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방법 논문

나노 제형에도 Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) 분석 실험을 사용 하 여

14.9K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/58830

⸱

2019년 1월 30일

 , 
1Nanotechnology Characterization Lab., Cancer Research Technology Program, Frederick National Laboratory for Cancer Research sponsored by National Cancer Institute

이 논문에서

요약

조작된 nanomaterials에 독의 검출 nanomedicine 분야에서 대상 과제 중 하나를 나타냅니다. 여기, 우리는 나노 입자에서 잠재적인 내 오염 추정 세 가지 다른 랄 형식으로 구성 된 프레임 워크를 설명 하는 사례 연구를 제시.

초록

제약 제품에 존재 하는 경우 (종종 라고도 lipopolysaccharide) 그람 음성 세균의 세포 벽 구성 요소 내 염증, 발열, 저자 또는 고혈압, 발생할 수 있습니다. 그리고, 극단적인 경우에 수 있습니다. 조직 및 장기 손상으로 이어질 수 있습니다. 치명적 된다. 따라서, 제약 제품에도의 양은 엄격 하 게 통제 된다. 도 탐지 및 정량화에 대 한 사용할 수 있는 방법, 중 Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) 분석 결과 주로 세계적으로 사용 됩니다. 어떤 제약 제품 랄 분석 결과 방해할 수 있습니다, 하는 동안 나노-공식 그들의 복잡으로 인해 특정 도전을 나타냅니다. 이 문서의 목적은 연구 설계 나노 소재 및 나노 공식화 약물 독 추정에 미숙한 실용적인 가이드를 제공 하. 여기, 탁도, 발을 포함 한 세 랄 포맷 응고 젤 분석 실험을 수행 하기 위한 실질적인 권장 사항은 설명 합니다. 이 분석 실험 나노기술 기반 약물 제품, 백신, 그리고 adjuvants 내 오염 확인을 사용할 수 있습니다.

서론

내 그람 음성 세균 세포 벽1,2의 빌딩 블록 이다. 그것은 매우에 면역 세포를 활성화할 수 있습니다 (picogram) 농도1,2낮은. 셀 한도에 대 한 응답에 의해 생성 된 proinflammatory 중재자 (cytokines, leukotrienes, eicosanoids, 등) 발열, 저 혈압, 고혈압, 그리고 여러 기관 실패를 포함 하 여 더 심각한 건강 문제에 대 한 책임은 1 , 2 , 3. 면역 중재 측면-효과도 의해 실행의 심각도 내 구성과 구조에 의해 결정 고도 국제 단위 (IUs 또는 EUs)3에서 측정 된 힘에 따라 달라 집니다. 이러한 단위 몸 무게의 킬로그램 당 수는 내 화성 복용량을 임계값을 설정 하는 데 사용 됩니다. 이 복용량은 EU/5kg 약 제품에 대 한 관리 를 통해 intrathecal 경로 하지만 모든 노선. 몸 표면, 안구 내부 체액, 방사성 의약품, 및 intrathecal 경로 관리 를 통해 제품의 평방 미터 당 약을 복용 하는 약 있다 다른 임계값 화성 복용량은 100 EU/m2, 0.2 EU/mL, 175 EU/V (V가는 볼륨 관리를 위한 제품의), 그리고 0.2 EU/kg, 각각4. 다양 한 약품 및 장치에 대 한 임계값 화성 복용량에 대 한 자세한 내용은 제공 되 고 다른4,,56논의.

