여기서, 우리는 자궁 경부 뮤린 모델에서 비 봉합술 커프 기술을 사용하여 마우스에서 이종성 대동맥 이식의 프로토콜을 제시한다. 이 모형은 만성 동종 이식 혈관병증 (CAV)의 근본적인 병리를 공부하기 위하여 이용될 수 있고 그것의 대형을 방지하기 위하여 새로운 치료에이전트를 평가하는 것을 도울 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
강력한 면역 억제 프로토콜의 도입으로 급성 거부 에피소드의 예방 및 치료에서 뚜렷한 발전이 가능합니다. 그러나, 이식 된 고체 장기의 장기 결과에 있는 사소한 개선만 지난 십년간 내내 관찰될 수 있었습니다. 이러한 맥락에서, 만성 동종 이식 혈관 병증 (CAV)은 여전히 심장, 신장 및 폐 이식에서 후기 장기 실패의 주요 원인을 나타냅니다.
지금까지 CAV 발달의 근본적인 병인은 불분명하게 남아, 효과적인 처리 전략이 현재 누락되는 이유를 설명하고 근본적인 병리생리학을 공부하기 위하여 관련 실험 적인 모형을 위한 필요를 강조하 CAV 형성. 다음 프로토콜은 변형된 비봉합사 커프 기술을 사용하여 뮤린 이종 자궁 경부 대동맥 이식 모델을 기술한다. 이 기술에서는 흉부 대동맥의 세그먼트가 오른쪽 일반적인 경동맥에 편치됩니다. 비 봉합소 커프 기술을 사용하여 쉽게 배우고 재현 할 수있는 모델을 확립하여 봉합 된 혈관 미세 해부학의 가능한 이질성을 최소화 할 수 있습니다.
서론
지난 6 년간, 고체 기관 이식은 말기 기관 실패의 처리를 위한 배려의 표준에 실험적인 절차에서 발전했습니다1. 항균제의 개선, 외과 적 기술 및 면역 억제 연대의 발전으로 인해 고체 장기 이식의 초기 성공률은 지난 수십 년 동안 크게 증가했습니다2.
그러나, 장기 이식 생존율은 동일한 방식으로 유의적으로 개선되지 않았다3. CAV의 발달은 장기 생존을 제한하는 주요요인이다4,5,6. 이 병리학은 평활근 세포로 구성된 동심 신생 층의 형성을 특징으로하며, 혈관의 점진적 협착과 이식 된 고체 장기의 연속적인 악성 주입을 초래합니다. 심장 이식 수령인에서, CAV 병변은 환자의 75%까지 에서 진단될 수 있습니다 3 이식 후에 년7.
CAV의 병리생리학은 아직 완전히 이해되지 않았습니다. 수많은 면역학 및 비면역학적 인자와 관련이 있는 것으로 보이며, 후속 내피 ....
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프로토콜
모든 실험은 독일 동물 복지법(TierSchG)의 지침에 따라 수행되었습니다. (AZ: 55.2-1-54-2532.Vet_02-80-2015).
1. 동물 주택
- 실험의 경우, 수컷 C57BL/6 및 BALB/c 마우스를 C57BL/6 마우스로 20-25g의 무게를 가진 마우스를 기증자 동물로 사용하십시오.
- 건강 모니터링을 위한 FELASA 지침에 따라 병원균이 없는 장벽 시설에서 동물과 집을구입한다 12.
- 농축 중첩 재료와 표준 Makrolon 케이지에 마우스를 유지합니다. 12 시간의 주야간 주기로 물과 펠릿 식품에 대한 광고 리비텀 액세스를 제공합니다.
- 실온을 22±2°C로 유지하고 상대 습도를 55±5%로 유지합니다.
2. 수령인 준비
- 첫째, 수령인 동물 (C57BL / 6)을 미다졸람 (5 mg / kg; 5 mg / mL), 메데토 미딘 (0.5 mg / kg; 1 mg / mL) 및 펜타닐 (0.05 mg / kg; 0.05 mg / mL)의 복강 내 주사로 마취하십시오.
참고 : 마취의 정확한 깊이는 5-10 분 안에 도달해야합니다.<....
