광학 일관성 단층 촬영 (10 월), 3 차원 영상 기술, 모니터링 하 고 다세포 종양 spheroids의 성장 활동 특성 사용 되었다. 접근, 및 내장 광 감쇠 대비에 따라 spheroids에서 레이블 없는 죽은 조직 검출 복을 사용 하 여 종양 spheroids의 정확한 체적 정량화 시연 했다.
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방법 논문
광학 일관성 단층 촬영 (10 월), 3 차원 영상 기술, 모니터링 하 고 다세포 종양 spheroids의 성장 활동 특성 사용 되었다. 접근, 및 내장 광 감쇠 대비에 따라 spheroids에서 레이블 없는 죽은 조직 검출 복을 사용 하 여 종양 spheroids의 정확한 체적 정량화 시연 했다.
종양 spheroids 암 연구 및 항 암 신약의 3 차원 (3D) 세포 문화 모델 개발 되었습니다. 그러나, 현재, 높은 처리량 modalities 이미징 밝은 필드 또는 형광 탐지를 활용 하 여 수 없습니다 제한 된 빛이 침투, 형광 염료의 확산으로 인해 종양 회전 타원 체의 전반적인 3D 구조를 해결 하 고 깊이-resolvability. 최근, 우리 실험실 광학 일관성 단층 촬영 (OCT), 레이블 및 비 파괴적인 3D 96 잘 접시에 다세포 종양 spheroids의 경도 특성 분석을 수행 하려면 양식 적임 이미징의 사용을 시연 했다. 10 월은 높이 약 600 µ m까지 성장 하는 종양 spheroids의 3D 형태학 상과 생리 적인 정보를 얻는 능력. 이 문서에서는, 높은 처리량 (HT-10 월) 10 월 이미징 시스템을 전체 다 잘 판 검사 및 종양 spheroids의 3D 10 월 데이터를 자동으로 가져옵니다 설명 합니다. 프로토콜에 HT-10 월 시스템 및 건설 지침의 세부 사항을 설명합니다. 3D 10 월 데이터에서 하나 3d 렌더링은 회전 타원 체의 전체 구조를 시각화할 수 및 직교 분할 영역 크기와 볼륨의 형태학 정보에 따라 종양 회전 타원 체의 경도 성장 곡선을 특성화 고의 성장 모니터링 광학 내장 감쇄 대비에 따라 종양 회전 타원 체에 죽은 셀 영역입니다. 우리는 약물 검사로 biofabricated 샘플을 특성화에 대 한 HT-10 월에는 높은 처리량 이미징 형식으로 사용할 수 있습니다 보여줍니다.
암은 세계1죽음의 두 번째 주요 원인. 암을 대상으로 하는 약물을 개발 하는 것은 환자에 대 한 중요 한 중요성 의입니다. 그러나, 그것은 새로운 항 암 약의 90% 이상 효능과 임상 실험2에서 예기치 않은 독성의 부족 때문에 개발 단계에서 실패 추정. 이유의 일부는 약 발견2 의 다음 단계에 대 한 복합 효능 및 독성의 예측 값이 제한 된 결과 제공 하는 복합 심사에 대 한 간단한 2 차원 (2D) 세포 문화 모델의 사용에 표시 될 수 있습니다. , 3 , 4. 최근 3 차원 (3D) 종양 회전 타원 체 모델 항 암 약물 발견3,,45 에 대 한 임상 관련 생리 및 약리 데이터를 제공 하도록 개발 되었습니다 6,7,,
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1입니다. 셀의 준비
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96 잘 접시에 Spheroids의 높은 처리량 광학 일관성 단층 촬영 화상 진 찰
그림 3 HT-10 월 3 일에 HCT 116 종양 spheroids 96 잘 접시의 검사의 결과 전시 한다. 전체 접시의 순차 스캔 오른쪽 아래 우물 (H12)에서 시작합니다. 그림 3B HT-10 월 시스템의 소프트웨어 구현에 대 한 흐름 차트가 표시 됩니다. 기다려야 다음 음, ~ 2 접시 이동 후 한 회전 타원 체 데이터 수집 하 고 처리 했다, 휴식, 다음 회전 타원 체 데이터를 수집 하는 회전 타원 체를 허용 하는 s. 각 10 월 데이터 1024 복, 2.3 m m3x 0.84 x 1.0의 실제 볼륨에 대응 x 400 x 400으로 구성 됩니다. <.......
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종양 활동은 매우 그것의 형태학 상 구조에 관련이 있다. 유사한 특성 성장 곡선 2D 셀 문화에 대 한 모니터링, 3D 종양 spheroids에 대 한 성장 곡선을 추적 이다 또한 다른 세포에 대 한 장기적인 회전 타원 체 성장 동작에 대 한 기존의 접근. 특히, 우리 종양 저하 또는 직접 성장 곡선에 반영 하는 종양 재 성장을 분석 하 여 약물 응답을 특징 수 있습니다. 따라서, 3 차원 종양 spheroids, 크기, 볼륨, 성장 곡선, 파생 등의 정량적 평가 종양 spheroids의 특성화 및 복합 효과의 평가에 매우 중요입니다. 현재, 밝은 분야, 위상 대조를 기반으로 플랫폼을 이미징 또는 형광 이미징 일상적인 이미징 및 형태학의 분석 또는 3D 종양 spheroids8,,918의 기능에 대 한 설립 되었습니다.
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저자 공개 경쟁 관심.
