정형외과 성 인간 간 전이성 포도막 흑색종 이종이식 마우스 모델은 배양된 인간 포도정 흑색종 세포주를 가진 환자 유래 종양 덩어리 및 바늘 주입 기술을 이용한 외과 정형외과 이식 기술을 사용하여 만들어졌습니다.
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이 논문에서
요약
초록
최근 수십 년 동안, 피하 이식 환자 유래 이종이식 종양 또는 배양된 인간 세포주들은 기존의 확립된 인간 세포보다 면역결핍 마우스에서 인간 암을 연구하는 대표적인 모델로 점점 더 인식되고 있다. 선 체외에서. 최근, 정형병 이식 환자 유래 종양 이종이식(PDX) 모델이 마우스에서 개발되어 환자 종양의 특징을 더 잘 복제할 수 있게 되었다. 간 직교 이종이식 마우스 모델은 종양 생물학 및 약물 치료에 대한 통찰력을 제공하는 유용한 암 연구 플랫폼이 될 것으로 예상됩니다. 그러나, 간 정형종양 이식은 일반적으로 복잡하다. 여기에서 우리는 환자 유래 간 전이성 편한 흑색종 종양의 정형외 이식을 위한 우리의 프로토콜을 기술합니다. 우리는 인간 간 전이성 포도막 흑색종 세포주를 면역 결핍 마우스로 배양했습니다. 프로토콜은 환자 유래 포도막 흑색종 종양의 덩어리를 가진 외과 정형 외과 이식 기술 또는 배양된 인간 세포주를 가진 바늘 주입 기술을 사용하여 일관되게 높은 기술적인 성공률 귀착될 수 있습니다. 우리는 또한 내부 간 종양을 검출하기 위하여 CT 스캐닝을 위한 프로토콜을 기술하고 재착식을 달성하기 위하여 냉동 보존한 종양을 사용하여 재이식 기술을 위해 기술합니다. 함께, 이러한 프로토콜은 번역 연구에서 간 전이성 편한 흑색종의 간 정형 종양 마우스 모델에 대한 더 나은 플랫폼을 제공합니다.
서론
경막 흑색종은 서쪽 세계에 있는 성인 중 가장 일반적인 안구 악성 종양입니다. 과거 50 년 도중, uveal 흑색종 (백만 당 5.1 케이스)의 부각은 미국에 있는 안정되어 남아 있습니다1,2. 경막 흑색종은 홍채, 섬모 체 또는 choroid에 있는 melanocytes에서 생기고, 전이가 발전할 때 극단적으로 치명적인 질병입니다. 경막 흑색종 전이를 가진 환자의 사망률은 전이의 초기 진단 후에 2 년에 1 년에 80%이고 92%이었습니다. 전이와 죽음의 진단 사이 시간은 일반적으로 짧은, 미만 6 개월, 치료에 관하여 없이3,4. 암은 혈액을 통해 퍼지고 간 (89-93 %)4,5. 효과적인 마우스 모형은 간 전이성 경추 흑색종의 추가 조사를 위해 긴급하게 필요합니다. 번역 연구를 위해, 간 국소화한 전이성 전이성 흑색종 마우스 모형을 생성하는 명확한 수요가 있습니다.
환자 유래 종양 이종이식(PDX) 마우스 모델은 개별화된 ....
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프로토콜
연구 결과에 등록된 환자는 기관 검토 위원회 승인한 프로토콜에 따라 연구 목적 및 유전 연구를 위해 버려진 외과 견본의 사용을 허용하는 서면 동의를 제공해야 합니다. 이 프로토콜은 국립 보건원의 실험실 동물 관리 및 사용에 대한 가이드의 권고에 따라 엄격하게 수행되었으며 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인을 받았습니다.
1. 신선한 환자 파생 종양 조직의 집합
- 병원 수술실에서 수술 또는 바늘 생검에서 환자 유래 종양 조직을 가져옵니다.
- 종양 조직을 행크스의 균형 잡힌 염액(HBSS) 용액을 함유한 100 mL 용기에 얼음 위에 넣습니다.
- 실험실에서 멸균 후드 (생체 안전 수준 2)로 조직을 옮김.
- 가능한 한 빨리 2 단계로 진행하십시오.
참고: 안전상의 이유로 알려진 HIV 또는 B형 간염 또는 C 감염 환자를 제외하십시오.
2. 신선한 환자 유래 종양 조직의 처리
- 인산염 완충 식염수 (PBS)를 함유 한 50 mL 튜브에 얼음에 조직을 넣습니다. 티슈세척을 위해 튜브에 PBS를 넣고 튜브에서 PBS를 두 번 버립....
