방법 논문

과일 파리, 초파리 melanogaster에 비보 먹어서 분석 결과 사용 하 여의 세포 면역 반응 평가

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⸱

DOI:

10.3791/59543

⸱

2019년 4월 10일

 , 
1Department of Biology, University of Maryland, 2Department of Cell Biology and Molecular Genetics, University of Maryland, 3Institute for Bioscience and Biotechnology Research, University of Maryland

이 논문에서

요약

이 프로토콜에서는 성인 초파리 melanogaster 식 인식 및 미생물 감염의 계량에서 vivo에서 먹어서 분석 결과를 설명 합니다.

초록

모든 동물에서 타고 난 면제는 광범위 한 병원 균에 대 한 즉각적이 고 강력한 방어를 제공합니다. 체액과 세포 면역 응답은 타고 난 면제의 주요 지점 그리고 이러한 응답을 조절 하는 요인의 많은 무척 추 동물과 포유류 사이 보존 진화론은. 식 균 작용, 세포 타고 난 면제의 중심 구성 요소 특수 혈액 세포의 면역 시스템에 의해 수행 됩니다. 과일 파리, 초파리 melanogaster, 분자 메커니즘 먹어서 전체 동물에서의 생리 적 영향을 조사 하는 강력한 유전자 모델로 떠오르고 있다. 여기 우리 초파리 혈액 세포, hemocytes에 의해 입자 통풍 관 그리고 파괴를 계량을 vivo에서 먹어서 주입 기반 분석 결과를 보여 줍니다. 절차 수 연구원은 정확 하 게 제어할 입자 농도 복용량, 시간의 짧은 시간에 높은 재현성 결과 얻을 수 있습니다. 실험은 양적, 수행, 쉽게 그 영향 병원 체 인식, 이해, 및 허가 호스트 요소에 대 한 화면에 적용할 수 있습니다.

서론

타고 난 면역 방어는 병원 성 미생물에 대 한 방어의 첫 번째 줄을 형성 한다. 이러한 응답 기능 둘 다 생식 인코딩 패턴 인식 수용 체 (호흡기) 병원 체 관련 된 분자 패턴 (PAMPs)1감각에 의해 중재는 체액과 세포 타고 난 면역으로 나눌 수 있습니다. 신호 통로의 많은 및 타고 난 면제의 effector 메커니즘 포유류에는 선 충 류, 꼬마 선 충, 과일 파리, 초파리 melanogaster2같은 무척 추 동물 보존 됩니다. 과일 파리 감염 미생물3에 대 한 호스트 방어를 공부 하는 강력한 시스템으로 떠오르고 있다. 초파리 유전자 온순한 쉽고 저렴 하 게 실험실에 reared 이며 짧은 생성 시간을 보내고 있다. 또한, 과일 파리는 다양 한 세균, 바이러스, 세균, 곰 팡이, 또는 기생 하는 병원 체에 대 한 호스트의 시험 사용에 대 한 매우 효율적인 방어를 전시 한다.

초파리 immunologists 앞으로 유전 스크린, 게놈 넓은 중재 하는 RNA 간섭 (RNAi) 곤충 세포 라인의 검사 및 검사에 지도 하는 타고 난 면제-돌연변이 비행 긴장 기존 활용 역사적으로 식별 및 여러 진화론 보존된 체액 면역 경로4,5,6,,78의 특성 체액의 타고 난 면역 반응, 틀림 없이, 최고의 특징 과일 파리에 면역성이 있는 방위. 감염, 다음 체액 반응 리드 생산 및 항균 펩타이드의 조직 릴리스 (AMP) 분자 hemolymph, 곤충에 해당 혈액으로. 앰프는 매우 보존된 수신자와 Imd 신호 통로 의해 생산 됩니다. 수신자 통로 포유 동물에 동종 TLR/IL-1R 수용 체 신호 전달, 그리고 Imd 통로 포유류 종양 괴 사 인자-알파 신호 동종. 초파리, 통행세에 있는 그람 양성 박테리아, 곰 팡이, 그리고 초파리 X 루의6,,910 에 의해 유도 된다 신호 및 그램 음성 박테리아11에 의해 유도 된다 Imd 신호 ,12.

