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방법 논문

마우스 종아리에 일관된 마사지와 같은 섭동을 적용하고 근육 내 압력 변화를 모니터링

4.9K 조회수

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DOI:

10.3791/59475

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2019년 9월 20일

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* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

여기에서는 마우스 종아리에 정의된 기계적 하중을 적용하고 수반되는 근육 내 압력 변화를 모니터링하기 위한 프로토콜을 설명합니다. 우리가 개발 한 실험 시스템은 운동과 마사지의 유익한 효과 뒤에 메커니즘을 조사하는 데 유용 할 수 있습니다.

초록

마사지는 일반적으로 통증과 염증을 완화하는 데 도움이 되는 것으로 인식됩니다. 이전 연구는 골격 근육에 마사지의 항 염증 효과 보고 하지만, 뒤에 분자 메커니즘은 제대로 이해. 우리는 최근에 다양한 진폭을 가진 근위내 압력파를 생성할 수 있는 국부적인 주기적 압축 (LCC)를 적용하는 간단한 장치를 개발했습니다. 이 장치를 사용하여, 우리는 LCC가 대식세포의 염증 반응을 계조시키고 고정으로 인한 근육 위축을 완화한다는 것을 입증했습니다. 여기에서는, 우리는 마우스 뒷다리의 골격 근육의 고정화 유도한 염증 그리고 위축에 대하여 마사지 같이 내정간섭으로 LCC의 최적화 그리고 적용을 위한 프로토콜을 기술합니다. 우리가 개발 한 프로토콜은 운동과 마사지의 근본적인 유익한 효과를 조사하는 데 유용 할 수 있습니다. 우리의 실험 시스템은 근육 항상성의 기계적 조절을 해명하기 위한 분석 접근법의 프로토타입을 제공하지만, 더 포괄적인 연구를 위해 추가 개발이 이루어져야 합니다.

서론

마사지는 일반적으로 통증 완화와 경쟁 선수와 비 운동 선수 모두 모두 신체 성능의 개선에 도움이 될 것으로 인식1,2. 사실, 이전 연구는 마사지가 국소 염증을 억제하는 것으로 나타났습니다3 운동 후 근육 손상에서 회복을 자극4,5. 마사지의 유익한 효과의 근간이 되는 분자 메커니즘은 크게 알려지지 않았습니다.

마사지에 대한 기계적 조사의 어려움 중 하나는 마사지와 같은 중재를 테스트하는 실험 기술의 재현성과 관련이 있습니다. 이전 연구에서는, 마사지를 모방하는 실험 절차는 주로 손바닥과 손가락과 같은 실무자의 신체 부위를 사용하여 물리적 인 개입의 적용을 포함6,7,8. 따라서 크기, 빈도, 지속 시간 및 모드를 정확하게 재현하기가 어렵습니다.

많은 장치가 대상 조직에 정의된 ....

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프로토콜

모든 동물 실험은 국가 장애인 재활 센터의 기관 동물 관리 및 사용위원회의 승인하에 수행되었습니다.

1. 마우스 양측 뒷다리의 고정

참고: 남성 C57BL/6 마우스는 적어도 7일 동안 적응 후 11-12주 후에 실험에 사용하였다.

  1. 나트륨 펜토바르비탈 (50 mg /kg i.p.)을 사용하여 마우스를 적절하게 마취하십시오. 쥐가 뒷다리 발가락 핀치에 반응하지 않도록 하십시오.
    참고: 오전 10시부터 오후 7시 사이에 고정 절차를 수행하여 마우스의 먹이 활동에 미치는 영향을 최소화하십시오.
  2. 무릎 관절이 연장되고 발목 관절이 발바닥이 구부러진 척추 위치에 놓인 마우스의 양측 뒷다리에 수술 테이프를 적용하십시오.
  3. L4-5 척추 레벨의 트렁크에 알루미늄 와이어(재료 표 참조)를 놓고 나선형 층의각 회전 사이에 5mm 간격으로 뒷다리 주위의 나선형 구성으로 와이어를 코일합니다(그림1A). 와이어를 너무 단단히 코일하지 말고 국부적인 혈류를 방해하지 않도록하십시오.
  4. 배선에서 탈출할 가능성을 최소화하기 위해 알루미늄 와이어의 구성을 수동으로 조정하....

