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방법 논문

마우스에서 우울증과 같은 행동을 유도하기위한 만성 고정 스트레스 프로토콜

22.4K 조회수

DOI:

10.3791/59546

2019년 5월 15일

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

이 문서는 억제기를 사용하여 만성 적으로 고정 된 마우스에서 우울과 같은 행동의 유도에 대한 단순화 되고 표준화 된 프로토콜을 제공합니다. 또한, 우울증의 유도를 확인하는 행동과 생리 적 기술이 설명된다.

초록

우울증은 아직 완전히 이해되지 는 않지만 다양한 원인 요인이 보고되었습니다. 최근에는 우울증의 유병률이 증가하고 있습니다. 그러나, 우울증에 대 한 치료 치료 또는 우울증에 대 한 연구는 부족. 따라서, 본 논문에서, 우리는 운동 제한에 의해 유도된 우울증의 마우스 모델을 제안한다. 만성 가벼운 스트레스 (CMS) 우울증 같은 행동을 유도 하는 잘 알려진 기술. 그러나, 그것은 다양 한 가벼운 스트레스의 조합으로 구성 된 복잡 한 절차를 필요. 대조적으로, 만성 고정 응력(CIS)은 일정 기간 동안 구속기를 사용하여 움직임을 제한함으로써 우울한 행동을 유도하는 구속 모델에서 수정된 쉽게 접근할 수 있는 만성 스트레스 모델이다. 우울증유사 거동을 평가하기 위해, 자당 선호도 시험(SPT), 꼬리 현탁액 시험(TST), 및 ELISA 분석기는 마커 코르티코스테론 수준을 측정하는 본 실험에서 결합된다. 기재된 프로토콜은 CIS의 유도 및 우울증의 유효성 검사를 위한 행동 및 생리적 요인의 변화에 대한 평가를 설명한다.

서론

주요 우울 장애 (MDD)는 전 세계적으로 정신 장애의 주요 원인이며, 예상보다 빠르게 증가하고 있는 발병률을 가지고 있습니다. 2001년에, 세계 보건 기구는 MDD가 2020년까지 세계에서 두 번째로 일반적인 질병이 될 것이라고 예측했습니다. 그러나, 그것은 이미 2013 1에서두 번째로 가장 일반적인 이었다 . 또한, 현재 항우울제는 지연효과성, 약물내성, 재발, 및 각종 부작용2,3등 많은 한계를 가지고 있다. 따라서 연구원은 더 효과적인 항우울제를 개발 해야 합니다. 그러나, MDD의 모호한 병리생리학은 새로운 항우울제의 발달에 장애물을 제시합니다.

장기적인 스트레스는 MDD의 주요 위험 요소입니다. 그것은 또한 MDD 병인학4,5와관련이 있는 시상 하부 뇌하수체 부신 (HPA) 축에 있는 역기능을 유도할 수 있습니다. 앞서 설명한 바와 같이, HPA 축은 코르티코스테론 수준을 6, ....

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프로토콜

모든 실험 프로토콜과 동물 관리는 경상대학교 동물연구위원회(GLA-100917-M0093)의 지침에 따라 수행되었다.

1. 재료

  1. 마우스
    1. 출생 후 주 7에서 22-24g의 무게C57BL/6 스트레인 배경의 남성을 사용하십시오. 실험 전 1주일 동안 번식실에서 습관화하십시오.
      참고: 모든 마우스는 실험실 동물 회사에서 구입했습니다.
    2. 집 마우스는 온도 제어 사육장 (22-24 °C) 12 시간 빛 / 어두운 주기 (6 : 00 A.M.에 조명)에서 일반 실험실 차우와 물 사용 가능한 광고 리비툼.
  2. 구속자
    1. 원통형, 투명, 아크릴 탱크 (높이 = 8.5 cm, 직경 = 2.5 cm)를 정사각형 받침대에 고정하여 억제하고 우울한 행동을 생성합니다 (그림1A). 이 실린더의 직경은 마우스가 앞뒤로 또는 뒤로 움직일 수 없도록 바디에 맞게 만들어졌습니다. 제자는 상업적으로 구입하거나 실험실에서 만들 수 있습니다.
  3. 테일 서스펜션 장치
    1. 반투명 아크릴로 만든 적당한 크기의 꼬리 서스펜션 상자를 사용합니다 (높이 = 30cm, 너비 = 20cm,....

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결과

대표적인 실험에서, 모든 데이터는 그룹당 6-8마리의 마우스로부터 획득하였다. 대표물질과 마우스를 제자내로 자발적으로 삽입하는 방법은 1에 도시되어 있다.

CIS 유도 후 행동 시험 및 혈액 샘플링을 수행하기 위해, 마우스는 도 2A에요약된 바와 같이 실험 절차를 실시하였다. 도 23에 도시된 바와 같이, CIS는 우울한 행동을 잘 유도하고 스트레스 마커 코르티코스테론을 방출한다. 또한, 이들 지수는 3에 나타낸 바와 같이 글루타민 보충제(마우스가 전체 실험 기간 동안 글루타민 보충제 식단을 150 mg/kg)로 회복시켰다.

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토론

MDD의 두뇌와 이질성의 복잡성은 조건을 완전히 재현하는 동물 모형을 만드는 것을 어렵게 만듭니다. 많은 연구자들은 안구토니아 (보람있는 자극에 대한 관심의 부족)와 절망이 동물 모델에서 진화적으로 보존되고 정량화 가능한 행동으로 간주되는 내시경 형 기반 접근법32를사용하여이 어려움을 극복했습니다. 이는 또한 우울증 환자에서 볼 수 있습니다33. 본 논문에서, 우리는 CIS가 Anhedonia와 절망을 유도하기에 충분한 방법을 제시했습니다, CIS와 MDD 사이 번역 관련성을 보여주는. 더욱이, 많은 연구는 CIS를 사용하여 우울한 행동을 유도하는 메커니즘을 확인하고 정상적인 행동을 회복 시킬수있는 항우울제를 평가하기 위해 9,19,20,30

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공개 사항

저자는 공개 할 것이 없다.

감사의 글

이 연구는 교육부(NRF-2015R1A5A5A2008833 및 NRF-2016R1D1D1D1A33934279)의 지원을 받아 국립과학연구재단(NRF)을 통해 지원되었다. 경상대학교 GNU-2016-02)

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
1ml 일회용 주사기성심 메디컬P000CFDO
밸런스A& D CompanyFX-2000i
볼 노즐양도 B& PJD-C-88
CCTV 카메라KOCOMKCB-381
코르티코스테론 ELISA 키트케이맨 화학
디지털 조도 측정기TES TES-1330A
Ethovision XT 7.1Noldus Information Technology
IsofluraneHANA PHARM CO., LTD.이프란 솔루션
마우스KoatechC57BL/6 스
트레인 레스트레이너대종기구 산업DJ-428
당(자당)대정7501-4400
소동물 이소플루란 마취 시스템Summit
아크릴 바TST 테스트를 위해 실험실에서 만든 장치
테일 서스펜션 박스장치는 실험실에서 만들어졌습니다
타이머일렉트로닉스 투모로우TL-2530
물병양도 B& PJD-C-79

참고문헌

  1. Ferrari, A. J., et al. Burden of Depressive Disorders by Country, Sex, Age, and Year: Findings from the Global Burden of Disease Study 2010. PLoS Medicine. 10 (11), (2013).
  2. Trivedi, M. H., et al.

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재인쇄 및 허가

태그

ELISA