캡슐화, melanization, 및 침략 병원 균의 식 균 작용의 구성 세포 면역, hemocytes13라는 특수 혈액 세포에 의해 수행. 과일 파리에서 hemocytes의 3 개의 종류가 있다: 크리스탈 셀, lamellocytes, 및 plasmatocytes13. 크리스탈 셀, 애벌레에서 순환 hemocytes의 5%를 구성 하는 병원 체와 상처 사이트에 호스트 조직의 melanization에 지도 하는 proPhenoloxidase (proPO) 효소를 놓습니다. 일반적으로에 없는 건강 한 태아 또는 애벌레, Lamellocytes는 외국 개체를 캡슐화 하는 부착 세포 이다. 이러한 셀 pupariation 또는 parasitizing 말 벌 계란은 애벌레에 예금 될 때 유발 됩니다. Phagocytic plasmatocytes, 애벌레에서 hemocytes 및 모든 나머지 hemocytes 성인 순환의 95%를 구성 하는 조직 개발 중 개장에 역할 그리고, 특히, 초파리 세포 면역의 주요 효과 기 세포로 될.

먹어서 타고 난 면역성이 있는 방위;의 즉각적이 고 중요 한 선 호스트 상피 방 벽을 위반 하는 미생물에 휩 싸이 빠르고 phagocytic 혈액 세포에 의해 제거 (식 균 작용의 세포 생물학의 종합적인 검토에 대 한 참조 14참조). 이 프로세스는 생식 인코딩 패턴 인식 수용 체 (호흡기) hemocytes 인식 병원 체 관련 된 분자 패턴 (PAMPs) 미생물의 때 시작 됩니다. 한 번 그들의 목표에 바인딩된, 호흡기 말라 골격 개장을 통해 pseudopods의 형성으로 이어질 신호 폭포를 시작 합니다. pseudopods 잠겼습니다 이후 이며 초기 세포 기관이, 있는 phagosome로 내 면 미생물을 둘러싸고 있습니다. 미생물은 phagosome는 hemocyte의 내부로 매매 하 고 일련 리소좀과 상호 작용의 산성화는 phagosome phagosome 성숙의 과정을 겪 습으로 파괴 된다. 시험관에 세포 생물학 연구 포유류 1 차 셀에 식별 및 포유류 Fc 감마 수용 체 등 C3b 수용 체15,16먹어서 조절 요인에 되었습니다. 그럼에도 불구 하 고, 대형 스크린 또는 vivo에서 학문을 실행 하는 능력은 포유류 시스템에서 제한 된다.

여기 우리는 200017에 데이비드 슈나이더의 연구소에 의해 처음 도입 절차를 기반으로 성인 초파리에 있는 식 균 작용에 대 한 vivo에서 분석 결과 제시. 슈나이더 연구소 무 hemocytes 쉽게 복 부 등 혈관을 따라 클러스터링 phagocytose 폴리스 티 렌 구슬 및 박테리아를 보여주었다. 먹어서 시각화, 파리 붙일 레이블된 입자 (와 같은 E. 콜라이 fluorescein isothiocyanate (대장균-FITC)으로 표시), 주사는 hemocytes 시간을 입자를 삼 켜 수 있도록 30 분 동안 incubated 그리고 인큐베이션 기간 동안 하지 phagocytosed 입자의 형광 냉각 trypan 파랑, 함께 주입. 비행 등 혈관은 다음 거꾸로 형광 현미경을 사용 하 여 몇 군데. 이 정액 종이, 라텍스 구슬, 파리 hemocytes phagocytose 박테리아 하 고 라텍스 구슬, 그 세균 먹어서 미리 주입 하 여 저해 수 있는 상대적으로 간단한 실험을 사용 하 고는 세포와 체액 없이 면역 응답도 대장균을 따르게 됩니다. Vivo에서 먹어서 등 선박 관련 된 hemocytes에 의해 잠겼습니다 하는 입자의 형광 강도 측정 하 여 계량 슈나이더 연구소의 작품을 바탕으로이 보고서에서 제시 하는 분석 결과.