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결과
간 포켓 방법을 이용한 외과정형이식은 인간 간 전이성 흑색종 종양을 마우스 간으로 이식하여 6개월 이내에 80%의 높은 성공률을 기록할 수 있다. 이종이식 종양은 딸 작은혹이없는 독방 종양으로서 간에서 생착합니다(그림 1 및 그림 3A). 마이크로니들을 이용하여 간으로 의한 외과적 정형외과 주사 기법은 모든 경우에 간에서 성공적으로 배양된 인간 간 전이성 흑색종 세포를 이식하였다(도2 및 도 3B). 그러나, 몇몇 케이스는 주요 종양의 주위에 보급이 있었습니다. 조영제는 1mm 크기의 작은 종양을 포함하여 CT에 간에서 종양을 검출합니다(그림 3B). 저온 보존 종양의 재이식은 성공률이 높은 마우스 간에서 .......
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토론
현재 의 직교 이종이식 모델은 노동 집약적이고 시간이 많이 소요되며 만드는 데 비용이 많이 듭니다. 간암을 위한 정형외 종양 이종이식 마우스 모델은19,20,21년 이상 전에 2 년 이상 확립되었다. 그러나 이 기술은 복잡하며 마이크로 니들 홀더 및 6-0 에서 8-0과 같은 특수 장비를 사용해야 합니다. 현미경으로 미세 봉합사. 종양과 정상적인 간 조직은 봉합사가 깨지기 쉬운 간 조직을 손상시키지 않도록 신중하게 바느질해야합니다. 종래의 기술은 혈종 및괴사(22)와같은 합병증을 유발한다. 최근에는 이러한 문제점을 해결하기 위해 수정된 기술이개발되었다(23) 이 수정된 기술은 간 표면에 종양을 덮기 위하여 봉합사 대신 흡수성 지혈물질을 이용합니다. 그러나,이 변형 된 방법은 간 .......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없다.
감사의 글
원고를 검토해 주신 오하라, 케이 사이토, 테라이 에게 감사드립니다. 저자는 폭스 체이스 암 센터에서 박사 R. 사토에 의해이 원고의 편집 및 영어 지원에 대한 비판적 검토를 인정합니다. 본 명세서에 기재된 작품은 보니 크롤 연구기금, 마크 와인지엘 연구기금, 토마스 제퍼슨 대학의 안과 흑색종 연구 기금, 오사카 공동체 재단, JSPS KAKENHI 교부금 JP 18K15596에 의해 지원되었다. 대학. A. Aplin 박사의 실험실에서 연구 NIH 교부금 R01 GM067893에 의해 지원 되었다. 이 프로젝트는 또한 학장의 변형 과학 상에 의해 투자되었다, 토마스 제퍼슨 대학 프로그래밍 이니셔티브 상.
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재료
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| CO2 탱크 | |||
| Cryomedium | |||
| Exitron nano 12000 (알칼리 토금속계 나노입자 조영제) | Miltenyl Biotec | 130-095-700 | |
| HBSS 1x, 칼슘 & 함유 magnesium | Corning | 21-020-CM | |
| 인간 간 전이성 포도막 흑색종 세포주 | |||
| 간의 | 모든 조직 취급은 생물 안전성 레벨 2 후드에서 이루어져야 합니다. 인체 조직으로 작업할 때 주의하십시오. 항상 장갑을 착용하고 직접적인 피부 접촉을 피하십시오. 환자가 HIV 또는 기타 전염성이 높은 유기체에 감염되었을 수 있다고 가정합니다. 감염을 옮기는 것으로 알려진 샘플을 처리하지 마십시오. | ||
| 요오드 | |||
| 이소플루란 | 퍼듀 제품 | 67618-150-17 | |
| 이소프로판올 | 피셔 사이언티픽 | A416-1 | 피부와 눈에 직접 접촉하거나 마취제를 흡입하지 마십시오. |
| 액체 질소 | |||
| Matrigel HC | BD | 354248 | |
| NOD. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) 마우스 | Jackson Lab | 5557 | 4-8 주 된 |
| PBS 1x, 칼슘 및 마그네슘 없음 | Corning | 21-031-CM | |
| RPMI 1640 | Corning | 10-013-CV | |
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| 4% 파라포름알데히드 인산염 완충 용액 | Wako | 163-20145 | |
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| 15 mL 원뿔형 튜브 | AZER SCIENTIFIC | ES-9152N | |
| 27 G 바늘 | BD | 780301 | |
| 27 G 바늘 | Hamilton | 7803-01 | |
| 50 mL 원뿔형 튜브 | AZER SCIENTIFIC | ES-9502N | |
| 50 µ L 마이크로 주사기 | BD | 80630 | |
| 50 &마이크로; L 마이크로 주사기 | Hamilton | 7655-01 | |
| 100 mL 용기 | Fisher Scientific | 12594997 | |
| 200μ L 팁 |
참고문헌
- Aronow, M. E., Topham, A. K., Singh, A. D. Uveal Melanoma: 5-Year Update on Incidence, Treatment, and Survival (SEER 1973-2013). Ocular Oncology and Pathology. 4 (3), 145-151 (2018).
- Krantz, B. A., Dave, N., Komatsubara, K. M., Marr, B. P., Carvajal, R. D.
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