직접 분사 Lentiviral 벡터의 하이라이트 쥐 척수에서 여러 모터 통로

요약

이 프로토콜에서는 쥐 척수 조직으로 retrogradely 운송할 수 있는 바이러스 성 벡터의 주입을 보여 줍니다. 벡터는 시 냅 스에서 찍은 이며 대상 뉴런의 세포 체에 이송. 이 모델은 중요 한 척추 경로 또는 유전자 치료 응용 프로그램에 대 한 대상 셀의 역행 추적에 적합 합니다.

초록

신 경계에 있는 세포에 관심사의 단백질을 도입 하는 것은 대부분 분자에 대 한 액세스를 제한 하는 타고 난 생물학적 장벽 때문 도전적 이다. 척수 조직에 직접 주입 셀 시체에 대 한 액세스를 제공 하는 이러한 장벽을 무시 하거나 synapses 분자를 포함 될 수 있습니다. 이 방법으로 바이러스 성 벡터 기술 결합 유전자 치료 또는 요로 추적을 위해 신경 조직으로 대상 유전자의 도입에 대 한 수 있습니다. 여기 바이러스 고효율 역행 전송 (HiRet)에 대 한 설계는 propriospinal 수 (PNs) 척수 및 brainstem 핵 뉴런에 특정 전송 격려의 시 냅 스에서 소개 된다. PNs를 대상으로 rubrospinal 및 reticulospinal 책자 뿐만 아니라 척추 세그먼트에 걸쳐 서로 그들의 상호 모터 통로에서 받은 수많은 연결의 활용. HiRet 벡터를 사용 하 여 constitutively 활성 녹색 형광 단백질 (GFP) 쇼 고화질 세부 셀 시체, 축 삭 및 수지상 버는 흉부 PNs와 pontine reticular 형성에 reticulospinal 신경의 대표적인 추적 HiRet은 brainstem 경로 및 PNs에 잘 통합 하지만 corticospinal 지역 신경으로 나이 종속 통합을 보여줍니다. 요약 하자면, 척수 주입 바이러스 성 벡터를 사용 하 여 대상된 책자의 뉴런으로 관심사의 단백질의 도입에 대 한 적합 한 방법입니다.

서론

바이러스 성 벡터는 결함 유전자, upregulate 중요 한 성장 단백질에 대 한 보상 또는 제조 마커 단백질 구조와 시 냅 스의 연결을 강조 하는 세포로 유전 물질을 발생 시킬 수 있는 중요 한 생물 학적 도구 그들의 목표입니다. 이 문서는 형광 추적 주요 모터 통로 강조 하기 위해 고효율 retrogradely 이동식 lentiviral 벡터의 쥐 척수에 직접 주입에 집중 한다.  이 방법은 매우 적절 한 뉴런의 다양 한 인구에 관심사의 단백질을 소개 axonal 재생 및 regrowth 연구 이며 또한 신경 기능 매핑 연구^1,2에 대 한 침묵 하는 데 사용 되었습니다.

대부분의 척추 모터 통로의 해 부 세부 BDA 등 불 화-골드^3,,45,,67 클래식 추적기와 직접 주입 연구를 통해 해명 했다 ^{, 8}. 이러한 추적기 금 간주 됩니다 하지만 손상 된 축 삭에 의해 통풍 관 등 특정 단점이 있을 수 있습니다 또는 백색 질 주사를 주변에 통과에 축 삭 사이트^9,10,11 . 이 통로 연결의 잘못 된 해석으로 이어질 수 있는 고 어디 손상 되거나 절단 축 삭으로 염료 흡수 나중 분석¹²동안 섬유 재생에 대 한 오해 수 재생 연구에 단점이 될 수 있습니다.

그들은 신경 인구^{13,14,15,,1617,18에에서 안정적이 고 장기적인 식 제공 lentiviral 벡터는 유전자 치료 연구에서 인기 ,19}. 그러나, 전통적으로 포장된 lentiviral 벡터 역행 전송 제한 수 및 실행할 수 있는 면역 체계가 반응을 사용 하는 경우^4,,2021 vivo에서. HiRet 되 나 매우 효율적인 역행 전송 벡터 역행 전송^22,23향상 하이브리드 벡터 만들려고 광견병 바이러스 당단백질으로 바이러스 성 봉투를 수정 하 여 카토 외에 의해 제작 되었습니다.