동물도 중재 반응에 그들의 감도에서 넓게 변화 한다. 인간, 비 인간 영장류, 그리고 토끼 독3가장 매우 민감한 종족 중입니다. 환자에도 중재 부작용을 피하기 위해 고의 전 임상 독성 및 효능 연구의 부정확 한 결론을 방지, 정확 하 게 감지 하 고 두 임상 및 전 임상 등급 정립에서 독을 계량 필수적 이다. 현재 사용할 수 있는 여러 가지 방법을이 작업을 달성할 수 있다. 그들 중 하나는 일반적으로 화면 생물 의학 제품에 잠재적인 내 오염 뿐만 아니라 세균 감염7,,89감지로 세계 전반 사용 Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) 분석 결과 이다. 셀 말굽 게 Limulus polyphemus 의 혈액에 존재 하는 lysate amoebocytes에서 준비 북미7대륙의 동쪽 해 안에 거주. 흥미롭게도, 말굽 게의 몇 가지 다른 종이 있다 (Tachypleus gigas 및 Tachypleus tridentatus) 아시아10. Tachypleus Amoebocyte Lysate (탈)도 다른 cuntries10에 랄을 사용 하는 방법을 유사한의 검출에 대 한 여러 아시아 국가에서 사용 됩니다. (랄 및 탈) lysates 포함 단백질 활성화 시 부여 하는 프로 테아 제 활동의 그룹. 이러한 단백질, 소위 요소 C 중 하나 내와 접촉 시 활성화 됩니다. 활성화 인자 C 앞 요소 B는 또한 차례 차례로 되는 효소 응고 효소를 생산 하는 프로 응고 효소를 앞. 반응의이 체인의 결과 젤, 샘플 탁도 하 고, 비 기질, 젤 응고, 탁도, 그리고 비 분석 실험을 위한 기초 역할을, 착 색된 제품의 외관의 존재 증가의 형성 각각. 산업 문서, 다른 랄 포맷 간의 테스트 결과에 주문서, 결정은 한다 젤 응고 분석 결과5 기반은 필수 랄 형식이, 미국 식품 및 의약품 안전 청 (FDA)에 대 한 지침에 설명 합니다. .

일반적으로 사용 되는 많은 실험실 화학 물질 (예., EDTA) 및 제품 (예: 페니실린) 방해 랄 알려진된 마약 분석 실험11. 방해는 일반적으로 테스트 자료를 포함 하는 솔루션으로 알려진된 농도에 아군도 표준의 복구를 평가 하 여 식별 됩니다. 스파이크 복구 50% 미만 또는 200% 이상에 대 한 분석 결과 LAL의 결과 다음 경우 주어진된 시험 체 억제 또는 향상, 각각4유효 하지 않습니다. 나노기술 기반 정립은 종종 복잡 하 고 메커니즘12,,1314의 다양 한 통해 랄을 방해. 많은 접근 방해를 극복 하기 위해 설명 되었습니다: 난방, 난방 및 과잉을 가진 샘플을 보완 하 여 지질 기반 투명 재료의 파괴에 의해 단백질 비활성화 특정 버퍼에 계면 활성 제, 샘플 재구성 divalent 양이온5,12,13,,1415. LAL 방해를 극복할 수 없을 때 상황에 대 한 대체 방법을 또한 설명 되었습니다: ELISA, HEK TLR4 기자 셀 라인 분석 결과, 및 질량 분석16,,1718, 19.

여기, 젤 응고, 탁도, 및 비 랄 분석 실험 수행에 대 한 실험 절차에 설명 되어 있습니다. 이 분석 실험 프로토콜 STE1.2 (탁도 랄), STE1.3 (젤 응고 랄)에 나노기술 특성화 연구소 (NCL) 웹사이트20 에서 사용할 수 있습니다 및 STE1.4 (비 랄). 같은 나노 제제의 특성을 두 개 이상 다른 포맷을 수행 하는 것이 좋습니다. 탁도 및 비 랄의 결과 동의 하지 않을 때 젤 응고 결과5를간주 됩니다. 두 랄 형식의 결과 동의 하는 경우21랄 확인 monocyte 활성화 테스트 (매트) 또는 토끼 pyrogen 테스트 (RPT)을 사용 하 여 연구 결과 추가 실시. 각 방법도 검색에 사용 되 고 pyrogenicity 평가 장점과 한계21,,2223,24에 중요 하다. 주어진된 나노기술 정립 하는 데 사용 하는 프로시저의 한계를 인식 그 나노 제제에 대 한 최적의 절차의 사용에 대 한 과학적 정당성을 얻기 위해 필수적 이다.

이 연구에서는 PEGylated 자주 독 소 루비 모델 나노 배합으로 사용 되었다. 이 1995 년에 미국 FDA에 의해 승인 하 고 암 환자 전세계25치료를 위해 사용.