포유류 시스템에 접근 방식과 마찬가지로, 초파리 유전학 처음 사용 게놈 넓은 생체 외에서 RNAi 스크린 휴대 면역 응답18,19,20에 필요한 유전자를 식별 하 ,21,,2223. 그러나, 성인 vivo에서 먹어서 분석 결과의 개발 활성화 후속 실험 체 외 연구에서 식별 된 요소의 역할 연구원 생물 학적 확인 되므로 전체 동물에 쉽게 실시 하. 막 횡단 수용 체 공룡, s 2를 사용 하는 RNAi 스크린에 세균성 수용 체 세포가24 로 처음 확인 되었고 나중 대장균 (대장균), Enterococcus 중재에 표시 된 경우 있 었 어 요 faecalis, 및 성인25에 황색 포도상구균 (S. 구 균) 먹어서.

우리의 실험실 성인 hemocytes에 식 균 작용을 조절 하는 새로운 유전자를 식별 하기 위해 앞으로 유전 스크린 및 게놈 넓은 협회 연구 ( 초파리 유전자 참조 패널 (DGRP)를 사용 하 여)에서 vivo에서 먹어서 분석 결과 고용. 이러한 연구 수용 체 PGRP-SC1A 및 PGRP SA26, 단백질 Rab1427, 글루타민 산 염 운송업 자 Polyphemus28와 RNA 의무적인 단백질 폭스-129밀매 세포내 소포 특성에 지도 했다.

우리는 미래의 화면 통합 vivo에서 먹어서 추가 유전자 초파리의 세포 면역 반응에 대 한 중요 한 식별 이어질 수 예상. 화면 완전히 시퀀싱 타고 난된, 등 라인은 DGRP 또는 초파리 합성 인구 자원 (DSPR)를 사용 하 여 식 균 작용 또는 hemocyte 개발에 영향을 미치는 자연 변종 식별할 수 있습니다. 기술은 수 초파리 의 다른 종에 채택 또는 유지로 국가 초파리 종 사진 센터 (NDSSC 250 초파리 종 컬렉션이 화면 새로운 커뮤니티 리소스를 하는 데 사용 하는 또한, ) 코넬에서. 이러한 실험 실시 될 수 있습니다. 붙일 표시 된 세균 이나 곰 팡이 벽 bioparticles 상업적으로 사용할 수 있는 사용 하 여 또는 어떤 수 종의 세균 이나 곰 팡이-는 미생물 형광 마커 표현 제공를 사용 하 여 수행할 수 있습니다. .