퇴행 성 추적 해당 셀의 축 삭에 의해 촬영 하 고 세포 체에 수송을 대상 신경의 시 냅 스 공간으로 벡터를 소개 합니다. HiRet의 성공적인 전송 모터 뉴런²²에 근육 및 쥐 및 대주교^23,24 의 두뇌에 신경 시 냅 스에서 입증 되었습니다. 이 프로토콜에서는 특별히 propriospinal 수 및 brainstem 신경 세포의 시 냅 스 터미널을 대상으로 요 추 척수에 주입을 보여 줍니다. PNs는 많은 다른 척추 경로에서 연결을 수신 하 고 따라서 척수 및 brainstem에 있는 신경 세포의 다양 한 인구를 대상으로 이용 될 수 있다. 이 연구에서 레이블이 신경 회로 innervating hindlimb 모터 기능에 관련 된 모터 신경 풀을 나타냅니다. 강력한 라벨 척수 및 brainstem, 포함 고 충실도 수지상 아 버 및 축 삭 맨끝에서 볼 수 있다. 우리 또한 경부 척수 내에서 이전 연구에서 propriospinal 및 brainstem reticulospinal 통로²⁵를이 방법을 사용 했습니다.

이 프로토콜에는 바이러스 성 벡터는 쥐의 요 추 척수에 주입 방법을 보여 줍니다. 영화 1 에서 보듯이 절 개 마지막 갈비뼈에 있는 L1 척추 식별 대상 이다. L1-L4 척수를 통해 근육을 노출 하는 3-4 cm 절 개에 대 한 꼬리 랜드마크로 사용 됩니다. T11-T13 척추의 등 쪽 측면의 laminectomies 수행 되 고 beveled 유리 바늘 0.8 m m 중간 인하 1.5 m m에서 측면 이동은 바이러스 삽입 회색 문제에 깊은.

프로토콜

다음 수술 및 동물 치료 절차의 모든 동물 관리 및 사용 위원회의 사원 대학에 의해 승인 되었습니다.

1. 미리 수술 준비

1. 가져온된 유리 바늘 바이러스 주입 3.5 nanoliter 유리 모 세관 펫 nanoliter 인젝터에 대 한 설계를 사용 하 여 수술 전에 몇 일을 위한 준비. 두 바늘 템플릿을 만들 제조업체의 지침에 따라 2 단계 바늘 끌어당기는 사람에 각 피 펫을 당겨.
2. Microscissors 초과 유리의 약 1-2 m m 절단 하 여 바늘의 팁을 구체화 합니다. 30 ~ 40 µ m 가늠 구멍으로 바늘을 현미경 교정 슬라이드 현미경 측정 대략 조리개 크기입니다.
3. 30 °에 위치 하는 바늘 micropipette beveller 30-40 µ m 조리개와 45 ° 경사진된 각도 팁을 만드는 데 사용 합니다. 교정 슬라이드에 버 니 어 규모와 조리개 너비를 확인 합니다. 물과 에탄올 파편을 멀리 세척 하 고 정기적으로 블랙 마커는 바늘 표시를 유연한 바늘 첨부와 주사기를 사용 하 여 유리 바늘을 통해 전달 합니다.
4. 이전에 70% 에탄올으로 청소 대상된 페 트리 접시에 바늘을 놓고 자외선 아래 Biosafety 두건에서 30 분 동안 소독 합니다.
5. HiRet lentivirus 절차 직전 냉장고에서 적당 한 볼륨을 제거 하 여 준비 합니다.
   참고: 적합 한 볼륨 포함 사출에 필요한 금액 (1 µ L 당 주입 주사의 수 x) 작은 양의 여분의 볼륨 pipetting 및 로드 하는 손실에 대 한 계정에 플러스. 전송 하 고 사용에 얼음에 바이러스를 저장 합니다.
6. 버 니 어 가늠 micromanipulator에 그것을 배치 하는 micropump에 그것을 연결 해 인젝터를 준비 합니다.
7. 유리 바늘 준비, 신중 하 게 주사기와 레드 오일 등 착 색된 염료를 로드 하는 유연한 바늘으로 복. 아니 거품 바늘에 남아 확인 하십시오. 바늘, 처리할 때 무 균 기술을 사용 하 여을 팁 감동 자제 합니다.
8. 인젝터, 바늘 세탁기에 올바르게 장착 되어, 인젝터 모자에 꽉, 끝장 이다 고 철강 인젝터 바늘 확장에 유리 바늘 삽입 약 ¾ 유리 바늘의 길이. 바이러스는 이후 단계에서 바늘에 로드 될 수 있습니다.