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프로토콜

1입니다. 나노 샘플의 준비

  1. 준비 랄에 연구 샘플 학년 물.
  2. 샘플 pH 범위를 6-8 인 경우에, pyrogen 무료 수산화 나트륨 또는 염 산을 사용 하 여 pH를 조정 합니다.
  3. 랄을 사용 하 여 학년 물 연구 샘플의 여러 희석을 준비 합니다. 높은 희석은 최대 유효 희석 (MVD)를 초과 하지 않는 다는 것을 확인 하십시오. MVD 추정에 대 한 자세한 토론 섹션을 참조 하십시오.

2. 랄 형식 사이 시 약 일반의 준비

  1. LAL 시 약 물 pyrogen 무료를 사용 하 여 0.1 n.의 농도에서 작업 솔루션을 준비 하는 집중된 수산화 나트륨 재고 희석
  2. LAL 시 약 물 pyrogen 무료를 사용 하 여 집중된 염 산 주식을 희석 하 고 0.1 n.의 최종 농도에 작업 솔루션을 준비
  3. 제어 표준도 (CSE)의 준비
    1. 제조업체에서 제공 하는 분석의 인증서에 따라 CSE reconstitute
      참고: 인증서에 제공 하는 정보에 관한 중요 사항에 대 한 토론 섹션을 참조 하십시오. 카탈로그 번호 및 다른 랄 형태로 특정된 CSE 공식의 응용 프로그램에 대 한 세부 사항에 대 한 테이블의 자료 를 참조 하십시오.
  4. LAL 시 약의 준비
    1. LAL 시 약 제조업체에서 제공 하는 분석의 인증서에 따라 reconstitute
      참고: LAL 시 약 준비에 관한 중요 한 세부 사항에 대 한 토론 섹션을 참조 하십시오. 카탈로그 번호 및 다른 랄 형태로 주어진된 LAL 시 약 배합의 응용 프로그램에 대 한 세부 사항에 대 한 테이블의 자료 를 참조 하십시오.

3. 탁 랄 분석 결과

  1. 교정 표준의 준비
    1. Using 랄 학년 물 900 µ L, CSE의 100 µ L, 많은 중간 희석 교정 0.001에서 1 EU/mL의 농도 범위와 표준의 준비를 활성화 하는 데 필요한 준비.
    2. 첫 번째 튜브 라벨 고 각 관으로 랄 급 물 900 μ를 추가 합니다. 1EU/mL의 농도 함께 교정 표준 준비 10 EU/mL solutionn의 100 μ를 추가 합니다.
    3. 3 더 낮은 교정 표준 준비 위에서 설명한 대로 직렬 10 희석을 반복 합니다. 1 EU/mL 0.001에서 배열 하는 4 개의 교정 표준 준비 된 확인 합니다.
  2. 품질 컨트롤의 준비
    1. 1 EU/mL CSE 솔루션의 50 µ L 랄 급 물 950 µ L 결합 하 여 0.05 EU/mL 품질 관리를 준비 합니다.
      참고: 컨트롤 준비에 관한 자세한 토론 섹션을 참조 하십시오.
  3. 금지/향상 (IEC) 컨트롤의 준비
    1. 1 EU/mL CSE 솔루션의 25 µ L의 주어진된 희석에 테스트 접한 475 µ L를 결합 하 여 0.05 EU/mL의 농도와 IEC를 준비 합니다.
      참고: 추가 정보에 대 한 토론 섹션을 참조 하십시오.
  4. 실험 절차
    1. 약 30 분 사전에 설정 하 여 워밍업 악기를 허용 합니다. 설정 검출 파장 660 nm이 탁도 랄에 대 한 적절 한입니다.
    2. 사용자 이름 및 암호를 입력 하 여 로그인.
    3. 컴퓨터 화면에 해당 아이콘을 클릭 하 여 소프트웨어 (테이블의 재료)를 엽니다.
    4. 소프트웨어 홈 화면에 데이터 수집 을 선택 합니다. 일반 탭에서 해당 공간으로 홈 화면에 테스트 ID와 데이터 그룹 정보를 입력 합니다.
    5. 하드웨어 탭을 클릭 하 여 드롭다운 메뉴에서 악기 종류를 선택 합니다.
    6. 설정 검출 파장 660 nm이 적합 chosing에 의해 탁 랄 랄 탁도 방법.
    7. 일련 번호, 시스템 ID 및 직렬 포트 정보는 화면에 표시를 확인 합니다. 확인을 클릭 합니다. 확인 한번 더 확인을 클릭 합니다.
    8. 샘플 테스트는 동일한 순서에 샘플 ID를 입력 합니다. 기본 단추를 사용 하 여 부정적인 제어, 표준 곡선 및 테스트 샘플 입력.
    9. 각 샘플에 대 한 중복 튜브를 준비 하 고 미리 레이블이 유리 튜브로 200 µ L (테스트 비율 4:1) 또는 부정적인 제어 (물), 교정 표준, 품질 관리, IEC 및 테스트 나노 100 µ L (테스트 비율 1:1)를 추가 합니다.
    10. 첫 번째 테스트 유리병, 그것을 짧게, 그리고 테스트에 삽입 슬롯 악기 회전 목마에 소용돌이를 50 µ L (테스트 비율 4:1) 또는 LAL 시 약의 100 µ L (테스트 비율 1:1)를 추가 합니다. 1:1 비율을 사용 하는 경우 LAL 시 약의 볼륨은 100 µ L입니다.
    11. 다른 샘플에 대 한 위에서 설명한 절차를 반복 합니다. 프로세스는 한 번에 하나씩 샘플링합니다.
      참고: 자세한 내용은 토론 섹션을 참조 하십시오.

