이 프로토콜은 배양에서 VX2 세포를 성장시키고 토끼에서 후복막 림프절 전이를 가진 자궁내막암의 정형외 VX2 모델을 생성하는 표준화된 방법을 제시한다. 정형외 자궁내막암 모델은 림프절 전이의 진단을 위한 새로운 이미징 양식의 전임상 연구에 중요하다.
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이 논문에서
요약
초록
자궁내막암은 북미에서 가장 흔한 부인과 악성 종양이며 발병률은 전 세계적으로 증가하고 있습니다. 치료는 림프절 절제술에 의해 결정된 림프절 침범에 따라 보조 요법의 유무에 관계없이 수술로 구성됩니다. 림프절 절제술은 많은 환자에서 치료 적 이점을 가지고 있는 것으로 나타나지 않은 병적 절차이므로 림프절 전이를 진단하는 새로운 방법이 필요합니다. 새로운 화상 진찰 에이전트를 시험하기 위하여는, retroperitoneal 림프절 전이를 가진 자궁내막암의 믿을 수 있는 모형이 필요합니다. VX2 자궁내막암 모델은 문헌에 자주 기술되어 왔다; 그러나 모델 수립 방법에 대해서는 상당한 차이가 있습니다. 더욱이, 생체 내에서 전파된 세포만이 이전에 사용되었기 때문에 배양된 VX2 세포의 사용에 대한 연구는 보고되지 않았다. 본 명세서에서, VX2 자궁내막암 모델의 확립을 위한 표준화된 수술 방법 및 수술 후 모니터링 방법을 제시하고 이 모델을 생성하기 위해 배양된 VX2 세포의 첫 번째 사용에 대해 보고한다.
서론
자궁내막암, 즉 자궁내막암은 전 세계적으로 두 번째로 흔한 부인과 악성종양이며 선진국에서 가장 흔한악성종양입니다 1. 자궁내막암발생률은 2005년부터 2013년까지 매년 2.3% 증가하여 사망률1,2,3의사망률이 2.2% 증가하는 등 꾸준히 증가하고 있다. 림프절 전이의 진단은 양성 림프절의 존재가 생존4,5,6,7의 강한 부정적인 예측변수이기 때문에 가장 중요하며, 보조 요법8,9,10,11,12,13. 림....
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프로토콜
깊은 복벽 폐쇄: 복막 절개의 정점을 확인하고 조직 집게로 복막, 직장 근육 및 근막을 파악합니다. 모든 동물 연구는 대학 보건 네트워크의 동물 자원 센터 (ARC) 승인 된 시설에서 및 승인 된 동물 사용 및 관리 프로토콜 (AUP #3994 / #4299)에 따라 수행되었습니다. VX2 세포주 대학 건강 네트워크에 박사 Aken의 실험실에서 얻은.
1. 체외 VX2 세포주 생성
- 토끼 사두근 근육과 마우스 측면의 성장에서 VX2 종양을 수확.
- 냉동 VX2 종양 블록(1 cm x 1 cm)을 해동하고, 메스 블레이드를 사용하여 배양 플레이트상에서 다진 70 μm 필터를 통해 소량의 행크스 균형 염액(HBSS)을 순차적으로 첨가하여 모든 세포가 최종 부피에 대해 1 mL의 변형되도록 한다.
- 세포를 카운트하고 0.9% 인산완충 식염수로 희석하여 1 x10 7/mL의 농도로 희석하고 멸균 튜브에 얼음위에 놓습니다.
참고: 종양 블록은 토끼 사두근 근육에서 VX2 종양의 이전 전파로부터 실험실 협력자로부터 수득되었다. - 2-5% 흡입 된 이소플루란으로 여성 흰색 뉴질랜드 토끼 (무게 2.5-3.5 kg)를 마취시키고 주사 부위 위에있는 모피를 제거하고 포비....
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결과
28 마리의 토끼가 자궁내막암 모델의 생성에 사용되었다. 토끼는 실험 당시 평균 체중이 2.83 kg (2.71-3.58 kg)이었다. 자궁 종양은 75%의 전반적인 모형 성공률을 위해 21개의 토끼에서 성공적으로 성장했습니다. 프로토콜에 자궁 봉합을 포함하기 전에, 성공률은 자궁 봉합 후 81 %에 비해 57 %였다. 자궁 봉합은 초기 낮은 모델 성공률에 응하여7th 토끼 후 프로토콜에 첨가되었다. 배양된 VX2 세포(8마리토끼, 63%의 성공률)와 16개의 토끼 모델에서 5개의 모델이 생성되었으며, 16개의 토끼 모델은 생체 내 전파 세포로부터 생성되었다(22, 73% 성공률). 생체 내 VX2 세포로부터 생성된 모델에서, 자궁경적 1회당 5 x 106의 세포 투여량을 모든 동물에서 사용하였고, 접종으로부터 실험까지의 평균 일수는 29일(범위 24-31)이었다. 배양된 VX2 세포로부터 생성된 모델에서, 에스컬레이션 용량 프로토.......
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토론
본 명세서에서, 우리는 VX2 자궁내막암 모델의 확립을 위한 표준화된 수술 방법을 보고하고 이 모델을 생성하기 위해 배양된 VX2 세포의 첫 번째 사용에 대해 보고하였다. 75%의 종양 복용율은 문헌35,37,53,56에이전에 보고된 100% 비율보다 낮다; 그러나 병리학적으로 확인 된 림프절 전이의 thw 90 % 비율은이 모델35,53의이전 연구와 일치합니다.
자궁 봉제의 포함은 모형 성공률을 57%에서 81%로 현저하게 증가시켰고 우리는 이 단계를 외과 프로토콜의 필수적인 부분으로 간주합니다. 자궁 봉합은 양측 자궁 동맥 결찰에서 자궁 뿔 탈동.......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없다.
감사의 글
이 연구는 테리 폭스 연구소에 의해 투자되었다 (PPG # 1075), 건강 연구의 캐나다 연구소 (재단 보조금 #154326), 캐나다 암 학회 연구소 (704718), 캐나다의 자연 과학 및 공학 연구위원회, 혁신과 공주 마가렛 암 재단에 대한 Сanada 재단.
초기 VX2 모델과 냉동 VX2 종양 블록의 설립을 위한 초기 VX2 세포를 제공한 마거리트 아켄스 박사에게 감사드립니다. 초기 VX2 세포 배양 실험을 수행하고 VX2 세포 배양을 돕는 Lili Ding을 도와준 마르코 디그라파에게 감사드립니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
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참고문헌
- Ferlay, J., et al. Cancer incidence and mortality worldwide: Sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. International Journal of Cancer. 136, E359-E386 (2015).
- Canada, S. Canadian Cancer Statistics Special topic: Pancreatic canc....
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