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방법 논문

유도 및 실험적인 근 Murine 모델의 평가

10.1K 조회수

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DOI:

10.3791/58822

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2019년 1월 22일

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이 논문에서

요약

이 프로토콜에서 우리 실험 근 유도 사용 하 여 마우스에 새롭게 설계 된 안경, 눈 매개 변수 측정에 안정적이 고 재현 가능한 결과 달성 하기 위한 필요한 기술의 전체 과정을 설명 합니다.

초록

근 시의 murine 모델 비교적 쉬운 유전자 조작으로 인해 근 연구를 위한 강력한 도구를 수 있습니다. 동물에서 근 시를 유발 하는 한 가지 방법은 주 (유도 하는 렌즈 근 시 임) 눈 앞에서 렌즈 뺀 분명 넣어 하는 것입니다. 그러나, 유도 및 평가 대 한 현존 프로토콜 연구실 실험실에서 다릅니다. 여기, 우리가 새로 설계 하는 마우스를 사용 하 여에 임 안경 유도를 매우 실용적이 고 재현 가능한 방법을 설명 합니다. 방법 수정 하면서 마우스 눈 앞 안정적으로 렌즈 수 있습니다 국 소 또는 청소를 위해 이륙 하는 렌즈 관리 마약. 표현 형 강력 하 고 효율적 이며 분산 작습니다. 여기 설명 하는 방법은 마우스는 실험에 대 한 가능한 기간 연장 이유 후 바로 적용할 수 있습니다. 우리는 또한 준 기술 굴절 및 축 길이 측정에서 재현 가능한 결과 달성 하기 위한 조언. 우리 여기에서 설명 하는 단계별 프로토콜 희망과 상세한 기사 myopia 근 시 실험을 더 원활 하 게 수행 하 고 데이터 비교 연구소에서 연구원을 도울 수 있다.

서론

근 시의 보급 최근에 극적으로 증가 했다, 그것의 발병 및 진행의 메커니즘은 여전히 크게 unknow1. 근 시의 가장 특징적인 표현 형의 축 길이 (알), 망막 합병증 이나 심지어 실명2에 대 한 위험 증가 신장 이다. 근 시의 병 인을 이해 하 고 효과적인 치료법을 개발에 강력한 근 시 동물 모델 및 안정적인 표현 형 평가 필요 하다.

짧게, 두 가지 방법을 유도 하는 동물에서 근 시 상태에 대 한 존재: 모양 박탈 근 시 (FDM)와 렌즈 유도 근 (임)3. 전 눈 앞 디퓨저를 장소 또는 근 표현 형에 따른 안구의 정상적인 발전을 좌우 하는 이미지를 보이지 않게 하기 위해 눈 꺼 풀 sutures. 렌즈는 망막 뒤에 초점을 이동 하는 눈 앞에 마이너스 후자의 장소. 망막 초점의 변화를 감지 하 고 망막 및 초점을 다시 맞추고 하 안구 elongates. FDM, 눈 꺼 풀 닫히거나 디퓨저, 눈 앞에서 수정 되었습니다 후 거의 추가 정비 필요 합니다. 임, 렌즈 투명 유지 하기 위해 청소를 위해 이륙 해야 합니다. 따라서, FDM 기술적으로 유도를 상대적으로 쉽습니다. 그러나, FDM과 임의 메커니즘은 서로 다른....

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프로토콜

모든 절차는 게이오 대학의 학부의 동물 연구 윤리 위원회에 의해 승인 되었다 ARVO 문을 안과 및 비전 연구, 동물 실험에서 게이오에 기관 지침에 동물의 사용에 대 한 준수 대학, 그리고 동물 연구: 연구에 있는 동물의 사용에 대 한 보고의 Vivo 실험 (도착) 지침.

1. 쥐에 대 한 안경 조립

  1. 안경 (그림 1a) 조립에 필요한 부품을 준비 합니다. 각 마우스에 대 한 모든 다음 준비: 머리 거치 한 나일론 스틱, 하나 더 높은 및 1 낮은 티타늄 프레임, 실험, 10 m m의 길이와 M1.4 크기 나사 하나, M1.4 크기 나사 한 너트, 하나의 일반의 목적에 따라 적절 한 능력을 가진 두 개의 렌즈 0.3 m m의 두께와 M1.4 크기 나사 세탁기 그리고 2 개의 인공 손톱 팁 (테이블의 자료).
    참고: 프레임의 두 가지 서로 다른 높이와 존재. 1 마우스에 대 한 높은 프레임 및 낮은 프레임 집합으로 사용 됩니다. 높은 프레임 비전 필드 대칭 수 있도록 낮은 사람 위에 넣어 되어야 합니다. 프레임과 렌즈는 특별히 설계 및 저자의 연구 그룹에 의해 제조. 이러한이 문서의 해당 저자에 연락 하 여 사용할 수 있습니다. 다른 부분 ....