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결과

우리의 이전 관찰과 일치12,위장혈성 myofibers의 CSA는 뒷다리 고정에 의해 현저하게 감소되었다(그림 2A, B). 또한, 우리의 면역 형광 염색 분석은 MCP-1과 TNF-α를 발현하는 세포가 염증 과정 조절에 중요한 역할을한다는 것을 밝혀13,14,위암혈성 근육에서 크게 증가 고정 된 뒷다리의 조직 (MCP-1 : 그림 2C, F, H; TNF-α: 그림 2D, G,I). F4/80으로 긍정적으로 염색된 세포의 증가와 함께, 대식세포에 대한마커(그림 2C-.......

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토론

우리는 항 염증 효과가있는 마사지와 같은 기계적 자극을 적용하는 방법을 설명했습니다. 우리의 시스템은 이전에보고 된 것과 비교할 때에도 다음과 같은 장점이 있습니다. 먼저, 이전 연구는 적용된 기계적 힘을 정량적으로 정의하지 않았거나2를 적용하거나 체표면에서의 측정에 기초하여 그들의 크기를 정의하되, 조직내부(10)는정의하지 않았다. 대조적으로, 우리는 혈압 텔레미터를 사용하여 근육 내 압력을 측정했습니다. 둘째, 우리 장치의 간단한 구조(그림 1B)는우리가 상대적으로 저렴한 비용으로 높은 일관성과 재현성(그림 3A)으로시스템을 구성 할 수있었습니다. 셋째, 우리의 개입 (LCC)은 근육 내 압력 변화와 관련하여 신체 활동 (가벼운 근육 수축)에 관한 것입니다 (50 mmHg15). 우리의 접근은.......

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공개 사항

저자는 원고와 관련된 경쟁적인 이해관계가 없다고 선언합니다.

감사의 글

나카니시 K. 하마모토, 구메, K. 츠루미 가 프로젝트 전반에 걸쳐 꾸준히 지원해 주신 것에 감사드립니다. 이 작품은 일본 후생노동성의 교내 연구 기금에 의해 부분적으로 지원되었습니다. 일본과학진흥학회과학연구지원부 2015-2019년도 일본 문부과학성(S1511017)의 사립대학 전략연구재단 MEXT 지원 프로그램.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
알루미늄 와이어DAISO JAPANB028알루미늄 와이어는 와이어에 의한 제한을 피하기 위해 사용됩니다
혈압 원격 측정기MillarSPR-671혈압 측정기는 근육 내압을 측정하는 데 사용됩니다.
DAPIThermo Fisher ScientificD1306DAPI는 형광 현미경 검사용 DNA를 염색하는 데 일반적으로 사용되는 형광 프로브입니다.
Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488 (Dilution ratio, 1:500)Invitrogen A11034면역조직화학 염색을 위한 항체.
Goat anti-rat Alexa Fluor 568 (Dilution ratio, 1:500))면역조직화학 염색을 위한Invitrogen A11077
ImageJNIHN/A
LabChart8AD용 생체 신호 획득을 위한 분석 소프트웨어.
Prolong goldThermo Fisher ScientificP36930Prolong gold는 염색된 시료를 장착하기 위한 것입니다.
단백질 블록 무혈청DakoX090930-2면역조직화학 절차에서 비특이적 배경 염색을 차단합니다.
Rat monoclonal anti-laminin-2 항체 (희석 비율, 1:1000)Sigma AldrichL0663면역조직화학 염색을 위한 항체.
Rat monoclonal anti-F4/80 항체 (Dilution ratio, 1:500)Abcamab6640면역조직화학 염색용 항체.
Rabbit polyclonal anti-MCP-1 항체 (Dilution ratio, 1:1000)Abcamab25124면역조직화학 염색용 항체.
토끼 다클론 항-TNF-&알파; 항체 (Dilution ratio, 1:1000)Abcamab66579면역조직화학 염색을 위한 항체.
수술용 테이프3M Japan1530EP-0수술용 테이프는 관절의 움직임을 제한하는 데 사용됩니다.
항체. 이미지 분석 소프트웨어

참고문헌

  1. Furlan, A. D., Imamura, M., Dryden, T., Irvin, E. Massage for low back pain: an updated systematic review within the framework of the Cochrane Back Review Group. Spine. 34 (16), 1669-1684 (2009).
  2. Robertson, A., Watt, J. M., Galloway, S. D. R.

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재인쇄 및 허가

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