핵산 프로브를 이용한 뉴클레아제 활성의 운동 스크리닝

Alien Balian; Javier Garcia Gonzalez; Nora Bastida; Khadija-Tul Kubra Akhtar; Baris A. Borsa; Frank  J. Hernandez

doi:10.3791/60005

이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.

방법 논문

핵산 프로브를 이용한 뉴클레아제 활성의 운동 스크리닝

7.7K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/60005

⸱

2019년 11월 1일

Alien Balian^*¹^,²^,³ , Javier Garcia Gonzalez^*¹^,²^,³ , Nora Bastida¹^,³ , Khadija-Tul Kubra Akhtar¹^,³ , Baris A. Borsa¹^,²^,³ , Frank J. Hernandez¹^,²^,³

¹Department of Physics, Chemistry and Biology, Linköping University, ²Wallenberg Centre for Molecular Medicine (WCMM), ³Nucleic Acids Technologies Laboratory (NAT-lab), Linköping University

^* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

변경된 뉴클레아제 활성은 바이오마커로서의 잠재력을 기점으로 다른 인간 조건과 연관되어 있다. 이 논문에 제시된 모듈식 및 구현 방법론은 뉴클레아제 활성을 질병의 바이오마커로 활용하기 위한 특정 핵산 프로브를 선택할 수 있게 한다.

초록

뉴클레아제는 리보오스 설탕을 연결하는 인산 분해 결합의 가수분해를 촉매하여 핵산을 분해하는 효소의 한 부입니다. 핵약은 원핵 생물과 진핵 생물에서 다양한 중요한 생리적 역할을 나타내며, 게놈 안정성 유지에서 병원균에 대한 보호 제공에 이르기까지 다양합니다. 변경된 뉴클레아제 활동은 세균성 감염 및 암을 포함하여 몇몇 병리학적인 조건과 연관되었습니다. 이를 위해, 뉴클레아제 활성은 특정 바이오마커로서 악용될 수 있는 큰 잠재력을 보여주었다. 그러나, 이 활성에 기초한 견고하고 재현 가능한 스크리닝 방법은 매우 바람직하다.

본 명세서에서, 우리는 병리학적 및 건강한 상태 사이의 분화의 범위와 함께, 기질로서 핵산 프로브를 사용하여 뉴클레아제 활성을 스크리닝가능하게 하는 방법을 소개한다. 이 방법을 사용하면 반복적인 방식으로 특이성이 증가하면서 새로운 프로브 라이브러리를 설계할 수 있습니다. 따라서 화학적으로 변형된 핵산의 가용성을 활용하여 향상된 기능으로 프로브의 설계를 구체화하기 위해 여러 라운드의 스크리닝이 필요합니다. 제안된 기술의 상당한 잠재력은 질병 상태와 관련된 핵활성의 스크리닝을 위한 유연성, 높은 재현성 및 다기능성에 있다. 이 기술은 클리닉에서 큰 잠재력을 가진 유망한 진단 도구의 개발을 허용 할 것으로 예상된다.

서론

뉴클레아제는 핵산 분자의 백본 구조를 형성하는 인산염 결합을 분리할 수 있는 효소의 부류입니다. 뉴클레아제의 광대 한 다양성은 그들의 분류를 오히려 어렵게 만듭니다. 그러나, 기질 선호도(deoxyribonucleic acid (DNA) 또는 리보핵산 (RNA)), 절단 부위 (엔도누클레스 또는 외핵약), 또는 금속 이온 의존성, 다른 사람의 사이에서 뉴클레아제를 기술하는 데 사용되는 몇 가지 일반적인 기준이^{있다 1.} 핵활성제는 원핵생물및 진핵생물 모두에서 근본적인 역할을 가지며, 유전자 편집^도구로서계속 사용되고 있는 고도로 보존된 촉매 효소이다 2. 그(것)들은 또한 DNA 정비 및 복제에 있는 기본적인 배우입니다, 게놈 안정성을 지키는 것을 돕고 증명 독서 프로세스에^참여3. 박테리아에서, 예를 들어, 뉴클레아제는 숙주의 면역 계통의 효능을 감소시킴으로써 세균 생존을 촉진할 수 있는 중요한 독성 인자로 확인되었다^4,^5,^6,⁷ ^,....