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프로토콜

1. 주입 Fluorescein 입자 준비

  1. 상용, 열 살해 박테리아의 10 밀리 그램을 다시 구성 입자 fluorescein 표시 ( 재료의 표참조) 추가 하 여 990 µ L 살 균 1 x PBS 그리고 10 µ L 50 m m 나트륨 아 지 드 10 mg/mL의 농도 재고를. 소용돌이를 섞어입니다.
    1. 단일 사용 8 µ L aliquots 0.2 mL 튜브에로 분할 하 고 빛이 관련 된 감도 최소화 하기 위해 4 ° C에서 어두운 상자에서 저장.
      참고: 나트륨 아 지 드 방부 제는 선택 사항이 며 10 mg/mL 주식 1 mL 균 1 x PBS, 만들어진 경우 생략할 수 있습니다 aliquoted, 및-20 ° c.에 저장
  2. 5% 식품 500 µ L 주사기 필터링 녹색 식품 색소와 9.5 mL 살 균 1 x PBS를 혼합 하 여 1 x PBS에 색소의 10 mL 솔루션을 확인 합니다.
  3. 나트륨 아 지 드를 제거 하는 주사 하기 전에 입자를 씻어. PBS와 1.7 mL 튜브에 10 mg/mL의 8 µ L x 믹스 42 µ L 살 균 1. 실 온에서 2.5 분에 대 한 최대 속도로 원심.
    1. 제거는 상쾌한, 실 온에서 2.5 분에 대 한 최대 속도 50 µ L 1 x PBS, 및 원심 분리기를 추가 합니다.
    2. 1.3, 1.3.1 단계를 반복 하 여 총 3 세척 2 x.
    3. 최종 세척 후는 상쾌한 삭제 하 고 다시 5% 식용 1 x PBS에 색소의 50 µ L에서 1.6 mg/mL에 입자를 일시 중단 합니다.
    4. 튜브 빛 으로부터 보호 하기 위해 알루미늄 호 일에 싸서. 4 ° C에서 저장, 1 주 후 삭제.

2. 주입 역 및 파리 준비

  1. 사출 패드를 준비 합니다. 최대 삽입 직사각형 CO2 비행을 분할 사용 실험실 테이프 동시에 파리의 4 genotypes 4 섹션으로 패드. 현미경 근처 벤치에서 파리는 패드 (패드의 각 모서리에 대 한 하나)에 줄지어 되었습니다 일단 튜브를 배치 하는 영역을 지정 합니다.
  2. 튜브 나이 일치 하는, 4-7 일 준비-주입에 대 한 오래 된, 파리. 테스트를 각 스트레인에 대 한 5 남성과 5 여성 준비 비행 식품의 신선 하 고 레이블이 유리병으로 전송과 25 ° c.에 계속
  3. 공기 주입기를 준비 ( 재료의 표참조) 악기는 100 밀리초 (sub nanoliter 볼륨의 배달을 허용-액체를 추방 하기 위해 가스 압력의 짧은 파열) TIMED 모드로 설정 하 여.
  4. 현미경 슬라이드를 준비 합니다. 전기 테이프의 1.5 인치 스트립, 루프, 접착 면으로 접어 잘라내어 레이블이 현미경 슬라이드에 배치.

3. 유리 모 세관 바늘 준비

  1. 당겨 바늘 끌어당기는 사람을 사용 하 여 유리 바늘 (얇은 벽 유리 모 세관).
    1. 마이크로미터와 현미경 바늘을 잡고 고 #5 좋은 포인트 스테인리스 핀셋을 사용 하 여 팁. 100 µ m 팁 부상 최소화 하면서 파리의 표 피를 관통 하기 위하여 충분 하다.
    2. 각 비행에 투입 될 것입니다 액체의 양을 측정 합니다. 1 x PBS에 색칠 하는 살 균 5% 음식 바늘을 로드 하 고 0.01 m m 단계 마이크로미터에 미네랄 오일 한 방울에 액체를 추방.
      참고: 액체 작은 물방울 구형 이면 picoliters에서 볼륨 (크기)3/1910으로 계산 됩니다. 30 100 µ m 직경 바늘 ~ 2 꺼내지지 100 ms에 nL.