2. 마 취와 수술 사이트 준비

1. 디지털 스케일에 동물을 무게. 필요한 마 취의 볼륨을 결정 하 고 수술 후 체중의 모니터링을 위한 수술 체중을 기록 합니다. 여성 Sprague-Dawley 쥐 약 200-250 g이이 프로토콜에 사용 되었다.
2. 쥐 isoflurane 흡입 또는 주사 마 취 제/xylazine 솔루션 중 하나를 사용 하 여 anesthetize (k / x). 여기, 케 타 민 intraperitoneally 67 mg/kg 및 6.7 mg/kg의 복용량에 xylazine에 주입 됩니다.
3. 단단히 발을 곤란 하 게 하 여 적절 한 마 취 비행기를 확인 합니다. 재귀 철수 경우 진행 하기 전에 몇 가지 추가 분을 기다립니다.
   참고: 또한 수염, 눈 및 의식의 표시 호흡 속도 관찰 합니다. 수염은 꿈 틀, 눈 깜박임, 부드럽게 만질 때 또는 빠르고 얕은 호흡은, 경우 마 취 비행기 깊은 프로토콜 진행 하는 때까지 기다립니다. 또한 laminectomy 주입 수술을 통해 이러한 징후를 모니터링 합니다. 동물 마 취 얕은 평면 표시, 관리 케 타 민 전용 평등의 부스터 샷 ½에 원래 k / 복용량 x.
4. 쉐이브는 견의 열 등 한 각도를 엉덩이에서 등 쪽 midline 따라 쥐. 쉽고 더 정확 하 게 면도 긴장 된 동물의 피부를 당겨.
5. 두 눈에 안과 연 고를 적용 합니다.
6. 살 균 소독 사이트 면도 영역에 적용 됩니다. 첫 번째 스크럽 모든 머리카락과 파편 5% 요오드 솔루션 및 지우기 멀리 멸 균 거 즈를 담가. 이 단방향 슬쩍 70% 에탄올에 배어 무 균 거 즈와 그렇게 따릅니다 아무 영역에 두 번 연결. 이 같은 기술을 사용 하 여 교류 요오드와 에탄올에 젖은 거 즈를 두 번 더.

3. 수술 필드 및 악기 준비

1. 압력가 마로 소독 외과 도구 살 균 필드를 만드는 살 균 포장 풀기으로 메스, rongeurs, 쥐 이빨 집게, 봄이 위, hemostats, 중간 지점 곡선 겸 자 및 견인 기 또는 가중치 후크를 포함 하는 세트를 준비 합니다.
2. 메 마른 외과 장갑의 패키지를 열고 메 마른 장갑 랩 테이블에 배치 합니다. 무 균 포장의 오염을 방지 하기 위해 사용 되는 도구에 대 한 추가적인 살 균 필드로 사용 합니다.
3. 살 균 필드에 #10 메스 블레이드를 놓습니다. Hemostats와 핸들에 블레이드를 보호 합니다. 위치 멸 균 식 염 수, 4.0 크롬 다 봉합 및 재료 제어는 cauterizer, 멸 균 거 즈, (근육 출혈)에 대 한 살 균 면 밀고 도포 또는 접근 가능한 장소 (뼈 물림)에 대 한 bonewax gelfoam 등 출혈.
4. 동물을 검색 하 고 메 마른 헝겊에 그것을 설정 합니다. 소변 수집 하 방광 아래 거 즈를 놓습니다. 복 부 아래 압 연된 수건으로 대상 영역을 버팀대. 사용 가능한 경우 특히 더 절차에 대 한 살 균 옷감 밑 수술 난방 패드를 놓습니다.
   참고: 무 균 생존 수술 시 중요 하다입니다. 또는 개별 수술 장갑 낀된 손, 그리고 사용 구슬 균 악기 불 임이 손상 된 경우의 불 임을 유지 하기 위해 손에서 70% 에탄올 스프레이 병을 유지 합니다.

