무척 추 병리학 연구를 향한 Rhipicephalus 마이크로 플러스 진드기에 Metarhizium 발 파 포자의 혈 림프 수집 및 접종을 공개

요약

진드기 혈 림프의 분석은 몇몇 병원 체가 질병을 일으키는 원인이 되는 방법에 대 한 정보의 중요 한 근원 및 어떻게 진드기 면역 학적으로이 감염에 반응 하는지 나타냅니다. 본 연구는 곰 팡이 propagules 접종 하 고 rhipicephalus 마이크로 플러스 튀 여성에서 혈 림프를 수집 하는 방법을 보여줍니다.

초록

진드기는이 빈 혈, 체중 감량, 동물의 감가 상각을 유발 하 고 또한 여러 병원 체의 벡터로 작용할 수 있기 때문에, 적 혈 기생충 및 Rhipicephalus 마이크로 플러스 는 수의학에서 매우 중요 하다. 이러한 기생충을 제어 하는 엄청난 비용으로 인해, 화학 살 비제 부적절 하 게 사용 하 여 발생 하는 환경에 대 한 손상, 전통적인 parasiticides에 대 한 저항성 증가, 진드기의 대체 제어, 사용 병원 성 진 균은 예를 들어, 흥미로운 접근법으로 간주 되어 왔다. 그럼에도 불구 하 고, 진드기의 면역 체계가이 병원 균을 싸우는 것을 어떻게 작용 하는지 몇몇 연구 결과는 보여주었습니다. 따라서,이 프로토콜은 혈 림프 수집 및 혈 세포 채취에 사용 되는 두 가지 기술, 튀 여성에 게 토모 병원 균 접종에 사용 되는 두 가지 방법을 보여줍니다. 진드기 여성의 몸에서 다리 삽입 시 병원 균의 접종은 종종 제의 기관을 손상 시키는 스 쿠 툼과 카피 수 사이의 접종과는 달리 여성 생물학 매개 변수를 평가할 수 있습니다. 등 쪽 혈 림프 컬렉션은 다리를 통해 수집 보다 더 높은 볼륨 복구를 산출. 진드기 혈 림프 수집 및 처리의 몇 가지 제한 포함 i) 혈 세포의 붕괴의 높은 속도, ii) 혈 림프 오염 된 미드 창 및 iii) 낮은 혈 림프 볼륨 복구. 혈 림프이 다리 절단을 통해 수집 될 때, 혈 림프는 다리 개 구 부에 축적 되어 응고 과정을 선호 하는 데 시간이 걸립니다. 또한, 첫 번째 방법이 수행 되기 쉬운 것으로 간주 되더라도, 등 쪽 컬렉션에 비해 다리를 통해 수집에서 얻어진 혈 세포 수가 적습니다. En토모 병원 성 에이전트에 의해 매개 된 진드기에 있는 면역 반응을 이해 하는 것은 그들의 병 인을 공개 하 고 진드기 통제를 위한 새로운 표적을 개발 하는 것을 돕습니다. 여기에 설명 된 접종 과정은 매우 낮은 기술 자원이 필요 하며 병원 성 미생물에 진드기를 노출 시키는 데에만 사용할 수 있습니다. 유사 하 게, 틱 혈 림프의 수집은 많은 생리 적 연구를 위한 첫 번째 단계를 나타낼 수 있다.

서론

가축 진드기, Rhipicephalus 마이크로 플러스, 열 대 지역에서 가축에 엄청난 부정적인 영향을 미치는 적혈구. 이 진드기는 직접적인 혈액 공급 손상과 결합 하 여 우유와 육류 생산을 감소 시키고, 빈 혈을 일으키고 궁극적으로 사망을 유발할 수 있는 babesia 우 황, babesia비에 미 나, 그리고 anaplasma 마르지 오와 같은 병원 성 대리인의 벡터입니다. 이 ectoparasite에 기인한 손실은 브라질¹에 있는 32억4000만 달러에서 해마다 추정 되었습니다. 지속 가능한 방법은 요구 되 고,도 토모 병원 성 대리인의 사용은 화학 살 비제의 사용을 감소 시키기 위하여 유망한 대 안으로 고려 됩니다^2,3,4.

곤충 병원 성 진 균, 예컨대 Metarhizium 의 미생물은 진드기를 포함 한 절지동물의 자연 적 이며, 일부 분리는 바이오 컨트롤러로 서 사용 될 수 있다. 이 병원 체는 표 피를 통해 호스트를 활발 하 게 감염 시키고 그....