4. 비 랄

  1. 교정 표준의 준비
    1. Using 랄 학년 물 900 µ L, CSE의 100 µ L, 많은 중간 희석 1 EU/mL의 농도와 교정 표준의 준비를 활성화 하는 데 필요한 준비.
    2. Using 900 µ L 랄 급 물과 표준 1 EU/mL 교정의 100 µ L, 0.1 EU/mL의 농도에서 두 번째 교정 표준 준비.
    3. 두 더 낮은 교정 표준 준비 위에서 설명한 대로 직렬 10 희석을 반복 합니다. 1 EU/mL 0.001에서 배열 하는 4 개의 교정 표준 준비 된 확인 합니다.
  2. 품질 컨트롤의 준비입니다.
    1. 1 EU/mL CSE 솔루션의 50 µ L 랄 급 물 950 µ L 결합 하 여 0.05 EU/mL 품질 관리를 준비 합니다.
      참고: 컨트롤 준비에 관한 자세한 토론 섹션을 참조 하십시오.
  3. 금지/향상 (IEC) 컨트롤의 준비
    1. 1 EU/mL CSE 솔루션의 25 μ 테스트 접한의 475 μ와 결합 하 여 0.05 EU/mL를 준비 합니다.
      참고: 추가 정보에 대 한 토론 섹션을 참조 하십시오.
  4. 실험 절차
    1. 약 30 분 사전에 설정 하 여 워밍업 악기를 허용 합니다. 설정 검출 파장 405 nm이 탁도 랄에 대 한 적절 한입니다.
    2. 컴퓨터 화면에 해당 아이콘을 클릭 하 여 소프트웨어를 엽니다. 사용자 이름 및 암호를 입력 하 여 로그인.
    3. 소프트웨어 홈 화면에 데이터 수집 을 선택 합니다. 일반 탭에서 해당 공간으로 홈 화면에 테스트 ID와 데이터 그룹 정보를 입력 합니다.
    4. 하드웨어 탭을 클릭 하 여 드롭다운 메뉴에서 악기 종류를 선택 합니다. 악기를 선택 하십시오.
    5. 일련 번호, 시스템 ID 및 직렬 포트 정보는 화면에 표시를 확인 합니다. 확인을 클릭 합니다. 확인 한번 더 확인을 클릭 합니다.
    6. 샘플 테스트는 동일한 순서에 샘플 ID를 입력 합니다. 기본 단추 부정적인 제어 입력을 사용 하 여 표준 곡선 및 테스트 샘플.
    7. 각 샘플에 대 한 중복 튜브를 준비 하 고 미리 레이블이 유리 튜브로 200 µ L (테스트 비율 4:1) 또는 부정적인 제어 (물), 교정 표준, 품질 관리, IEC 및 테스트 나노 100 µ L (테스트 비율 1:1)를 추가 합니다.
    8. 첫 번째 테스트 유리병, 그것을 짧게, 그리고 테스트에 삽입 슬롯 악기 회전 목마에 소용돌이를 50 µ L (테스트 비율 4:1) 또는 LAL 시 약의 100 µ L (테스트 비율 1:1)를 추가 합니다. 1:1 비율을 사용 하는 경우 LAL 시 약의 볼륨은 100 µ L입니다.
    9. 다른 샘플에 대 한 위에서 설명한 절차를 반복 합니다. 프로세스는 한 번에 하나씩 샘플링합니다.