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결과

에 먼저, 모든 필요한 부품 (그림 1a) 준비 하는 경우 확인 합니다. 조립된 안경의 작품의 예는 그림 1b에서 표시 됩니다. 프레임과 너트의 본체를 제외한 모든 다른 부품은 각 마우스에 대 한 일회용입니다. 완성 된 안경의 집합 그림 1 c에 표시 됩니다. 다른 연령대와 마우스에 맞게 두 프레임 사이의 각도 변경 합니다.

굴절 측정의 예는 그림 2a에 표시 됩니다. 이것은 3 주 p21에서 시작-30 D 렌즈에 의해 유도 된 마우스 눈 이다. Note 마우스는 바로 카메라9앞을 보고 하는 것을 의미 하 고 .......

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토론

있는지 확인 하려면 마우스 머리에 안정적으로 고정 될 안경,이 프로토콜의 여러 단계 큰 관심을 지불 될 필요가 있다. 과 치과 접착제 시스템을 사용 하기 전에 완전히 제거 되어야 합니다. 두개골에 피는 또한 주의 정리 될 필요가 있다. 약간 미세 하 게 조정 하는 것은 직후에 접착제의 응용 프로그램 허용, 접착 시스템을 건조 하기 전에 자주 메모리를 이동 하지 마십시오. 신중 하 게, 접착 시스템의 지시에 따라 특히 최종 혼합물의 각 성분의 비율. 때 마우스를 잡고 안경 또는 수술 후 후속 측정의 유지 보수 동안 할 파악 하지 마우스의 시체와 함께 스틱 함께. 두개골 지팡이 사이 상대 운동 막대기의 아래로 떨어지는의 가장 빈번한 원인입니다. 적절 한 수술 및 장악 기술, 개인 막대기를 드롭다운 수 20 개인을 포함 하 여 3 주 실험에서 1 미만 것입니다.

머리카락과 음식 찌 꺼 기는 눈과 렌즈 사이의 간격으로 풀 수 있습니다. 이것은 렌즈의 투명도 영향을 미칠 뿐만 아니라 또한.......

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공개 사항

마우스 안경의 디자인 특허 (no. 201741349 응용 프로그램)에 대 한 적용 되었습니다.

감사의 글

우리는 SDOCT, 굴절 및 각 막 곡률, 3 차원 프레임 데이터, M. 미 야우 치; 재현 씨 Sanshouo의 측정에 대 한 조언 F. Schaeffel에 대 한 조언을 몬태나 Pardue 감사 합니다. K. Tsubota; Y. 다나카; S. 콘도; C. 마사다; M. 부; Y. 미; Y. 하기와 라; A. 이시다; Y. 토 미타; Y. Katada; E. Yotsukura; K. 다카하시; 그리고 중요 한 면담을 위해 Y. 왕입니다. 이 작품은 과학적 연구에 대 한 (KAKENHI, 숫자 15 K 10881) 교육, 문화, 스포츠, 과학 및 기술 (문 부 과학성)에서 TK. 보조금 inAid에 의해 지원 되었다 이 작품에서 Tsubota 실험실, Inc. (일본 도쿄) 근 시 연구에 대 한 권한을 부여 하 여 지원 됩니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
나사NBKSNZS-M1.4-10
와셔MonotaRO42166397
너트MonotaRO42214243
스틱DMM Makenone은 인증자가 설계하고 DMM에서 임대한 3D 프린터로 출력합니다.
프레임DMM Make인증자가 설계하지 않고 DMM Make에서 임대한 3D 프린터로 출력합니다.
렌즈레인보우 콘택트 렌즈없음회사에서 마우스 사용을 위해 사용자 정의
cyanoacrylate 접착제OK MODELMP 20g
치과 접착제 수지 시멘트SUN MEDICAL슈퍼 본드에는 마우스 두개골 골막을 제거하는 데 사용되는 에칭 액체가 포함되어 있습니다
광 굴절기Steinbeis Transfer Center없음University of Tü의 Frank Schaeffel 박사가 설계하고 제공합니다. bingen
스펙트럼 도메인 OCTLeicaR4310
트로피카 아미드, 페닐 에프린 염산염 용액SantenMydrin-P
midazolamSandoz K.K.마취제SANDOZ
 Orion Corporation취제
butorphanol tartrateMeiji Seika PharmaVetorphale마취제 성분
0.1 % 정제 히알루 론산나트륨 SantenHyalein
atipamezole 염산염Zenoaqantisedan
. 적외선 메데토미딘을 위한 성분 마를 위한 Domitor 성분 

참고문헌

  1. Dolgin, E. The myopia boom. Nature. 519 (7543), 276-278 (2015).
  2. Ohno-Matsui, K. Pathologic Myopia. Asia-Pacific Journal of Ophthalmology (Philadelphia, Pa). 5 (6), 415-423 (2016).
  3. Morgan, I. G., Ashby, R. S., Nickla, D. L.

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재인쇄 및 허가

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