S100 단백질 및 단백질 유전자 제품 9.5에 대 한 면역 염색 직장 흡입 생 검을 이용한 히 르 츠 스프링 병의 진단

요약

이 프로토콜은 cal망막, S100 단백질 및 단백질 유전자 생성물 9.5에 대 한 면역 염색 직장 흡입 생 검을 하는 과정을 기술 한다. 히 르 츠 스프링의 질병에 대 한이 새로운 보조 제 진단 방법은 민감성 및 특이성 비율이 바람직하다.

초록

히 르 츠 스프링의 질병 (HD)는 유아에서 검거나을 전달 하는 무 능력 또는 어린이 장기 변 비로 임상적으로 나타나는 선 천 성 장 질환. 신경 절 세포 및 신경 비 대의 부재를 결정 하는 직장 흡입 생 검 (RSB)은 현재 헌팅턴 병 진단을 위한 가장 정확한 시험 이다. 전통적인 헤 마 톡 실린-에 오신 염색은 감도와 특이성을 결여 한다. 아 세 틸 콜린에 테라 제 염색은 복잡 한 과정으로 인해 널리 사용 될 수 없다. RSBs에서 실시 한, S100 단백질 및 단백질 유전자 제품 9.5 (PGP 9.5)에 대 한 면역 염색의 새로운 프로토콜은 96.49%의 높은 민감도와 특이성 비율 (95% 신뢰 구간, 0.88) 및 100% (95% 신뢰)를 나타냅니다. 간격, 0.97) 각각. 헌팅턴 병에 영향을 받는 분절은 종종 비 점 막 조직에서 신경 대의 마커가 되는 칼 레 티 인, S100 단백질 및 PGP 9.5의 발현의 부재로 서 존재 한다. 이 프로토콜은이 새로운 진단 방법의 자세한 운영 프로세스를 설명 합니다.

서론

히 르 츠 스프링의 질병 (HD)은 말단 장관¹의 다른 세그먼트에 신경 절 세포의 부족을 특징으로하는 일반적인 선 천 성 장 질환입니다. 인간 장 용 성 신 경계는 배아 신경 세포의 침 윤이 완료 될 때 형성 된다. 과정의 교란이 있고 침공이 완료 되지 못하면 신생아의 말단 장은 aganglionic²가 됩니다. 이 잠재적으로 치명적인 상태는 허쉬 스프링의 질병 이라고. 증식, 운동 성 및 창 자 성장은 성공적인 식민지 화에 대 한 세 가지 주요 구성 요소입니다.

전통적인 헤 마 톡 실린 및에 오신 (H & E) 염색은 제한 된 점 막 생 검으로 서 수술 로부터 얻어진 전체 두께 조직의 H & E 염색으로 서의 만족 스러운 결과를 달성할 수 없다. 추가적으로, 직장 흡입 조직의 아 세 틸 콜린 (AChE) 염색은 91%의 부적절 한 민감도와 동결 된 섹션³의 복잡 한 처리로 인해 이론적으로 어렵습니다. 포 르 말린 고정 및 파라핀이 포함 된 표본에서 염색 될 수 있는 신경 절 세포 들의 몇몇 그밖 면역 조직 화학 마커는 점차적으로 주류 HD 진단이 되 고....

프로토콜

이 의정서는 과학 기술의 화홍 대학 연합 병원의 연구 윤리 위원회에 의해 승인 되었다.

