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방법 논문

실험 연구를 위한 해양 펠라기 투니케이트 돌리오레타 게겐바우리 재배 (울자닌 1884)

12.5K 조회수

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DOI:

10.3791/59832

⸱

2019년 8월 9일

 ,  , 

이 논문에서

요약

돌리올리다 게겐바우리종을 포함한 돌리올리드는 전 세계적으로 생산적인 아대륙 선반 시스템에서 발견되는 생태학적 중요성의 작은 젤라틴 해양 동물플랑크톤이다. 이 섬세한 유기체를 배양하는 어려움은 그들의 조사를 제한합니다. 본 연구에서는 돌리올리야게겐바우리(doliolid Dolioletta gegenbauri)를수집, 사육 및 유지하기 위한 재배 접근법을 설명합니다.

초록

젤라틴 동물원 플랑크는 해양 생태계에서 중요한 역할을합니다. 그러나, 그들의 생리학을 조사 하는 것이 일반적으로 어렵다, 성장, fecundity, 그리고 영양 상호 작용 주로 방법론 적 도전으로 인해, 그들을 배양 하는 능력을 포함 하 여. 이것은 돌리올리드, 돌리올레타 게겐바우리에 특히 사실이다. D. gegenbauri 일반적으로 생산적인 아열대 대륙 선반 시스템에서 발생, 종종 매일 기본 생산의 큰 부분을 소비 할 수있는 꽃 농도에서. 이 연구에서는 실험실 기반 연구를 수행하기 위한 목적으로 D. 게겐바우리(Gegenbauri)를 수집, 사육 및 유지 관리하는 재배 방법을 설명합니다. D. 게겐바우리 및 기타 돌리올리드 종은 표류하는 선박으로부터 202 μm 메쉬 플랑크톤 그물을 비스듬히 견인하여 살아서 포획할 수 있다. 배양은 수온이 21 °C 이하이고 미성숙한 여조, 숙성 포로주이드 및 대형 간호사로부터 시작될 때 가장 안정적으로 확립됩니다. 배양은 천천히 회전하는 플랑크톤 휠에 둥근 배양 용기에서 유지될 수 있으며 여러 세대에 걸쳐 천연 해수에서 배양된 조류의 식단을 유지할 수 있습니다. D. 게겐바우리(D. gegenbauri)의실험실 배양을 확립하는 능력 외에도, 우리는 자연적으로 조절된 바닷물에 대한 수집 상태, 조류 농도, 온도 및 노출이 모두 문화에 중요하다는 것을 입증합니다. D. 게겐바우리의 설립, 성장, 생존 및 번식.

서론

동물플랑크톤은 바다에서 가장 큰 동물 바이오매스를 차지하고 있으며, 해양 식품 거미줄의 핵심 구성요소이며 해양 생물지구화학 주기 1,2에서중요한 역할을 한다. 동물플랑크톤은 생물체의 거대한 다양성으로 구성되어 있지만, 두 가지 범주로 크게 구별 될 수있다 :몇 중간 택시 3,4와젤라틴과 비 젤라틴 . 젤라틴 동물플랑크톤이 아닌 동물성 동물플랑크톤에 비해, 젤라틴 동물플랑크톤은 복잡한 삶의역사5 때문에 공부하기가 특히 어렵고, 포획 및 취급 중에 섬세한 조직이 쉽게 손상됩니다. 젤라틴 동물플랑크톤 종은, 따라서, 실험실에서 배양하기가 어렵고 일반적으로 비젤라틴종6에 비해 덜 연구된다.

젤라틴 동물플랑크톤 그룹 중 에는 전 세계 바다에서 풍부하고 생태학적으로 중요한 것이 탈리아세안(Thaliaceans)입니다. 탈리아세산은 살피다, 피로소미다, 돌리오리다 7의 주문을 포함하는 원골 잡화의한 등급이다. 돌리올리다(....