5. 젤-응고 랄

참고:이 분석 결과 시각적 관찰 및 반응 관에 응고의 검출에 따라 샘플에서 독의 존재를 식별 합니다. 아래 실험 단계를 설명 합니다. 벤치 시트를 사용 하 여 결과 기록. 이 벤치 시트는 필수, 그리고 시험 결과 기록 하는 다른 방법을 받아들일 수 있습니다. 같은 벤치 시트의 예로 독자의 편의 위해 보충 자료 제공 됩니다. 람다 (l) 젤 응고 시험의 감도 이며 0.03 EU/mL입니다.

  1. 분석 된 테스트 샘플의 수를 수용 하는 데 필요한 많은 반응 튜브 라벨. 1 단계, 2 단계 분석 결과의 3 단계에서 사용 하는 복제의 수에 대 한 자세한 내용은 벤치 시트를 참조 하십시오.
  2. 튜브 당 물, 컨트롤 또는 테스트 샘플의 aliquot 100 μ.
  3. 최종 농도 4λ는 CSE를 준비 합니다.
  4. 2λ의 CSE의 최종 농도 달성 하기 위해 물 또는 테스트 샘플의 100 μ와 위에서 언급 한 기준의 100 μ를 결합 한다. 람다와 반 람다 및 1/4 람다 3 번 이상 반복 합니다.
  5. 물 목욕에서 온도 37 ° c.
  6. 추가 테스트 튜브, 소용돌이 짧게 당 lysate의 100 μ 고 모든 튜브 랙 1 h 물 목욕 합니다.
  7. 부드러운 모션으로 튜브를 반전.
  8. "+" (상사 병)를 사용 하 여 수동으로 레코드 결과 또는 "-" (응고 또는 느슨한 응고) 벤치 시트에.
  9. USP 내기 854에 따라 분석 하십시오; 벤치 시트를 사용 하 여 자료를 지원

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결과

LAL 분석 실험에서이 테스트 한 후 생성 된 데이터의 예는 표 1에 표시 됩니다. PEGylated 자주 독 소 루비 5 희석에서 비 랄와 방해. 그러나,이 간섭 큰 희석에 의해 극복 됐다. 50과 200% 사이 스파이크 복구 때이 희석 탁 랄에에서 5에서 뿐만 아니라 희석 50 및 탁도 및 비 랄, 500에서 테스트 되었습니다. 희석 비율 조정, 결과 두 분석 실험에 희석 사이 일관 했다. 또한, 결과 세 가지 분석 결과 형식 사이 일관 했다.

테스트 샘플탁도 랄, EU/mg (스파이크 복구, %)비 랄, EU/mg (스파...

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토론

이 프로토콜에서 제공 하는 정보15,26 전에 설명 하고있다 고는 미국 식품 의약품 안전 청은 미국 식약청 (FDA) 및 미국 약전 (USP)4 에 의해 게시 된 여러 규제 문서 , 5 , 6 , 27, 그리고 또한 NCL 웹사이트20 프로토콜 STE1.2 (탁도 랄), STE1.3 (젤 응고 랄)에 사용할 수 및 STE1.4 (비 랄).

테스트-나노 LAL 시 약 물 또는 살 균, pyrogen 무료 PBS에서 준비 된다. 연구 샘플의 산도 낮은 (< 6)와 높은 (> 8) pH는 lysate의 최적의 성...

