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방법 논문

대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 2 배 폐색 마우스 모델

11.5K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/59078

⸱

2019년 3월 1일

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 마우스 모델 선의 이상 조사를 설립 하다. 우리는 distally 오른쪽 중간 대뇌 동맥과 바로 일반적인 경 동맥 선 하 고 국 소 빈 혈의 10 또는 40 분 후 혈액 흐름을 복원.

초록

이 연구에서 중간 대뇌 동맥 (MCA) 폐색 마우스 모델 연구 대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion 채택 된다. 재현 가능 하 고 안정적인 마우스 모델은 대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 이상 조사 하 고 뇌졸중 환자에 대 한 잠재적인 치료 전략을 결정 하는 데 유용 합니다. 윌리스의 C57BL/6 마우스의 해부학에 있는 변이 대뇌 허 혈 유발 부상 후 그들의 경색 볼륨을 영향을 줍니다. 연구 그 원심 MCA 폐색 (MCAO) 수 있습니다이 문제를 극복 하 고 안정적인 경색 크기에 결과 표시 했습니다. 이 연구에서 우리는 오른쪽 MCA에 혈액 흐름의 중단을 통해 대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 2 배 폐색 마우스 모델을 설정합니다. 우리는 distally 오른쪽 MCA와 바로 일반적인 경 동맥 (CCA) 선 하 고 국 소 빈 혈의 일정 기간 후 혈액 흐름을 복원. 이 국 소 빈 혈 reperfusion 상해 안정적인 크기와 행동 적자의 경색을 유도합니다. 주변 면역 세포는 24 h 침투 기간 내 허 혈 성 뇌를 침투. 또한, 대뇌 피 질의 영역에서 신경 손실 더 reperfusion 동안 작습니다. 따라서,이 두 혈관 폐색 모델은 면역 반응 및 신경 복구 후 대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion 기간 동안 조사 적합 합니다.

서론

대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion 마우스 모델 허 혈 유발 뇌 부상1이상 조사를 위한 가장 널리 사용 되 실험 방법 중 하나입니다. 대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion 주변 면역 체계를 활성화 하기 때문에 주변 면역 세포가 허 혈 성 뇌에 침투 하 고 원인 신경 손상2. 따라서, 안정적이 고 재현 가능한 마우스 모델을 모방한 대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion 이해 선의 이상 필요 합니다.

C57BL/6J (B6) 마우스는 선 실험에서 가장 일반적으로 사용 되 긴장 때문에 그들은 쉽게 유전자 조작 될 수 있습니다. 대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 상태를 모방 MCAO/reperfusion의 두 가지 일반적인 모델 사용할 수 있습니다. 첫 번째는 실리콘 코팅 필 라 멘 트 intravascularly MCA;에 혈액 흐름을 막다 하 고용은 인접 MCAO의 intraluminal 필 라 멘 트 모델 occluding 필 라 멘 트를 복원 혈액 흐름3이후에 제거 됩니다. 더 이상 폐색 기간 외피와 subcortical 지역에서 경색 원인 반면 짧은 폐색 기간 바꾸어 지역의 병 변에서 발생 합니....

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프로토콜

제도 동물 보호와 사용 위원회 학계 Sinica와 타이베이 의과대학의 실험 동물의 사용을 위해이 프로토콜을 승인 했다.

1. MCAO/reperfusion 모델

  1. 수술까지 쥐 물과 차에 대 한 무료 액세스를 제공 합니다.
  2. 압력솥에 수술 도구와 수술 및 장비 70% 에탄올을 사용 하 여 청소. 수술 용 마스크와 멸 균 장갑을 착용 하십시오. 비드 건조 살 균 기를 사용 하 여 여러 마우스 수술 한 실험 실시 됩니다 경우 수술 도구를 resterilize.
  3. 8 월에 12 주 된 마우스 anesthetize (대량: 25-30 g) 0.8 %chloral 하이드 레이트, 복 주사를 통해를 사용 하 여. 마 취 마우스는 페달 반사 (로 회사 발가락 핀치를 사용 하 여 테스트) 후에 anesthetization 다는 것을 확인 하십시오.
  4. 수 의사 연 고를 사용 하 여 마 취 동안 마우스에 대 한 눈 건조를 방지 하기 위해.
  5. 비 침 투 적인 혈액 압력 시스템을 사용 하 여 마우스의 혈압을 모니터링.
  6. 생리 적 모니터링 시스템을 사용 하 여 그것의 직장 온도 및 동맥 혈 가스 모니터링. 36.5 ±에서 체온 유지 0.5 ° c.
  7. 예방 ....