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프로토콜

1. 디게겐바우리 사육을 위한 배양시설 준비

참고: 필요한 모든 재료와 장비는 재료표에 나열되어 있습니다.

  1. 1 M 수산화 나트륨 (NaOH), 0.06 M 과망간산산 칼륨(KMnO 4) 용액을 준비하십시오. 이 용액을 준비하려면 NaOH 400g을 10 L 탈이온수에 녹입니다. NaOH 용액에 KMnO4 100 g을 넣고 잘 섞습니다.
  2. NaHSO3의 100 g을 10L 탈이온수로 용해시켜 0.1 M 나트륨 바이설피테(NaHSO3)용액을 준비하고 잘 섞는다.
    주의: 이 시약은 흡입하는 경우에 호흡 문제를 일으키는 원인이 될 수 있는 자극제입니다. 연기 후드와 같이 통풍이 잘되는 곳에 두어 놓습니다. 피부 접촉을 피하십시오. 취급 시 보호 장갑, 보호복, 눈 보호 및 얼굴 보호 기능을 착용하십시오.
  3. 실험실에서 돌리올리드 배양을 확립하고 사육하기 전에 배양 항아리를 청소하고 살균하십시오.
    1. 탈이온수로 1.9L 및 3.8L 배양 항아리를 3회 이상 헹구는다. 캡은 다음 청소 단계에 포함되지 않기 때문에 나사 캡을 건조시키십시오.
    2. NaOH....

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결과

도3에 기재된 돌리올리드를 수집하고 배양하기 위한 기술된 절차에 따라, D. 게겐바우리의 복잡한 수명 역사를 통틀어 D. 게겐바우리의 배양을 유지할 수 있다(도1)및 여러 세대에 걸쳐 그것을 지탱해 주시고 있습니다. D. 게겐바우리 재배는 여기에 설명되어 있지만, 이러한 절차는 다른 돌리올라이드 종의 재배와도 관련이 있어야합니다.

건강하고 손상되지 않은 돌리오리드 주이드를 캡처하려면 특수 그물및견인 절차를 적용해야합니다 (그림 4). 단단한 구조물이 없는 섬세한 동물로서 물리적 인 손상을 초래할 수있는 절차를 최소화하기 위해주의를 기울여야합니다. 이러한 요인에는 난류, 압력 및 그물, 공기 및 기포를 포함한 표면과의 상호 작용이 포함될 수 있습니다. 그러나 섬세한 특성에도 .......

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토론

문화 doliolids 수용량은 지난 수십 년 동안 설립되었으며 여러 분야에서 연구를 지원하는 데 사용되었습니다. 우리의 실험실에서 실험 연구는 먹이 와 성장에 초점을 맞춘 적어도 15 과학 연구의 출판을 지원 했다18,26,재생18,28,다이어트6, 29,생리학30,생태31,그리고 돌리오리드의 생태 모델링27.

이 섬세한 동물의 문화는 현재 노동 집약적이고 시간이 많이 걸리지만, 돌리올라이드의 재배는 가능하며, 더 넓은 공동체가 착수한다면.......

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공개 사항

저자는 선언할 것이 없습니다.

감사의 글

G.A를 포함하여 수년에 걸쳐 이 프로젝트에 축적된 지식을 기부해 주신 많은 분들에게 감사드립니다. 파펜회퍼와 D. 데이벨은 원래 이러한 프로토콜을 개발했다. M. Köster, 그리고 L. Lamboley는 또한 이 절차의 발달에 크게 기여했습니다.  N.B. 로페즈-피게로아와 아에 로드리게스-산티아고는 표 1에 제공된 돌리올리드 풍부도의 추정치를 생성했다. 이 연구는 MEF에 OCE 082599, 1031263, 공동 프로젝트 OCE 1459293 및 OCE 14595010 MEF와 DMG에, 국립 해양 및 대기 관리 상 NA16SEC4810007에 의해 부분적으로 지원되었다. 우리는 R / V 사바나의 근면하고 전문적인 승무원에게 감사드립니다. 리 앤 델레오(Lee Ann DeLeo)가 피규어를 준비했고, 찰스 Y. 로버트슨이 원고를 교정했고, 제임스(지미) 윌리엄스가 플랑크톤 휠을 제작했습니다.