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

연구는 국립 암 연구소에서 연방 기금에 의해 지원 되었다 건강의 국가 학회, HHSN261200800001E 계약. 이 발행물의 콘텐츠 뷰 또는 정책의는 부의 보건 및 인적 서비스, 반드시 반영 하지 않습니다도 무역 이름, 상용 제품의 언급지 않습니다 또는 조직 미국 정부에 의해 승인을 의미 합니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
탁도 LAL Assay
Sodium HydroxideSigma S2770필요한 경우 샘플 pH를 6-8
Hydrochloric acidSigmaH9892경우 샘플 pH를 6-8 LAL 사이로 조정하는 데 사용됩니다
Cape CodT0051약Associates 이 시약은 탁도와 함께 사용할 수 있습니다. 분석 전용
Control Endotoxin StandardAssociates of Cape CodE0005이 시약은 탁도 및 겔 응고 분석과 함께 사용할 수 있습니다
LAL grade waterAssociates of Cape CodWP0501이 시약은 모든 LAL 형식과 함께 사용할 수 있습니다
Glucashield BufferAssociates of Cape CodGB051-25베타 글루칸의 위양성 반응을 방지하는 데 사용됩니다.
일회용 내독소가 없는 유리 희석 튜브 12 x 75mmAssociates of Cape CodTB240이 튜브는 세 가지 분석 모두와 함께 사용할 수 있습니다
내독소가 없는 유리 반응 튜브 8 x 75mmAssociates of Cape CodTK100이 튜브는 탁도 및 발색 분석과 함께 사용할 수 있습니다
0.25 및 1.0mL의 Pyrogen-free 팁RAININPPT25, PPT10팁과 피펫은 내독소를 흡착하고 LAL 분석을 방해하는 침출물을 방출할 수 있습니다. 이 RAININ 팁은 LAL 분석에서 최적의 성능을 발휘하는 것이 검증 및 확인되었기 때문에 사용됩니다
. Pyrogen-free microcentrifuge tube, 2.0 mLEppendorf22600044기타 동등한 소모품을 사용할 수 있습니다
Pyrogen-fee combitips, 5mLEppendorf30089669기타 동등한 소모품을 사용할 수 있습니다
반복 피펫터Eppendorf4982000020다른 동등한 소모품을 사용할 수 있습니다.
Microcetrifuge모든 브랜드모든 브랜드 사용 가능
냉장고, 2-8 C모든 브랜드모든 브랜드
Vortex모든 브랜드냉
동고, -20 C모든 브랜드모든 브랜드
Pyros Kinetix 또는 Pyros Kinetix Flex 리더Associates of Cape CodPKF96다른 악기를 사용할 수 있습니다. 그러나 이 분석에 사용된 LAL 시약 및 내독소 표준물질은 최적화가 필요할 수 있습니다. 다른 기기를 사용하는 경우 지침에 대해 기기 및 LAL 키트 제조업체에 문의하십시오
Chromogenic LAL Assay
Pyrochrome LAL ReagentAssociates of Cape CodCG1500-5이 시약은
Cape CodEC010Control Endotoxin Standard이 표준은 탁도 및 겔 응고 LAL에 사용되는 표준과 다릅니다. 발색 분석에서 최적의 성능을 발휘하도록 최적화되어
수산화나트륨시그마S2770필요한 경우 샘플 pH를 6-8
염산SigmaH9892경우 샘플 pH를 6-8
LAL 등급의 물로Cape CodWP0501이 시약은 모든 LAL 형식의
Glucashield Buffer와 함께 사용할 수 있습니다.Associates of Cape CodGB051-25베타글루칸의 위양성 반응을 방지하는 데 사용
일회용 내독소가 없는 유리 희석 튜브 12 x 75mmCape CodTB240이 튜브는 세 가지 분석 모두와 함께 사용할 수 있습니다
내독소가 없는 유리 반응 튜브 8 x 75mmCape CodTK100이 튜브는 탁도 및 발색 분석과 함께 사용할 수 있습니다
.0.25 및 1.0 ml 용량의 발열원이 없는 팁, RAININPPT25, PPT10팁 및 피펫은 내독소를 흡착하고 LAL 분석을 방해하는 침출물을 방출할 수 있습니다. 이 RAININ 팁은 LAL 분석에서 최적의 성능을 발휘하는 것이 검증 및 확인되었기 때문에 사용됩니다
. Pyrogen-free microcentrifuge tube, 2.0 mLEppendorf22600044기타 동등한 소모품을 사용할 수 있습니다
Pyrogen-fee combitips, 5mLEppendorf30089669기타 동등한 소모품을 사용할 수 있습니다
반복 피펫터Eppendorf4982000020다른 동등한 소모품을 사용할 수 있습니다.