4. 척추 열 노출과 laminectomy 사이트 식별

1. L1 척추를 찾으려고 피부 절 개를 마지막 갈비뼈에서 손가락을 부드럽게 눌러 만들 수는 있는 영역을 식별 합니다. 랜드마크로 이것을 사용 하 여 만들 3-4 cm 피부 절 개를 끝 #10 수술 메스 그냥 열 등 근육을 노출 하는 L1. 부드러운 확산에 의해 피부를 긴장 늦추지 잡고 누르고 단단히 메스 블레이드와 깨끗 한 절 개를 보장 하기 위해.
2. 잘라내어 집게와가 위 필요한 경우 표면 지방 확산. (대상 척추에 따라 거기 수 있습니다 또는 큰 지방 패드가 근육을 표면 수 없습니다).
3. 메스 블레이드 또는 손가락의 평면 spinous 프로세스에 대 한 느낌. 종종 중간 지역 어느 한쪽에 백색 근 막의 "V"에 의해 설명 될 것입니다. 쥐 이빨 집게, 상위 프로세스에 안전 하 게 잡아 다음 가능한 프로세스에 가까운 2 긴, 깊은 상처를 확인 하 실 수 있도록 작은 rostral 상처를 확인 하십시오. 컷의 깊은 지점에는 척추의 등 쪽 표면 메스 블레이드와 함께 느낄 수 있습니다.
4. 브래킷으로와 가시성을 개선 하기 위해 가중치 걸 제쳐두고 옆 근육을 잡아. 메스, 봄이 위 또는 그들의 머리의 모양을 결정 하 rongeurs 프로세스 주위 명확한 근육.
   주: 척수 척수 조직 중지 이전 개발 뼈 보다 성장으로 척추 칼럼의 전체 길이 연장 하지 않습니다 기억 하십시오. 즉, 대상 척추 수준 다르게 명명 된 척추 아래 있을 수 있습니다.
5. T11 및 인접 T12, T13 프로세스를 찾습니다.
   참고: 올바른 척추 레벨을 대상으로 지원 쥐 척수 아틀라스와 매우 비슷한이 마우스에서 개요 이전 연구에서 찾을 수 있습니다 척추 구조^6,33. T9 같은 rostral spinous 프로세스 중간 랜드마크 줄 그대로 둡니다.

5. 한 laminectomy 수행

1. 대상 영역 올바르게 식별 되 면 laminectomies T11 T13의 등 쪽 측면의 수행 합니다. 부드럽게 척추 척추 인 대, 뼈의 초기 물린 rongeurs 삽입 하 좋은 사이트는 공개를 확산. 정밀한 제어를 증가 하는 반 폐쇄 위치는 rongeurs 잡으십시오.
2. rongeurs와 작은 물린 취하여 spinous 프로세스와 척추의 등 쪽 부분을 제거 합니다. 수 척수 손상 또는 경질을 방해 하지 않도록 주의 하십시오. 약간 풀 수 있도록 쥐 이빨 집게와 척추에서 척수 들어올린 척수 조직을 공격 하는 경향이 감소.
3. 선택을 취소 뼈 멀리는 중간에서 중간 혈관 관찰 될 수 있도록 합니다. 명확 하 게 표시 척수 조직 하 고는 무료로 파편 창 남겨 주세요.
4. 집게와 척수를 부드럽게 터치 합니다. 그들의 마 취 비행기 깊은 경우에 일부 동물 뛰어 유연 수 있습니다. Lidocaine 같은 마비 에이전트의 몇 방울 주입 절차 동안 점프 방지 하기 위해 척수에 직접 적용 됩니다.
5. Spinous 프로세스 rostral와 laminectomy 창 꼬리에 고정 집게를 고정 하 여 척추 홀더에 동물을 확보. 움직임을 호흡의 효과 부정 하는 척추 홀더를 사용 하 여 동물의 복 부를 올립니다. 이 바늘 안정성을 증가 하 고 주입의 적절 한 깊이 보장.