1. 직장 흡입 생 검

1. 잘 훈련 된 소아 외과 의사 및 보호자 로부터 정보에 근거한 동의를 얻은 후 Rbi2 흡입 직장 생 검 시스템을 사용 하 여 직장 흡입 생 검을 수행 하십시오.
   1. 다음과 같은 징후가 있는 환자에서 rsb를 수행 하십시오. 유아에 있는 검거나을 통과 하는 무 능력 또는 아이 들에 있는 변 비 없이 장기 팽만 감; 배변을 완료 하기 위해 파라핀 오일이 필요한 장기 변 비를 가진 아이 들; 장 폐색을 겪고 있는 아이 들에 있는 불명 한 이유를 가진 장의 방해 또는 장 천공.
      참고: RSB에 대 한 금기 사항은 다음과 같습니다. 심한 증상이 있거나, 신체적 상태가 좋지 않거나, RSB에 내성을 갖지 못하는 어린이; 급성 단계 장 염을 가진 아이 들; 완전 한 치유 없이 장 문 합을 겪고 있는 어린이.
2. 창 자 준비 36 h로 정상적인 생리 식 염 수 유지 관장을 수행 하 고 점 막의 대변을 느슨하게 하 고 과도 한 부 종을 피하는 절차 전에. 어린이가 심한 변 비를 하는 경우 황산 마그네슘 용액을 첨가 하십시오. 신생아에 게 비타민 K (1mg/kg)를 투여 하십시오....

결과

총, 318 환자는 우리의 연구에 등록 했다. 모든 환자 들은 RSB를 시행 하 고, 조직은 칼 레 티 인, S100 및 PGP 9.5에 대해 염색 되었다. 우리의 새로운 프로토콜을 기반으로 하는 진단은 97 케이스, 213의 경우 hd가 아닌 경우 8 건에서 hd로 의심 되는 hd 였습니다. 132 수술 환자 중, 99 환자는 수술 후 전체 두께 표본의 면역 염색에 의해 헌팅턴 병으로 진단 되었다. S100 및 PGP 9.5 염색은 99 환자의 92% 및 93%가 각각 신경 트렁크를 비 대 했다는 것을 보여주었다. 다른 83의 186 환자는 전체 두께의 생 검을 시행 하 고 신경 절 세포를 보여주었습니다. 총 103 명의 환자가 보수적 치료에 의해 임상적으로 치료 되었고, HD는 배제 되었다. HD가 의심 되는 8 명의 환자 중 3 명의 환자가 짧은 세그먼트 HD로 분류 되 고 다른 5 명의 환자는 비 HD로 분류 되었습니다.

토론

여기서 우리는 HD의 진단을 위해 RBS 부분을 염색 하기 위해 세 가지 다른 면역 조직 화학 항 체를 사용 하는 절차를 설명 했습니다. 우리의 진단 프로토콜의 민감도는 96.49% (95% ci, 0.88)이 고 특이성은 100 95% 0.97 이었다.

프로토콜의 가장 중요 한 단계는 RSB 및 항 원 항 체 반응입니다. 생 검의 크기는 염색의 정확도를 결정 합니다. 작은 생 검 정확한 진단을 만들기 위해 충분 한 조직을 제공 하지 않습니다., 큰 생 검 출혈의 높은 위험에 이르게 하는 동안. 경험의 문제로, 직경이 2mm의 생 검은 최적의 크기입니다. 항 원 항 체 반응의 경우 항 체의 적절 한 보존은 무시할 수 없습니다. 단계에 의해 프로토콜 단계를 따라 부드럽게 작업이 필요 합니다. 역삼 투-정제 수는 관찰을 위한 명확한 필드를 산출 하 고 병리학 자가 정확한 진단을 만드는 것을 더 쉽게 만드는 모든 단계에서 추천 됩니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
calretinin 항체	MXB Biotechnologies	MAB-0716 170416405c	항체: 1차 항체
S-100 항체	MXB Biotechnologies	Kit-0007	항체: 1차 항체
PGP9.5 항체	Shanghai long island antibody Co. Ltd	R-0457-03	항체: 1차 항체
인핸서 시약	MXB Biotechnologies	KIT-9902-A 170416405a	항체: 2차 항체 A
염소 항토끼/마우스 IgG 2차 항체	MXB Biotechnologies	KIT-9902-B	항체: 2차 항체 B
DAB 염색 키트(시약 A, B 및 C 포함)	MXB Biotechnologies	DAB-0031	염색 키트
열 인큐베이터	Shanghai yiheng instrument Co. Ltd	DHP-9082	기기
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