4. 주사 파리

  1. 1.6 mg/mL 입자 parafilm의 작은 광장에 10 µ L 플라스틱
    1. 바늘에 액체를 당겨 하 고 인젝터 노즐에서 탑재 ( 재료의 표참조).
    2. CO2 파리 anesthetize 하 고 flypad, 패드의 앞으로 동쪽으로 향하게 하는 머리와 복 부 쪽에 그들의 지정 된 지역에서 줄을. 벤치에 해당 지역에 튜브를 배치 합니다.
    3. 액체 (~ 10 nL 총)의 5, 100 ms 펌프와 복 부의 상단에 파리를 주사.
    4. 적절 한 튜브에 주입 된 파리를 전송, 유리병에 시간 참고. 25 ° c.에 계속
  2. 새로운 바늘 0.4%와 함께 로드 Trypan 블루 솔루션.
  3. 공 압 인젝터 제어, 바늘에서 액체를 밀어 공기의 지속적인 흐름을 수 있는 설정 합니다.
  4. 그들은 30 분 동안 휴식을 후 파리를 anesthetize 하 고 때까지 복 부 가득 부풀어 Trypan 파랑 주사.
    참고: 때 입자는 pH에 민감한 염료와 표시 phagosome 성숙 검사, 파리 1 시간 동안 휴식을 허용 하 고 trypan 블루 장착 파리 전에 주입 하지 마십시오.
  5. 전기 테이프, 아래로 복 부 측으로 현미경 슬라이드에 파리를 탑재 합니다. 테이프에 그들을 보호 하 고 비행의 측에 날개를 밀어. 또한, 부드럽게 즉시 이동 하지 것입니다 수 있도록 테이프에 머리를 밀어.
  6. 즉시 5 단계로 이동 합니다.

5. 영상 파리

  1. 이미지 하나, 25 x 또는 32 x 배율 ( 재료의 표참조)는 디지털 카메라와 컴퓨터에 연결 된 거꾸로 형광 현미경을 사용 하 여 한 번에 이동 합니다. 디지털 카메라에 대 한 컴퓨터 소프트웨어를 사용 하 여 비행의 등 쪽 혈관에 초점.
  2. 실험 사이 확대 및 노출 시간을 기록 합니다.
    참고: genotypes의 추적을 잃고 단일 앉아에 여러 종자를 촬영의 오류 때. 파리를 mislabeling를 방지 하려면 각 유전자 형에 대 한 첫 번째 및 마지막 비행 사진 이미지 수의 기록을 합니다.

6. 측정 하 고 형광을 정상화

  1. 소프트웨어를 열고 한 번에 하나의 이미지를 엽니다.
    1. 등의 형광 강도 측정 합니다. 등 선박 주위에 다각형을 그립니다. 측정값 을 선택 하 고 다각형 안에 형광 강도 기록.
    2. 배경 형광 강도 결정 합니다. 첫 번째 다각형을 복사 하 고 비행의 등 쪽 혈관에 인접 한 지역으로 이동. 측정 및 기록 형광 강도의 배경 영역을 선택 합니다.
    3. 표준화 배경 형광에 의해 지 배 형광:
      등 선박 ÷ 배경입니다.
    4. 평균 정규화 등 선박 긴장에서 모든 파리의 형광 강도 계산 합니다.
    5. 실험 2 번 더 반복 합니다.
    6. 사용 학생의 짝이 없는 t-3 실험에서 파리 제어 파리의 평균 상대 형광 강도 비교 하 고 테스트 하는 시험. 계산 하는 수식을 사용 하 여 효과 크기: 코헨의 d (M1-M2) ÷ SD풀링된, M1 은 유전자 1 형의 의미와 M2 는 유전자 2 형의 평균 = &
      SD 풀링된 =figure-protocol-1
      어디 SD1 유전자 1 형의 표준 편차 이며 SD2 유전자 2 형의 표준 편차입니다.

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결과

Vivo에서 먹어서 분석 결과 fluorescein 표시 된 입자를 사용 하 여의 회로도 그림 1A에 표시 됩니다. 파리 탑재 된 복 부 측 아래로 전기 테이프의 조각에 있으며 등 쪽 혈관이 있는 곳, 복 부의 첫번째 2 개의 세그먼트는 명확 하 게 보이는 (그림 1B). 실험적인 과실의 주요 소스는 주입 및 이미징 절차 (그림 1C)의 단계에서 발생 한다. 비행 조직 또는 입자 막힌 될 수 발생할 수 있습니다 같은 바늘을 사용 하 여 여러 파리를 삽입 ( 그림 1C에서 상단 왼쪽된 패널). Drosophila 자동-fluoresces GFP 빛 아래에서 때문에 막힌된 바늘으로 주입 하는 파리 희미하게 형광 하지만 분명, punctate 형광 ...