6. 바이러스 로딩과 인젝터 위치

1. Parafilm의 조각에 약 5 µ L를 pipetting는 팁 드롭 안에 바늘을 위치 하는 인젝터에 바이러스를 로드 합니다.
2. 20-100 nL/s의 속도에서 바이러스의 최대 4 µ L를 철회 하는 micropump를 사용 합니다.
3. 주사 바늘의 팁이 차단 되지 않습니다 보장 하기 위해 바늘에서 바이러스의 작은 금액을 출시 하는 컨트롤러를 설정 합니다. 실험실 지우기와 초과 바이러스를 닦아내십시오.
   참고: 강철 바늘으로 해밀턴 주사기는 가져온된 유리 펫을 사용할 수 있습니다.
4. 버 니 어 눈금 표시 되도록는 micromanipulator를 놓고 바늘 척수의 중간에 위치 합니다.
   참고: 중간 선 때로는 척수의 앞쪽 표면에서 실행 하는 큰 혈관에 의해 찾을 수 있습니다. 그러나,이 개별 쥐, 다를 수 있습니다 그리고 중간 대상으로 비교해보면 그대로 spinous 프로세스를 확인 해야 합니다.
5. 0.8 m m는 micromanipulator에 버 니 어 규모를 사용 하 여 옆으로 바늘을 직접.
6. 들여쓰기, 하지만 하지 puncturing, 경질까지 척수에 바늘을 낮춥니다. 그것은 1.5 m m의 깊이에 침 몰 될 때까지 경질 바늘 찔린 빠른 트위스트 동작을 사용 합니다.

7. 척수에 바이러스를 주입

1. 일단 바늘 장소에 프로그램 400 nL/분 확인 그 바이러스의 속도로 주입 하는 인젝터가 염료의 진행을 관찰 하 여 척수를 입력. 분명 한 누설 또는 척수 조직의 돌출 되어야 한다. 누설, 관찰 하는 경우이 때로는 200 nL/분 사출 속도 감소 시켜 해소 수 있습니다.
2. 주입이 완료 되 면, 허용 2-5 분 (에 따라 볼륨 주입) 척수에 바늘은 바이러스의 확산을 촉진 하기 위하여.
3. 천천히 바늘을 철회 하 고 주입 사이트로 이동 합니다. 각 6 개의 사이트 약 1 m m L1-L4 척추 조직의 길이 따라 간격으로 바이러스의 1 µ L를 주사. 동일한 바늘으로 제대로 작동 하 고 각 주입에 대 한 사용할 수 있습니다.

8. 상처 폐쇄 및 수술 후 관리

1. 척추 홀더에서 동물을 제거 하 고 견인 기 또는 측면 근육을 확산 하는 데 사용 하는 걸 꺼내. 닫기 전에 모든 파편의 분명히 상처 인지 확인 합니다.
2. 4.0 크롬 다 봉합 사를 사용 하 여 근육 봉합 봉합 스레드 내부 피부 자극의 가능성을 줄이기 위해 매듭에 가까이 잘라.
3. 피부 상처 9 mm 클립을 사용 하 여 닫을 주식. 있도록 최적의 치유, 스테이플링 전에 피부의 가장자리를 라인.
4. 패드와 모니터까지 반쯤 온난화 물 대류에 동물을 놓습니다.
5. 유체와 감염을 방지 하기 위해 cefazolin와 같은 항생제를 피하 메 마른 염 분의 5-10 mL를 주사. 동물 때 외래, 가정 그것의 감 금에 다시 배치 하 고 초기 진통제를 제공 합니다.  고통을 고 통과의 어떤 표시 든 지에 대 한 쥐를 모니터링 하 고 통증의 완화에 대 한 당신의 IACUC 승인 절차에 따라 치료.

