또한 종양 및 류 마티스 활 액 세포, 골수성 백혈병 세포의 대부분을 표현 어디의 식을 질병의 심각도와 상관 한다. FRB의 능력 화합물 엽 산, 엽 산-어원이 같은 말 및 antifolate 마약을 했다 druggable 대상을 암 및 염증 성 질환 연구. 이 보고서 식 및 GCAimmunopathology에 관하여 FRB의 배포를 평가 하는 데 사용 하는 조직 및 immunohistochemical 방법을 설명 합니다.

GCA 및 일반 컨트롤에서 포 르 말린 고정 파라핀 포함 및 측 두 엽 동맥 biopsies Hematoxylin 및 오신 조직 조직학을 검토 하 여 pathognomonic 기능 스테인드 했다. Immunohistochemistry는 FRB, CD68 CD3 식 감지 하 사용 되었다. 현미경 분석 척도 10 선택 된 고 전력 필드 섹션 및 동맥 벽에 그들의 각각 위치에 긍정적으로 얼룩진된 셀의 수를 수행 했다.

Lymphohistiocytic (LH) 염증 내 증식 동반 및 방해 탄력 있는 lamina 컨트롤에 없음 GCA에 보였다. LH 침투는 약 60% 40%와 세포 대 식 세포의 구성 되었다. FRB 식 세포, CD68 + macrophage 총인구의 31%를 구성 하 고 미디어와 adventitia로 제한 했다. 아니 FRB 컨트롤에서 보였다.

이 프로토콜 GCA에 혈관 면역 microenvironment 기준으로 FRB macrophage의 고유한 숫자 및 공간 패턴을 보여주었다.

서론

거 대 세포 동맥 (GCA)의 매체-큰 동맥, 대동맥 및 그것의 분 지를 대상으로 하 고 노인에 영향을 미치는 염증 성 질환 이다. 그것은 온화한 두통, 턱 통증, 시력 손상, 뇌졸중과 조직 괴 저 등 심각한 허 혈 성 합병증을 선물 한다. 진단은은 적혈구 침 강 속도 (ESR)와 측 두 엽 동맥 생 검 (탭)¹에 별개 조직 패턴 같은 높은 염증 성 마커에 의해 확인 된다. GCA는 가장 일반적인 성인 맥 고 진단에 대 한 얻은 측 두 엽 동맥의 내게 필요한 옵션 하나 더 쉽게 그것의 병 인 연구를 활성화 하는 다른 vasculopathies에 비해 우위를 선물 한다. 탭에 일반적인 연구 결과 세포/histiocytes 및 일반적으로이 구분 하는 탄력 있는 lamina의 동시 파괴 tunica intima, 미디어, 그리고 adventitia의 모든 혈관 층에 걸쳐 발견 하는 T 세포의 침투를 포함 구획². 도우미의 채용 다음 T (Th) 세포, 특히 Th1과 Th17 하위 인터 루 킨-17 분 비는, 현재 증거 보여줍니다 GCA 혈관 adventitia에 수지상 세포를 활성화 하는 알 수 없는 항을 포함 하 고 인터페론-감마 (IFG) 각각. IFG 다음 신병 고 cytokines 및 프로 테아 제를 생산....

프로토콜

설명 된 모든 방법은 펜 주 기관 검토 위원회에 의해 승인 되었다.

1. histopathological 준비, 그리고 측 두 엽 동맥 생 검 후 처리

참고: 측 두 엽 동맥 생 검 (탭) 로컬 마 취 및 무 균 상태에서 인증 된 외과 의사에 의해 수행 됩니다. 후 수술 더 영향을 받는 쪽에 3 cm 동맥 섹션, 표본 즉시 24 h에 대 한 포 르 말린에 고정, 3 ~ 4 m m 섹션으로 나누어 이며 파라핀, 조직 블록에 적절 한 맞춤에 주의 깊은 관심을 지불에 포함 된는 다음 상 온에 저장 됩니다. 견본 선택 진료 기록을 확인 한 후 수행 됩니다. 진단은 류 마티스 1990 기준의 과목 3 5 도메인의 충족을 요구 하는 미국 대학에 기반: 나이 > 50 년, 새로운 두통, 측 두 엽 동맥 부드러움, 적혈구 침 강 속도 > 50 mm/시간 Westergren 메서드에서 비정상적인 탭입니다. 안전을 위해, 보호 장갑을 착용 해야 합니다 항상 표본, 화학 물질과 항 체를 처리 하는 경우.

1. 포함 된 블록에서는 톰을 사용 하 여 4-5 µ m 두꺼운 섹션을 잘라. 그리고 얼룩 Hematoxylin와 오신 (H & E). 품질 보증에 대 한 선택 된 정상....

결과

조직 결과

H & E tunica intima, tunica 매체에 있는 평활 근 세포에서에서 내 피 세포와 함께 정상 표본 시연된 정상적인 동맥 해부학에 얼룩과 섬유 아 세포와 피더 선박 등 이기종 콜라겐 매트릭스 라는 바사 vasorum tunica adventitia에서. 없는 염증 성 침투 식별 있다. GCA 긍정적인 일시적인 동맥 보통 심한 염증 세포/histiocytes, 림프 톨, 가끔 플라스마 세포, 및 multinucleated 거 대 한 셀의 집계를 보여주었다. Luminal 좁히기 지적 되었고 내부 탄력 있는 lamina (그림 1)의 내 두껍게 및 90% 파괴를 동반.

토론

GCA는 성인에서 가장 흔한 맥 그리고 그것의 pathologic 특징 T 조 수 세포의 강력한 조합을 보여준다 또한 다른 granulomatous 질병 또는 sarcoidosis 같은 vasculopathies에서 찾을 수 있는 대 식 세포를 활성화 하 고 granulomatous polyangiitis^2,3. GCA, 측 두 엽 동맥 매체-큰 크기의 동맥의 좋은 표시를 제공 합니다 및 조교 생 저장 될 수 있는 파라핀 블록에 년, 따라서 진단 신흥의 역할을 공부 하는 기회를 만드는 상당한 샘플을 제공 하 고 치료 목표는 vasculitic microenvironment에서 FRB 처럼. 우리가 액세스할 수 있는 조직 및 표준 immunopathologic는 FRB IHC 통해 안정적으로 분석 될 수 있는지 여부를 물어 방법을 제시 하는 이용을 했다. 우리의 연구 결과 입증 histopathology 및 IHC GCA에 다.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Microtome	Reichert-Jung
일반 및 젖빛 현미경 슬라이드 및 커버 슬립	Fisher Scientific
수직 랙	Fisher Scientific
광학 현미경	Olympus BX60
Acetone
	Dako Wash BufferS3006
마운팅 미디엄	Fisher Scientific	SP-15-100
Harleco Gill's III Hematoxylin	Fiisher Scientific 23-750-019
Harleco Eosin Y 1% 알코올 원료 용액	Fisher Scientific	23-749-977
10 mM 시트르산 단수화물 (pH 6.0)
폴리클로날 토끼 항엽산 수용체 베타	Manohar Ratnam		1:800에서 최적화
단클론 마우스 반인간 CD68	Dako	M071801	1:200에서 최적화
폴리클로날 토끼 항-CD3	Agilent Dako	A0452	1:100에서 최적화
고분자 염소 항-토끼/쥐 2차 항체	Dako
태반 조직			FRB 포지티브 대조군용