조직 재생에 대 한 젤라틴의 젖은 회전-기반 성형 과정

요약

우리가 개발 하 고 젤라틴 기반 생체 조직 공학의 응용 프로그램에 대 한 사용의 건설에 대 한 젖은 회전 개념에 따라 프로토콜을 설명.

초록

이 문서는 monofilament 섬유 또는 다른 적절 한 형태의 젤라틴, 천연 폴리머로 조작 하는 저렴 한 메서드를 제공 합니다. 회전 방법 젖은 통해 젤라틴 섬유는 적당 한 응고 매체에 부드럽게 밀어 남에 의해 생산 됩니다. 이 젤라틴 섬유 및 직물의 기능을 모방 하는 능력의 기능 표면 증가, 젤라틴이이 개념을 참조 하 여 튜브 형태로 성형 수 있습니다. 생체 외에서 그리고 vivo에서 테스트 검사, 젤라틴 튜브 조직 공학에서 응용 프로그램에 대 한 좋은 잠재력을 보여 줍니다. 행동으로 적당 한 충전 간격 재, 젤라틴 (예를 들어, 긴장 또는 심장 혈관 시스템에), 손상된 된 영역에 조직을 대체할 뿐 아니라 줄기 세포와 신경 회로의 직접 교체를 제공 하 여 재생을 촉진 하 튜브를 사용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 천연 폴리머에 따라 소재를 만들기 위한 자세한 절차를 제공 합니다 그리고 구현 크게 조직 재생 전략을 실현 하는 데 도움이 상호 천연 고분자의 개발 혜택을 받을 것으로 예상 된다.

서론

조직 재생의 최신 개발 조직 공학, 의료 치료에 새로운 치료 전략의 개선에 대 한 도전을 나타내는 응용 프로그램을 포함 한다. 예를 들어 신 경계 재생, 다음 부상 또는 질병의 제한 가능성 전세계 중요 한 건강 문제가 포즈지 않습니다. 신 경계와 관련 pathophysiological 프로세스의 복잡성 때문에 안정화 수술의 구현 또는 전통적인 autograft 사용 표시 되었습니다 기능 결과에 혜택을 제공 하지만 대 한 강력한 증거가 없다 척추 고정 수술^1,2의 효과. 손상된 된 영역에서 조직 손실 이며 hypertrophically 유도 이다³, 결국 밀도 glial 흉터^4,5형성으로 바뀝니다. 이 매트릭스는 블록 신경의 복구^6,7 을 작동 하 고, 따라서, 크게 방해 재생 방 벽으로 작동 합니다. 따라서, 적당 한 충전 간격 재 조직의 손실을 방지 하 고 신경 세포의 직접 교체를 제공 하 여 뿐만 아니라 손상된 된 영역 무결성을 유지 ....

프로토콜

지방 조직으로는 제도적 검토 보드의 세 배 서비스 종합 병원에 의해 인증 정형 외과 수술에서 가져온, 타이 페이, 대만, R.O.C. 절차 동물 주제와 관련 된 국가에서 동물 관리 위원회에 의해 승인 되었습니다. 국방 의료 센터, 대만 (R.O.C)입니다.

1. 젖은 프로세스 회전

1. 솔루션 준비
   1. 5% (w/v) 솔루션 농도를 이중 증 류 물 100 mL에 젤라틴 가루 5g을 분해.
   2. 어떤 거품 없이 완전히 균질 분산을 달성 하기 위해 하룻밤 60-70 ° C에서 천천히 혼합물을 저 어.
2. 젖은 회전
   1. 섬유 형성
      참고: 방법의 회로도 그림 1에 표시 됩니다. 회전 설정 연동 펌프 기계를 갖춘 하 높은-정밀 속도 제공 하 고 제어 흐름의 매끄러운 납품 ( 재료의 표참조).
      1. 명확한 비닐 튜브에 솔루션 인젝터로 26 G x 1/2 인치 (0.45 m m x 12 m m) 주사기를 연결 합니다.
      2. 10....

결과

이 연구에서 우리는 성공적으로 섬유 (그림 2A)에 젤라틴과 사용자 친화적인 젖은 회전 개념을 통해 튜브 (그림 2B, C)을 개발. 이 젤라틴 기반 물자는 그들의 모양에 따라 어떤 의료 도구로 활용할 수 있습니다. 우리 생체 외에서 그리고 vivo에서 테스트를 수행 하 여 젤라틴 튜브의 생체 적합성 시험 기능 표면과 같은 소재의 프레임은 조직 재생을 위해 더 적당 한 고려 하 고.