Microcetrifuge모든 브랜드모든 브랜드 사용 가능
냉장고, 2-8 C모든 브랜드모든 브랜드
Vortex모든 브랜드냉
동고, -20 C모든 브랜드모든 브랜드
Pyros Kinetix 또는 Pyros Kinetix Flex 리더Associates of Cape CodPKF96다른 악기를 사용할 수 있습니다. 그러나 이 분석에 사용된 LAL 시약 및 내독소 표준물질은 최적화가 필요할 수 있습니다. 다른 기기를 사용하는 경우 지침에 대해 기기 및 LAL 키트 제조업체에 문의하십시오
Gel-Clot LAL Assay
LAL ReagentAssociates of Cape CodG5003이 시약은 겔-응고 분석에 특이적입니다.
Endotoxin StandardAssociates of Cape CodE0005이 시약은 탁도 및 겔-응고 분석과 함께 사용할 수 있습니다
수산화나트륨시그마S2770필요한 경우, 샘플 pH를 6-8
염산시그마H9892경우, 샘플 pH를 6-8
LAL 등급 물케이프 코드WP0501이 시약은 모든 LAL 형식
Glucashield BufferAssociates of Cape CodGB051-25와 함께 사용할 수 있습니다.베타글루칸의 거짓 양성 반응을 방지하기 위해 사용
일회용 내독소가 없는 유리 희석 튜브 12 x 75 mmCape CodTB240이 튜브는 세 가지 분석 모두와 함께 사용할 수 있습니다
일회용 내독소가 없는 유리 반응 튜브 10 x 75 mmCape CodTS050이 튜브는
0.25 및 1 mL 용량의 젤-응고 분석 Pyrogen-free 팁RAININPPT25, PPT10팁 및 피펫은 내독소를 흡착하고 LAL 분석을 방해하는 침출물을 방출할 수 있습니다. 이 RAININ 팁은 LAL 분석에서 최적의 성능을 발휘하는 것이 검증 및 확인되었기 때문에 사용됩니다
. Pyrogen-free microcentrifuge tube, 2.0 mLEppendorf22600044기타 동등한 소모품을 사용할 수 있습니다
Pyrogen-fee combitips, 5mLEppendorf30089669기타 동등한 소모품을 사용할 수 있습니다
반복 피펫터Eppendorf4982000020다른 동등한 소모품을 사용할 수 있습니다.
Microcetrifuge모든 브랜드모든 브랜드 사용 가능
냉장고, 2-8 C모든 브랜드 모든 브랜드사용
가능 Vortex모든 브랜드모든 브랜드
동고, -20 C모든 브랜드모든 브랜드
수조, 37 C모든 브랜드모든 브랜드를 사용할 수 있지만 물의 흐름이 응고 형성에 영향을 미치고 위음성 결과를 초래할 수 있으므로 물 순환을 끄거나 비순환 수조를 사용하는 것이 중요합니다
사이로 조정하는 데 사용됩니다. 필요한 . 의 시. . 일회용 . 부피 . . 사용 가능 사용 가능의 Chromogenic Assay Associates에 특이적입니다. 있습니다 사이로 조정하는 데 사용됩니다. 필요한 조정하는 데 사용됩니다. 의 동료 의 Associates . 일회용 의 Associates . . 사용 가능 사용 가능Control. 사이로 조정하는 데 사용됩니다. 필요한 사이로 조정하는 데 사용됩니다. 의 동료 의 Associates . 의 Associates 과 함께 사용하기 위한 것입니다. . . 냉 사용 가능

참고문헌

  1. Perkins, D. J., Patel, M. C., Blanco, J. C., Vogel, S. N. Epigenetic Mechanisms Governing Innate Inflammatory Responses. Journal of Interferon & Cytokine Research. 36 (7), 454-461 (2016).
  2. Vogel, S. N., Awomoyi, A. A., Rallabhandi, P., Medvedev, A. E. Mutations in TLR4 signaling that lead to increased susceptibility to infection in humans: an overview. Journal of Endotoxin Research. 11 (6), 333-339 (2005).
  3. Dobrovolskaia, M. A., Vogel, S. N. Toll receptors, CD14, and macrophage activation and deactivation by LPS. Microbes and Infection. 4 (9), 903-914 (2002).
  4. US Pharmacopeia. Bacterial Endotoxins Test. , (2011).
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