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결과

MCAO/reperfusion 이렇게 오른쪽 MCA 주변 피 질 경색 생산과 행동 적자 발생. 허 혈 유발 경색 볼륨 (그림 1AB) 및 (그림 1 cD) 신경 손실의 다른도 결 찰 기간 증가 통해 오른쪽 MCA 영역의 대뇌 피 질에서 창조 되었다. 이 MCAO/reperfusion 상해 MCAO/reperfusion (그림 2) 후 48 h에 동물의 운동 활동을 감소. 주변 면역 세포 (CD45높은 세포)의 대량은 또한 대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion (그림 3) 후 허 혈 성 뇌 (동측 반구)를 침투. 또한, 우리 MCAO 모델이 2 배 폐색 모델을 비교 하 고이 두 .......

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토론

MCAO/reperfusion 마우스 모델은 일반적으로 인간의 일시적인 허 혈을 모방 하기 위해 고용 하는 동물 모델. 이 동물 모델 조사 선의 이상 유전자 변형 및 녹아웃 쥐 계통에 적용할 수 있습니다. 프로토콜의 여러 단계는 특히 중요 합니다. (1) microdrill 쉽게 MCA에서 출혈을 일으키는 부적절 한 행동으로, 두개골에 구멍을 만들 때 신중 하 게 사용 되어야 한다. (2) MCA 손상 되지 해야한다, 그리고 전과 결 찰 수술 후 출혈 피해 야 한다. MCA에 손상을7허 혈 성 뇌 reperfusion의 수준을 영향을 줍니다. MCA reperfusion 상태는 MCAO 후 확인 해야 합니다. 폐색 및 MCA 복원 혈액 흐름의 레이저 도플러를 사용 하 여 분석할 수 있습니다. (3)는 CCA CCA 격리 동안 하지 출혈 한다. (이 경색 크기와 사망률의 확률을 높일 수 있기 때문에 CCA 격리 중 4) 미주 신경 손상 하지 해야 합니다. (5) 마우스의 체온 36.5 ±.......

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

이 작품은 사역의 과학 및 기술, 대만 (가장 106-2320-B-038-024, 대부분 105-2221-E-038-007-MY3, 그리고 가장 104-2320-B-424-001) 및 타이페이 의학 대학 병원 (107TMUH-SP-01)에 의해 지원 되었다. 이 원고는 월 러 스 학술 편집 편집 했습니다.

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
뼈 rongeurDienerFriedman
부 프레 노르 핀시그마B-044
세파 졸린시그마1097603
클로랄 수화물시그마C8383
해부 현미경니콘SMZ-745
전기 가위Petpro
10 % 포르말린SigmaF5304
저미네이터 드라이 비드 살균기Braintree Scientific
홍채 집게칼 Klappenecker10cm
홍채 가위다이너9cm
홍채 가위 STRKarl Klappenecker11cm
마이크로드릴스톨팅FOREEDOM K.1070
마이크로 가위 - VannasHEISSH-4240블레이드 7mm, 8cm
마우스 뇌 매트릭스세계 정밀 기기
비 침습적 혈압 시스템무로마치MK-2000ST
작동 가위 STRKarl Klappenecker14cm
생리 모니터링 시스템하버드 장치
면도기 블레이드Ever-Ready
Stoelting 설치류 워머Stoelting53810가열 패드
봉합 클립Stoelting
핀셋IDEALTEKNo.3
Vetbond3M15672외과용 접착제
10-0 봉합사UNIKNT0410
2,3,5-Triphenyltetrazolium 염화물시그마T8877

참고문헌

  1. Woodruff, T. M., et al. Pathophysiology, treatment, and animal and cellular models of human ischemic stroke. Molecular Neurodegeneration. 6 (1), 11(2011).
  2. Chamorro, A., et al. The immunology of acute stroke. Nature Reviews. Neurology.

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