프로토콜

본 연구에서 사용 되는 진드기는 척추 동물 동물 (CEUA/UFRRJ #037/2014)의 사용에 대 한 윤리 위원회에 의해 승인 된 리오 데 자네이로의 연방 농촌 대학에서, 인공 식민지 로부터 얻어 졌다.

1. 진드기를 안은 여성

1. 진드기 채집 후, 수돗물을 사용 하 여 암컷을 세척 하 고 500 mL 유리 비 커 수용자에 3 분 동안 0.5%의 차 아 염소 산 나트륨 용액에 담가 두고, 큐티 클 위생을 위해 (그림 1) 멸 균 페이퍼 타월을 사용 하 여 모든 여성을 건조 시키십시오 (그림 2).
2. 여성을 동종의가 중 그룹 (각각 20 여 명의 여성)으로 나눕니다: 1 개의 대조 군에는 아무런 처리도 없이, 0.1%의 폴 리 옥 시 에틸렌 소 르 비 탄 모노로 에이트 수 용액 (v/v)을 5 µ로 접종 하 고, 1.0 x 10에서 5 µ L을 접종 하 고 1 개 감염 기 ⁷ 블^{로 투 포자 mL-1}
   참고: 치료 되지 않은 진드기만 부피 및 혈액 세포 농도에 사용 되었다. 각 그룹에 대 한 3 개의 반복이 수행 되었습니다.

결과

이 문서에서는 틱에 적용 된 접종 및 혈 림프 수집 방법에 접근 합니다. 다리 허벅지와 진드기 여성의 몸 사이에 접종 후, 일부 유체 (혈 림프) 과정 동안 분 비 될 수 있다; 그러나 접종이 완료 되 면 바늘 끝 이나 접종 현장에 액체 나 조직이 존재 하지 않아 곰 팡이 현 탁 액이 완전히 접종 되었는지 확인 하는 것이 중요 합니다. 접종 과정이 올바르게 수행 되 면, 바늘 삽입은 암컷 ' 죽음 ' 진드기를 일으키지 않았다. 한편, 진드기는 병원 성 곰 팡이를 접종 한 후 약 48 h를 죽 었 다. 다리 허벅지와 진드기 여성의 몸 사이를 접종 하는 것은 미드 장 및 말 피 관 세관과 같은 진드기 인턴 장기를 손상 시킬 수 있으며, 유전자의 장기 손상은 스 쿠 텀과 카피 수 사이에 접종 하는 동안 발생 합니다.

진드기 중간 장은 지 느 러 미 혈 림프 수집 도중 .......

토론

병원 균의 접종은 병원 균이 숙주 내에 있다는 것을 보장 하기 때문에 실험에 있어서 미생물의 생체 내 작용을 조사 하는 것을 목적으로 연구를 하는 것이 유용 하다. 이 기술은 또한 RNA 간섭 (RNAi)과 같은 예방 접종 분자에 적용 될 수 있다. 스 쿠 툼과 카피 수 사이에 접종 하는 것은 수행 하기가 더 쉽지만, 종종 계란 생존 율^12를저해 하는 게 나의 기관을 손상 시킵니다. Genéum은 해부학 적으로 카피 톨의 앞쪽 부분 가까이에 위치 하 고 있으며 진드기에 대 한 중요 한 기관입니다. 따라서, 다리 tigh와 여성의 몸 사이에 접종 하는 것이 더 적합 하다 연구는 여성의 생물학적 매개 변수의 관찰을 필요로 하는 경우 때문에 ' 게의 장기는 부상 하지 않습니다. 다리 허벅지와 진드기의 몸 사이에 접종 방법은 더 어렵고 쉽게 손상 또는 진드기 내부 장기를 노출에도 불구 하 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
알칼리성 차아염소산염 용액	Sigma-Aldrich	A1727
D-(+)-포도	Sigma-Aldrich	G8270-1KG
EDTA	Synth	2706
태아 소 혈청	Gibco	16000036
유연한 고무	BD
Giemsa 얼룩	Sigma-Aldrich	48900-500ML-F
유리 모세관	CTechGlass	CT95-02
인슐린 주사기 (바늘)	BD	SKU:  324910
KH2PO4	Vetec	60REAVET014512
Leibovitz의 L-15 배양 매체	Gibco	11415-064
메탄올	시그마-알드리치	34860-1L-R
현미경 슬라이드	Kasvi	K5-7105
마이크로튜브	브랜드	Z336769-1PAK
Na2HPO4	Vetec	60REAVET014593
NaCl	시그마-알드리치	S7653-1KG
노이바우어 챔버	Kasvi	K5-0111
페니실린	Gibco	15140163
프로테아제 억제제 칵테일	Sigma-Aldrich	P2714
트윈 80	Vetec	60REAVET003662

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