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결과
완전 MHC-미스매치 이식 모델에서, 동심 신생층은 이식 후 4주 후에 볼 수있다(도 2). 이 층은 주로 SM22(성숙한 혈관 평활근 세포에 대한 선택적 마커)에 대한 면역조직학적 염색으로서 혈관 평활근 세포로 구성된다. 앞서 언급한 바와 같이, 이들 혈관 평활근 세포는 만성 동종 이식 혈관병증에서 보이는 병변에 대한 병변에 대한 병리현상이다. 추가 분석을 위해 대동맥 세그먼트는 Elastica van Gieson 염색으로 단면화되고 염색되어야 합니다. 여기서, 신인티마 층은 투니카 매체로부터 투니카 인티마를 분할하는 내부 탄성 멤브레인의 탄성 섬유로 쉽게 분화될 수 있다.
이 모델에서 잠재적인 치료 효과를 평가하기 위해, neointima-media 비뿐만 아니라 광단 단면적 좁히는, 그 단면 샘플13,
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토론
만성 동종 이식 혈관 병증은 심장의 고체 장기 이식 후 후기 이식 손실의 주요 원인이며 신장 및 폐 동종 이식 가능성이8. 지금까지, CAV의 형성을 방지하기 위해 인과 치료 식이요법이 개발될 수 없었다.
CAV의 병리생리학은 다인성이며 면역학 및 비면역학적 측면을수반한다 16. 이식에 설치류 모형의 사용은 고체 기관 이식에 있는 동종 이식 거부 프로세스의 근본적인 병리생리학이해에서 필수적이고 거부를 방지하는 새로운 치료 접근을 확인하는 것을 도왔습니다17 . CAV는 혈관 평활근 세포로 구성된 신형성층의 형성을 특징으로 하며, 이는 장기기능의후속 악화와 함께 이식된 기관의 혈관및 악성화의 연속적인 협착으로 이어지는 7.
기재된 뮤린 대동맥 이식 모델에서, 동심.......
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공개 사항
저자는 그들이 경쟁 적인 재정적 이익이 없다고 선언합니다.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Balb-c Mice (H2-d) | Charles River | Strain# 028 | 기증자 동물 |
| 양극성 소작 시스템 | ERBE | ICC 50 / 20195-023 | 양극성 소작 |
| C57BL/6J (H-2b) | Charles River | Strain# 027 | 수용자 동물 |
| Halsey 바늘 홀더 | FST | 12501-12 | 바늘 홀더 |
| Halsted-Mosquito Forceps | AESCULAP | BH111R | 곡선 클램프 |
| 의료 폴리이 미드 튜빙 | Nordson MEDICAL | 141-0031 | 커프 재질 |
| Micro Serrefines | FST | 18055-04 | 마이크로 용기 클립 |
| 마이크로 애드슨 집게 (톱니 모양) | FST | 11018-12 | 표준 집게 |
| 마이크로 Serrefine 클램프 적용 집게 | FST | 18057-14 | 클립 애플리케이터 |
| 에스& T 집게 - SuperGrip 팁(각도 45도) | 에스& T | 00649-11 | 파인 펜치 |
| S & T Vessel 확장 펜치 - 각도 10° (팁 직경 0.2 mm) | 에스& T | 00125-11 | Vesseldilatator |
| Schott VisiLED 세트 | Schott | MC 1500 / S80-55 | 광 |
| 입체 현미경 | ZEISS | SteREO Discovery.V8 | 현미경 |
| 학생 미세 가위 / 수술 용 가위 - Sharp-Blunt | FST | 91460-11 / 14001-12 | 표준 Sissors |
| Vannas-T ü bingen 스프링 가위 (곡선, 8.5cm) | FST | 15004-08 | Microsissors (curved) |
| Vannas-Tü bingen 스프링 가위 (스트레이트, 8.5 cm) | FST | 15003-08 | Microsissors (스트레이트) |
참고문헌
- Rana, A., et al. Survival benefit of solid-organ transplant in the United States. JAMA Surgery. 150 (3), 252-259 (2015).
- Rana, A., Godfrey, E. L. Outcomes in Solid-Organ Transplantation: Success and Stagnation. Texas Heart Institute Journal. ....
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재인쇄 및 허가