결과

성공적인 주입 및 전송 바이러스 성 벡터의 일방적인 신경 척수 및 brainstem 핵 특정의 강력한 인구의 변환 될 합니다. 그림 1 에서는 신경 세포와 axons 흉부 척수 및 brainstem에서 4 주 후 주입의 pontine reticular 형성의 틀에 박힌 라벨을 보여 줍니다. 상당한 GFP 식 주입 (그림 1A, 박스형된 지역)에 동측 측에 흉부 척수의 회색 문제에 신경 세포에서 볼 수 있다. 몇 가지 신경 contralateral 측면, 특히 정중 선 근처에 관찰 된다. 백색 질에서 GFP 식 관찰 됩니다 (그림 1A, 화살표 및 화살표), 동측 코드에서 축 삭에 특히 지역에서에서 전형적인 propriospinal 축 삭 (화살촉). 그림 1A' a, 신경 셀 시체와 모 수석에서 보여주는 전형적인 식 박스형 영역의 더 높은 확대를 보여...

토론

두뇌 및 척수에 있는 신경 세포의 유전자 조작 하이라이트 감각, 모터 및 자율 경로 부상^27,28, 후 신경 책자의 재 성장 잠재력을 탐구 하 고 형광 추적 통해 역임 했다 ^{29 , 30 , 31 , 32 , 33}. 직접 척수에 주입 retrogradely 운송할 수 있는 바이러스 성 벡터의 중앙 신경 조직에이 방법을 매핑 경로 대 한 탁월한 선택을 만들고 그들의 시 냅 스 연결을 통해 신경 인구를 타겟팅 할 수 있습니다. HiRet 벡터는 특별히 보여준다 선택적인 통풍 관 신경 시 냅 스