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토론

상용, 붙일 레이블 입자는 일반 (0.2 µ m 카복실산 수정 스피어)에 식 균 작용 또는 미생물 (붙일 레이블 열-화학적 살해 박테리아 또는 효 모)의 식 균 작용을 평가 하는 데 사용 됩니다. Phagosome 성숙 평가, 연구원은 입자는 phagolysosome에서 산 성 하에서 중립 pH 감소 때 fluoresces pH에 민감한 염료와 함께 표시를 선택할 수 있습니다. 또는, 먹어서, 병원 체 인식 및 이해의 초기 단계를 검사 하 연구원은 입자 내부와 세포 외부 형광 형광 태그로 표시를 선택 해야 합니다.

신중 하 게 통제 실험 조건 vivo에서 먹어서 분석 결과 재현할 수 있는 방식으로 수행 됩니다 있도록 열쇠입니다. 첫째, 초파리 실험에 사용 하는 파리 4-7 일의 범위 내에서 최적의 나이 일치 해야 하므로 세포 immunosenescence32, 겪 습. 둘째, 주사 사이 기간 일관 ...

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

저자는 vivo에서 먹어서 실험 수행 지원을 위한 닥터 베스 곤잘레스와 박사 Aprajita Garg을 감사 합니다. NSF UMD 사전 시드 부여 및 UMD NIH T32 훈련 보조금, 셀 및 분자 생물학 (CMB)과 호스트 병원 체 상호 작용 (HPI),이 작품을 자금.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
0.2&뮤; m Red Fluorescent Carboxylate Modified FluoSpheresInvitrogenF8810식세포의 일반적인 식세포 능력을 테스트하기 위한 형광 표지 라텍스 비드. (~580/~605nm) PBS에 1:20 희석액을 5% 염료로 주입합니다.
5430-10 PicoNozzle KitWorld Precision Instruments5430-101.0mm 피펫
용 홀더E. coli(K-12 균주) 생체 입자, Alexa Fluor 488 접합체InvitrogenE13231사멸 E. coli Alexa Fluor 488로 라벨링됨. 그람 음성 박테리아의 식세포 인식 및 흡수를 테스트하는 데 사용합니다. (~495/~519 nm)
E. coli (K-12 Strain) BioParticles, Alexa Fluor 594 conjugateInvitrogenE23370Alexa Fluor 594로 라벨링된 E. coli 사멸. 그람 음성 박테리아의 식세포 인식 및 흡수를 테스트하는 데 사용합니다. (~590/~617nm)
E. coli (K-12 Strain) BioParticles, Fluorescein conjugateInvitrogenE2861FITC(Fluorescein)로 표지된 E. coli 사멸. 그람 음성 박테리아의 식세포 인식 및 흡수를 테스트하는 데 사용합니다. (~494/~518nm)
E. coli (K-12 Strain) BioParticles, Texas Red conjugateInvitrogenE2863Killed E. coli Texas Red로 라벨링. 그람 음성 박테리아의 식세포 인식 및 흡수를 테스트하는 데 사용합니다. (~595/~615nm)
E. coli (K-12 Strain) BioParticles, Texas Red conjugateInvitrogenE2863Killed E. coli Texas Red로 라벨링. 그람 음성 박테리아의 식세포 인식 및 흡수를 테스트하는 데 사용합니다. (~595/~615nm)
바늘 피펫 풀러David Kopf Instruments모델 725
pHrodo Red E. coli BioParticles Phagocytosis 용 접합체InvitrogenP35361사멸 E. coli pHrodo Red로 라벨링. 그람 음성 박테리아의 식세포 재조정, 흡수 및 식체 성숙을 테스트하는 데 사용합니다. (~560/~585nm)입니다. Trypan Blue로 담금질할 필요가 없습니다.