젤라틴 튜브에 대 한 개요를 얻으려면, 먼저, 우리가 실시 형태학 관찰 스캐닝 전자 현미경 검사 법 (그림 3)를 사용 하 여. 결과 젤라틴 튜브의 표면이 매우 부드.......

토론

우리는 간단한 젖은 조직 재생에 대 한 천연 고분자의 연구에 적용할 수 있는 기술 회전을 사용 하 여 젤라틴 기반 생체 재료의 개발을 제시. 이 작품 자체는 젤라틴의 속성을 최적화 하는 목적으로 다른 소스를 추가 하지 않고 훌륭한 단백질 소스로 젤라틴 제조의 가능성을 보여주었다. 젤라틴-기반 생체 재료의 개발 실 온 (22-26 ° C)에서 완전히 실행 되었다. 정확한 솔루션 농도 유지 하 고 모든 거품을 피하기 위해 솔루션을 매우 원활 하 게 교 반 부드러운 솔루션 준비는 프로토콜 내에서 중요 한 단계입니다. 솔루션에 거품의 모양, 주사기에 로드 하는 경우에 특히 응고 매체에 젤라틴의 형태로 적용 됩니다.

젤라틴-기반 바이오 폴리머 분자의 desolvation를 일으키는 원인이 되 고 고체 폴리머 단계¹¹에 젤라틴 솔루션을 침전 하는 적당 한 응고 매체에 젤라틴 솔루션의 위상 전환을 통해 얻은 했다. 습식 방법 회전의이 기본 개념을 채.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
<강>용액 준비:
젤라틴 B형(돼지)	Ferak	Art. -Nr. 10733	500g 바이알
<강한>습식 방사 공정:
연동 펌프	Gilson	모델 M312	Minipuls*3
플라스틱 튜브 커넥터	세계 정밀 기기	14011	1 박스
주사기	Sterican	5A06258541	26Gx1/2"(0.45 x 12mm)
Acetone	Ferak	Art. -Nr. 00010	2.5 L 바이알
Polycaprolactone CAPA 6500	Perstorp	24980-41-4-Dichloromethane
	Scharlau	CL03421000	1L 바이알
유리 파스퇴르 피펫	Fisher Scientific	13-678-20A-Hemostat
	Shinetec 기기	ST-B021	-
말초 정맥 카테터(Introcan Certo)	B. Braun	1B03258241	24Gx3/4"(0.7 x 19mm)
젤라틴 튜브의 형태:
이온 스퍼터 코터 기계	Hitachi	e1010	-
주사 전자 현미경	Hitachi	S-3000N	-
젤라틴 튜브의 세포 배양:
Trypsin-EDTA	Gibco	488625	100 mL 바이알
소 태아 혈청	Gibco	923119	500 mL 바이알
Dulbecco의 변형된 독수리 배지	Gibco	31600-034	분말
각질 세포-SFM 배지	Gibco	10744-019	500mL 바이알
T25 배양 플라스크	TPP	90025	VENT 유형
6웰 플레이트	Falcon	1209938	-
Immunocytochemistry:
Phospate-buffered saline	Gibco	654471	500mL 바이알
아세트산 빙하	Ferak	Art. -Nr. 00697	500 mL 바이알
NP-40 계면활성제(Tergitol 용액)	Sigma	056K0151	500 mL 바이알
Normal goat serum	Vector Laboratories	S-1000-20	20 mL 바이알, 농축
Nestin (1차 항체)	Santa Cruz Biotechnology	SC-23927-Donkey
anti-mouse-fluorescein isothiocyanate ( 보조 항체)	Santa Cruz Biotechnology	SC-2099-Hoechst
33342	Anaspec	AS-83218	5 mL vial
In vivo biocompatibility test:
Tiletamine+zolazepam	Virbac	BC91	5 mL 바이알
자일라진	바이엘 한국	KR03227	10 mL 바이알
케토프로펜	아스타	1406232	2 mL 바이알
포비돈-요오드 용액	Everstar	HA161202	4 L 배럴
Cefazolin	China Chemical & 제약	18P909	1g 유리 병
메스 칼날	신 텍 기	ST-B021	●
서 지어 가위	신 텍 기	ST-B021	●