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
조류 배양 튜브(55mL 멸균 일회용 유리 배양 튜브)모든NA조류 배양용
오토클레이브모든NA조류 배양용 살균 장비 및 해수용
비커(2L 유리)모든NA희석된 플랑크톤 그물 토우 내용물 분류용
버킷(5갤런, ~20L)모든NA플랜톤 그물 토우의 내용물을 희석하기 위해 - 처음 사용하기 전에 해수를 조절해야
합니다 Carboys (20 L) AnyNA바닷물 저장용
Doliolid 유리 배양 항아리 (캡이 있는 1.9L 좁은 입 유리 항아리)QorpakGLC-01882배양 용기
돌리올리드 유리 배양 항아리(캡이 있는 3.8L 좁은 입 유리 항아리)QorpakGLC-01858배양 용기
환경 챔버(온도 제어 환경 챔버)모든NA플랑크톤 휠 및 배양 유지 관리를 수용하기 위해
47mm 필터용 여과 장치AnyNA배양을 위한 해수 여과용
유리 극세사 필터, 47mmWhatman1825-047배양을 위한 해수 여과용
유리 피펫(borosillicate 유리 피펫(유리관), OD 10mm, ID 8mm, 벽 두께 1mm)Science CompanyNC-10894맞춤형 절단 및 모서리 광택 호스
클램프, 스테인리스 스틸, #104 (178 mm)AnyNA배양 항아리를 플랑크톤 휠에 고정하기 위한
용도Isochrysis galbana 균주 CCMP1323National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA)균주 CCMP1323돌리오리리드 배양 공급용
L1 미디어 키트, 50 LNational Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA)MKL150L조류 배양용
램프 (조절 가능한 암이 있는 형광등 테이블 램프)모든NA항아리와 비커의 돌리오리 뚜껑 조명용
조명이 있는 온도 조절 인큐베이터모든NA조류 배양용
마이크로피펫 및 멸균 팁(0-20 &마이크로; l, 20-200 &마이크로; 엘, 200-1000  &마이크로; l)조류배양의 경우NA
플랑크톤 그물 (202 µ m 0.5 m, 5:1 길이) 대구 엔드 링 및   4 L 수족관 대구Sea-Gear Corporation90-50x5-200-4A/BB살아있는 돌리오리드를 수집하기 위한 용도 (그림 4 참조)
플랑크톤 휠NANA맞춤 제작(그림 2 참조)
플라스틱 랩AnyNA돌리오리드 배양 항아리 뚜껑 안쪽을 덮기 위해
과망간산칼Fisher ScientificP279-500항아리 및 유리 제품
세척용 시약Rhodomonas sp. 균주 CCMP740National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA)균주 CCMP740돌리올리드 배양 공급용
고무 튜빙NANA배양 항아리를 플랑크톤 휠에 고정하기 위한 용도(타이곤 튜빙으로 만들 수 있음)
Sodium BisulfiteFisher ScientificS654-500항아리 및 유리 제품 세척용 시약
수산화나트륨Fisher ScientificBP359-212항아리 및 유리 제품 세척용 시약
멸균 혈청학 피펫(1mL, 5mL, 10mL, 25mL)모든NA조류 배양
용Thalassiosira weissflogii 균주 CCMP1051National Center for Marine Algae and Microbiota(NCMA)균주 CCMP1051돌리올리드 배양 공급용
조직 배양 플라스크(250mL)모든NA조류 배양용
모든 륨

참고문헌

  1. Banse, K. Zooplankton – Pivotal role in the control of ocean production. Ices Journal of Marine Science. 52 (3-4), 265-277 (1995).
  2. Wilson, S. E., Ruhl, H. A., Smith, K. L. Zooplankton fecal pellet flux in the abyssal northe....

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