pHrodo Red S. aureus BioParticles Conjugate for PhagocytosisInvitrogenA10010사멸 S. aureus pHrodo Red로 표지. 그람 양성 박테리아의 식세포 재조정, 흡수 및 식체 성숙을 테스트하는 데 사용합니다. (~560/~585nm)입니다. Trypan Blue로 담금질할 필요가 없습니다.
공압 PicoPump PV820World Precision InstrumentsSYS-PV820World Precision Instruments Pneumatic PicoPump PV820은 차압을 사용하여 주입 사이에 유리 바늘에 액체를 고정합니다. 사용자는 수동으로 가스 압력의 짧은 폭발을 제어하여 액체를 배출합니다. 나노리터 미만의 부피를 전달할 수 있습니다. 전달되는 액체의 양은 두 가지 주요 변수에 따라 다릅니다. 유리 바늘 개구부의 크기와 사출 압력이 가해지는 시간. 기기를 100ms로 설정 " 시간 초과" 모드.
S. aureus (단백질 A가 없는 목재 균주) 생체 입자, Alexa Fluor 488 접합체InvitrogenS23371Alexa Fluor 488로 표지된 S. aureus 사멸. 그람 양성 박테리아의 식세포 인식 및 흡수를 테스트하는 데 사용합니다. (~495/~519 nm)
S. aureus (단백질 A가 없는 목재 균주) 생체 입자, Alexa Fluor 594 conjugateInvitrogenS23372Alexa Fluor 594로 표지된 S. aureus 사멸. 그람 양성 박테리아의 식세포 인식 및 흡수를 테스트하는 데 사용합니다. (~590/~617nm)
S. aureus (단백질 A가 없는 목재 균주) 생체 입자, 플루오레세인 접합체InvitrogenE2851사멸 S. aureus FITC(플루오레세인)로 표지됨. 그람 양성 박테리아의 식세포 인식 및 흡수를 테스트하는 데 사용합니다. (~494/~518nm)
얇은 벽 유리 모세 혈관세계 정밀 기기TW100F-3주입 바늘. OD = 1.0mm
Trypan Blue Solution (0.4%)SigmaT8154Fluorescein, Alexa Fluor 또는 Texas Red 표지 입자의 세포 외 형광을 소멸시키는 데 사용됩니다.
ZEISS SteREO 현미경 (Discovery.V8)ZeissSteREO Discovery.V8이미징 플라이용 도립 형광 현미경. 디지털 카메라(예: AxioCam HC 카메라) 및 함께 제공되는 소프트웨어(예: AxioVision 4.7 소프트웨어)를 사용하여 사진을 촬영합니다.
Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) BioParticles, Alexa Fluor 488 conjugateInvitrogenZ23373Alexa Fluor 488로 라벨링된 사멸. 효모의 식세포 인식 및 흡수를 테스트하는 데 사용합니다. (~495/~519 nm)
Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) BioParticles, Alexa Fluor 594 conjugateInvitrogenZ23374Alexa Fluor 594로 라벨링 된 사멸. 효모의 식세포 인식 및 흡수를 테스트하는 데 사용합니다. (~590/~617nm)
Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) BioParticles, Fluorescein conjugateInvitrogenZ2841FITC (Fluorescein)로 표지 된 사멸. 효모의 식세포 인식 및 흡수를 테스트하는 데 사용합니다. (~494/~518nm)
Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae) BioParticles, Texas RedInvitrogenZ2843텍사스 레드로 라벨링된 사멸. 효모의 식세포 인식 및 흡수를 테스트하는 데 사용합니다. (~595/~615nm)

참고문헌

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