직교 쥐 신장 이식: 새롭고 단순화 된 외과 접근

요약

이 원고와 프로토콜의 목적은 쥐에서 직교 신장 이식의 외과 수술을 상세히 설명 하 고 입증 하는 것입니다. 이 방법은 기증자 신장의 정확한 관류를 달성 하 고 정 맥 및 요 추 팔목 문 합 기술을 사용 하 여 재 관류 시간을 단축 하기 위해 단순화 된다.

초록

신장 이식 향상 된 생존 율을 제공 하 고 최종 단계 신장 질환 환자에 대 한 삶의 질 향상, 모든 종류의 신장 대체 요법에 비해. 지난 몇 십년 동안, 쥐 신장 이식 모델은 거부와 관용의 면 역학적 현상을 연구 하는 데 사용 되었습니다. 이 모델은 고가의 전 임상 큰 동물 연구를 진행 하기 전에 새로운 면역 조절 제약 및 식이요법을 테스트 하는 필수 불가결 한 도구가 되고있다.

이 프로토콜은 쥐에서 직교 신장이 식을 안정적으로 수행 하는 방법에 대 한 자세한 개요를 제공 합니다. 이 프로토콜은 성공 확률을 증가 시키는 세 가지 독특한 단계를 포함 합니다: 포털 정 맥을 통해 홍 조에 의해 기증자 신장의 관류와 신장 정 맥과 요 관을 낙 소 하는 커 프 시스템의 사용, 추위와 따뜻한 감소 허 혈 시간. 이 기술을 사용 하 여, 우리는 syn유전학 또는 관대 한 신장이 식을 가진 동물에 있는 일반적인 혈 청 크 레 아 티 닌을 가진 6 달 저쪽에 생존 율을 달성 했습니다. 연구의 목적에 따라,이 모델은 급성, 만성, 세포 또는 항 체 중재 거부를 연구 하기 위해 이식 전 또는 후 처리에 의해 변형 될 수 있다. 이는 신장 이식의 다양 한 측면을 연구 하기 위해 재현 가능 하 고 신뢰할 수 있으며 비용 효율적인 동물 모델입니다.

서론

역사적으로, 첫번째 이식 거절 연구 결과는 설치류¹에 있는 피부이 식을 사용 하 여 브렌 트와 Medawar에 의해 수행 되었다. 피부가 뚜렷한 면 역학적 특징을가지고 있다는 것이 분명 하 게 되었고,이는 다른 혈관 화 된 고체 기관에서 거부 되는 것과다른 높은 면역 원 성 기관을 만들기 때문입니다. 고체 장기 이식 거부의 쥐 연구는 심장에 제한, 간, 그리고 신장 이식. 이러한 각 기관은 거부를 연구 하는 데 적합 하지만, 각각의 장점과 단점이 있습니다. 심장 이식 종종 복 부에 이식 하 고 대동맥과 대 정 맥에 문 지, 자리에 받는 사람의 기본 마음으로³. 이것은 인간의 임상, 해부학 적, 생리 적 상태를 재현 하지 않습니다. 또한, 마음은 차가운 허 혈에 매우 민감 하 고 그들의 기능을 복구 할 수 있도록 하기 위해 1 시간 내에 우선적으로 사용 되는 재 관류 해야⁴. 간이 식은 일반적으로 외과로 더 도전적이 고 시간에 민감한 수행 하기 위하여 여겨집니다. 네이티브 간을 제거한 후, 기증자 간 이식 하 고 30 분 이내에 사용 되는 받는 사람으로 작동 하지 않고 더 이상 지속 될 수 없습니다

프로토콜

루이스 (RT1¹)와 검은 쥐 티 (RT1A) 랫 트는 상업 상인 들에^게서 구입 하였다 ( 재료 표참조). 이러한 완전 한 MHC 불일치 균 주는 종종 급성 신장 동종 거부를 연구 하는 데 사용 됩니다. 모든 동물은 존스 홉킨스 대학의 특정 병원 체 무료 시설에서 건강 (NIH) 지침의 국립 연구소에 따라 보관 및 유지 되었다. 모든 절차는 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았다.