이 작품은 NSF에 의해 지원 되었다 IDBR (DBI-1455613), PFI:AIR를 부여-TT (IIP-1640707), NIH 교부 금, R21EY026380, R01EB025209, R15EB019704 및 Lehigh 대학 시작 기금.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Custom Spectral Domain OCT 이미징 시스템 | 우리 실험실에서 개발된 | ||
| Superluminescent Diode (SLD) | Thorlabs | SLD1325 | light source |
| 2× 2 단일 모드 융합 광섬유 커플러, 50:50 분할 비율 | AC Photonics | WP13500202B201 | |
| Reference Arm | |||
| Lens Tube | Thorlabs | ||
| Adapter | Thorlabs | ||
| Collimating Lens | Thorlabs | AC080-020-C | |
| 초점 렌즈 | Thorlabs | ||
| Kinematic Mirror Mount | Thorlabs | ||
| Mirror | Thorlabs | ||
| 1D Translational Stage | Thorlabs | ||
| 연속 중립 밀도 필터 | Thorlabs | ||
| 보행자 포스트 | Thorlabs | ||
| 클램핑 포크 | Thorlabs | ||
| 샘플 암 | |||
| 렌즈 튜브 | Thorlabs | ||
| 어댑터 | Thorlabs | ||
| 시준 렌즈 | Thorlabs | AC080-020-C | |
| 검류계 | Thorlabs | ||
| 릴레이 렌즈 | Thorlabs | AC254-100-C | 망원경 설정을 위한 두 개의 릴레이 렌즈 |
| 삼각형 거울 마운트 | Thorlabs | ||
| 거울 | Thorlabs | ||
| 목표 | Mitutoyo | ||
| 보행자 포스트 | Thorlabs | ||
| 클램핑 포크 | Thorlabs | ||
| 편광 컨트롤러 | Thorlabs | ||
| 30mm 케이지 마운트 | Thorlabs | ||
| Cage Rod | Thorlabs | ||
| Stage | |||
| 3D 전동 번역 스테이지 | Beijing Mao Feng Optoelectronics Technology Co., Ltd. | ||
| 2D 틸팅 스테이지 | |||
| 회전 스테이지 | |||
| 플레이트 홀더 | 3D 프린팅 | ||
| <강력한>분광계 | |||
| 렌즈 튜브 | Thorlabs | ||
| 어댑터 | Thorlabs | ||
| 시준 렌즈 | Thorlabs | AC080-020-C | |
| 그레이팅 | 와사치 | G = 1145 lpmm | |
| F-θ 렌즈 | Thorlabs | FTH-1064-100 | |
| InGaAs 라인 스캔 카메라 | 센서 무제한 | SU1024-LDH2 | |
| Name | Company | 카탈로그 번호 | 코멘트 |
| Cell Culture Component | |||
| HCT 116 세포주 | ATCC | CCL-247 | |
| 세포 배양 플라스크 | SPL Life Sciences | 70025 | |
| 피펫 | Fisherbrand | 14388100 | |
| 피펫 팁 | Sorenson Bioscience | 10340 | |
| Gibco GlutaMax DMEM | Thermo Fisher Scientific | 10569044 | |
| 소태아 혈청, 인증, 미국 원산지 | Thermo Fisher Scientific | 16000044 | |
| 항생제-항진균제(100X) | Thermo Fisher Scientific | 15240062 | |
| Corning 96웰 투명 원형 바닥 초저 부착 마이크로플레이트 | Corning | 7007 | |
| Gibco PBS, pH 7.4 | Thermo Fisher Scientific | 10010023 | |
| Gibco Trypsin-EDTA (0.5%) | Thermo Fisher Scientific | 15400054 | |
| Forma Series II 3110 Water-Jacketed CO2 Incubators | Thermo Fisher Scientific | 3120 | |
| 장갑 | VWR | 89428-750 | |
| Parafilm | Sigma-Aldrich | P7793 | |
| 전사 피펫 | Globe Scientific | 138080 | |
| Centrifuge | Eppendorf | 5702 R | 15 mL 튜브 원심분리기 |
| NUAIRE | AWEL CF 48-R | 96웰 플레이트를 원심분리하는 경우 | |
| 현미경 | Olympus | ||
| Name | Company | 카탈로그 번호 | Comments |
| 조직학 & IHC | |||
| 디지털 슬라이드 스캐너 | Leica | Aperio AT2 | 고해상도 조직학적 이미지 획득 |
| 조직학 서비스 | Histowiz | 종양의 조직학적 및 면역조직학적 염색을 위한 서비스 요청 스페로이드 | |
| Name | Company | 카탈로그 번호 | 코멘트 |
| 상업 OCT 목록 | |||
| SD-OCT 시스템 | Thorlabs | Telesto 시리즈 | |
| Wasatch Photonics | WP OCT 1300 nm | ||
| Name | Company | 카탈로그 번호 | Comments |
| 데이터 분석용 소프트웨어 | |||
| Basic Image Analysis | NIH | ImageJ | Fiji도 작동합니다. |
| 3D 렌더링 | Thermo Fisher Scientific | Amira | 상용 소프트웨어. 옵션 1 |
| : 3D 렌더링 | 비트 플레인 | Imaris | 상용 소프트웨어. 옵션 2. |
| C++로 맞춤 개발된 | OCT 수집 소프트웨어에 | ||
| 단계 통제 | : 베이징 Mao Feng 광전자 공학 기술 Co., 주식 회사. | MRC_3 | OCT 처리 소프트웨어 |
| OCT 수집 | . GPU를 활용합니다. 사용자 지정 OCT 수집 코드에 통합되었습니다. | ||
| MATLAB에서 사용자 정의 개발한 | 형태학적 및 생리학적 분석 |
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