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
#10 메스 블레이드	Roboz	RS-9801-10	메스와 함께 사용합니다.
1mL 주사기	Becton, Dickinson and Company	309659	마취제 IP 주사, 잠재적 마취 부스터 샷 및 항생제 주사용.
10mL 주사기	Becton, Dickinson and Company	309604	수술 후 동물에 식염수를 주입합니다.
4.0 크롬 캣거트 봉합사	DemeTECH	NN374-16	닫는 동안 근육을 다시 바인딩합니다.
48000 마이크로피펫 베벨러	세계 정밀 기기	32416	인발유리 모세관 끝을 베벨링하여 기능성 유리 바늘을 형성하는 데 사용됩니다.
5% 요오드 용액	Purdue Products LP	L01020-08	수술 부위의 멸균에 사용합니다.
70% 에탄올	해당	없음 N/A	새로 준비된 유리 바늘, 수술 준비 중 동물 모델, 수술 중 외과 의사의 손 및 기타 모든 경미한 무균 유지의 살균을 위해.
마취제 (케타민 / 자일라진 용액)	Zoetis	240048	수술 중 동물을 올바른 의식 상태에 유지합니다.
항생제 (세파 졸린)	West-Ward Pharmaceuticals	NPC 0143-9924-90	수술 후 감염 예방을 위해 피하 주사합니다.
비드 살균기	CellPoint	5-1450	수술 기구를 가열 살균합니다.
Bonewax	Fine Science Tools	19009-00	뼈 출혈의 경우 뼈를 밀봉합니다.
Cauterizer	Fine Science Tools	18010-00	과도한 출혈을 방지하기 위해 수술 중 절단된 동맥이나 정맥을 밀봉합니다.
디지털 저울	Okaus	REV.005	수술 준비 중 동물의 무게를 잰다.
유연한 바늘 부착	세계 정밀 기기	MF34G-5	유리 바늘을 청소하고 유리 바늘에 붉은 기름을 넣습니다.
Gelfoam	Pfizer	H68079	뼈 출혈의 경우 뼈를 밀봉합니다.
유리 모세관	World Precision Instruments	4878	풀드 유리 바늘의 경우 - 나노 리터 인젝터 용으로 설계되어야합니다.
이발기	Oster	111038-060-000	수술 부위의 모발을 청소합니다.
지혈제	Roboz	RS-7231	수술에서 일반적으로 사용됩니다.
Kimwipes	Kimtech	34155	수술에서 일반적으로 사용됩니다.
중간 포인트 곡선 집게	Roboz	RS-5136	수술에서 일반적으로 사용합니다.
버니어 스케일이 있는 마이크로 매니퓰레이터	Kanetec	N/A	수술 중 정확한 표적화용.
Microscissors	Roboz	RS-5621	갓 뽑은 유리 모세관 튜브에서 유리를 절단하기 위해.
Microscope with Light and Vernier Scale Ocular	Leitz Wetzlar	N/A	기능성 유리 바늘로 당겨진 유리 모세관 튜브의 베벨링을 시각화하고 측정하는 데 사용됩니다.
MicroSyringe Pump Controller	World Precision Instruments	62403	주입 속도를 제어합니다.
Nanoliter 2000 펌프 헤드 인젝터	World Precision Instruments	500150	통제 된 방식으로 바이러스를로드하고 주입합니다.
니들 풀러	Narishige	PC-100	유리 모세관 튜브를 가열하고 분리하여 유리 바늘을 형성합니다.
안과 연고	Dechra 수의학 제품	RAC 0119	수술 중 동물의 눈을 보호합니다.
파라필름	베미스	PM-996	나노인젝터에 바이러스를 로딩하는 데 도움을 줍니다.
PrecisionGlide 바늘 (25G x 5/8)	Becton, Dickinson and Company	305122	동물 모델을 주입 할 수 있도록 1mL 및 10mL 주사기와 함께 사용합니다.
쥐 이빨 집게	Roboz	RS-5152	가시 돌기를 잡는 데 사용됩니다.
레드 오일	N/A	N/A	주입 중 조직에 들어가는 바이러스의 시각화를 위한 전면을 제공합니다.
견인기	Roboz	RS-6510	수술 상처를 엽니다.
Rimadyl Tablets	Bio Serv	MP275-050	수술 후 통증 관리용.
Rongeurs	Roboz	RS-8300	수술 중 척추에서 근육을 제거합니다.
메스 블레이드 핸들	Roboz	RS-9843	수술 중 동물 모델의 피부와 지방 패드를 잘라냅니다.
가위	Roboz	RS-5980	수술에서 일반적으로 사용합니다.
스테인리스 스틸 상처 클립	CellPoint	201-1000	봉합 시 수술 상처의 피부를 묶습니다.
스테이플 제거 집게	Kent Scientific	INS750347	스테이플을 잘못 적용한 경우 제거합니다.
멸균 천	Phoenix Research Products	BP-989	수술을 위한 멸균 표면을 제공합니다.
멸균 솜 팁 애플리케이터	Puritan	806-WC	무균 상태를 유지하면서 수술 상처의 혈액을 흡수합니다.
멸균 거즈	Covidien	2146	무균 상태를 유지하면서 수술 부위와 수술 도구를 청소합니다.
멸균 식염수	Baxter Healthcare Corporation	281324	혈액 정화 및 수술 후 수액 교체에 사용됩니다.
수술 장갑	N / A	N / A	수술 중 멸균 영역을 유지하기 위해 외과 의사가 사용합니다.
수술용 발열 패드	N/A	/A	수술 중 동물모델의 체온을 유지하기 위한 것입니다.
수술용 현미경	N/A	해당 없음	수술 상처의 시각화를 향상시킵니다.
외과용 스테이플러	Kent Scientific	INS750546	스테이플을 적용합니다.
T / 펌프 열 요법 워터 펌프	Gaymar	TP500C	물 대류 온난화 패드에 따뜻한 물을 펌핑합니다.
물 대류 온난화 패드	Baxter Healthcare Corporation	L1K018	의식을 잃은 동물의 체온을 유지하기 위해 수술 후 회복 영역에서 사용합니다.
가중 후크	N/A	N/A	수술 상처를 엽니다.