1. 기부자 절차

1. 소독의 수단으로이 절차에 사용 되는 모든 수술 도구를 준비 하 고 오토 클레이 브 및 감염 합병증을 방지 하기 위해 일회용 멸 균 장갑을 사용 합니다.
2. 이 소에이 소를 흡입 하 여 기증자 쥐를 마 취 (3%에서 유도-4% 및 유지 보수 1%-2%) 절차의 나머지 부분에 대 한. 모든 기증자 및 수령인에 게 동물을 제공 하십시오. 진통에 대 한 몸 무게 0.1 밀리 그램/kg에서 선취 권 부 프레 노르 핀 피하.
3. 이제 쥐를 부정사 위치에 놓고 멸 균 마스킹 테이프로 팔 다리를 움직이지 않습니다.
4. 복 부 영역에서 머리를 제거 하는 기계식 클리퍼를 사용 합니다.
   1. 눈 윤활제를 바르고 포 비 돈....

결과

신 유전학 (n=5) 과 동종 신장 이식 (n=5)을 수행 하였다 . 신 유전학 이식이 있는 동물은 면역 억제제 치료 없이 장기간 생존을 달성 하였다. 면역 억제 없이 동종이 식을 받은 동물은 이식 편을 거절 하 고 8 일의 중앙값 생존을 통해 신부전에 굴복 하였다 (도 4a). 합성 군에서 정숙 하 게 증가 된 혈 청 크 레 아 티 닌은 동종 군에서 14 배로 증가 시키면서 0.5 mg/dl 대 7.0 mg/dl, 피 < 0.01) 이다. Explantation 시, 신 유전학 신장 이식의 거시적 관점은 어떤 이상을 보여주지 않았다. 신장 색상과 내부 구조는 그대로 유지. 반대로, 거부 된 동물의 신장 알로이 저는 내부 구조의 파괴와 함께 적색 출혈 패치를 제시 했습니다 (

토론

이 원고에서, 우리는이 절차를 수행 하는 데 필요한 모든 장비를 포함 하 여 구체적으로 래 트의 직교 KT에 대 한 외과 수술 방법을 설명 합니다 (그림 5). 1965에서 피셔와 리는 쥐의 KT에 대 한 첫 번째 보고서를 출판 하였으며,이는 흥미로운 조사 분야¹⁸의 시작이 되었다. 이후,이 모델의 재현성을 향상 시키기 위해 많은 변형이 도입 되었습니다. 그것은 허 혈 재 관류 손상 및 신장 이식 거부 및 관용을 연구 하기 위한 효과적인 동물 모델로 서, 부분적이 고 완전 한 MHC 불일치 조합으로 여러 근 친 및 교배 균 주의 가용성 덕분에¹⁹. Rat KT 모델은 돼지에 대 한 조사를 연장 하기 전에, 그리고 KT의 비 인간 영장류 모델에 대 한 가설을 시험 하기 위한 도구로 서의 역할을 할 수 있습니다. 신장 이식 거부 또는 설치류 내성 연구에 대 한 옵션은 제한적입니다. 마우스에서 신.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Buprenorphine HCL	Reckitt Benckiser Healthcare UK	NDC12496-0757-5
절개 펜치, 곡선	젠방, 중국		11cm 플랫 핸들
헤파린 나트륨 주입 USP	Sagent 제약	NDC25021-400-10
마이크로 집게, 직선, 부드러운	Jingzhong, 중국	WA3010
마이크로 바늘 홀더	Jingzhong, 중국	WA2010
마이크로 용기 클램프	Jingzhong, 중국	WA40120
마이크로 스프링 가위 1	ROBOZ	RS-5620
마이크로 스프링 가위 2	FST	91501-09
마이크로 스프링 가위 3	Zhenbang, 중국		8.5cm Vannas, 곡선
Prograf (Tacrolimus / FK506)	Astellas
Rats	Charles River & 타코닉 바이오사이언스	LEW/CRL 및 다-엠
면도기	Wahl	79600-2101
봉합사 4-0	Ethicon	J304H
봉합사, 4-0	Ethicon	683G
봉합사, 10-0	Ethicon	2820G
주사기 및 바늘	BD
스레드, 8-0	Ashaway	75290
요관 커프	Microlumen	160-1	폴리이미드 튜빙, 지름 0.41 mm
정맥 커프	Intramedic BD	7441	PE-200 비방사선 불투과성 폴리에틸렌 튜브 ID: 1.4mm, OD: 1.9mm

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