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방법 논문

마이크로 파이펫 포부로 전기 형성 및 기계적 특성 측정에 의한 거대한 Unilamellar 하이브리드 소포의 Obtention

8.5K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/60199

⸱

2020년 1월 19일

 ,  , 
1Université de Bordeaux, CNRS, Bordeaux INP, LCPO, UMR 5629

이 논문에서

요약

이 프로토콜의 목표는 마이크로파이펫 흡인에 의해 거대 소포의 막 기계적 특성을 안정적으로 측정하는 것입니다.

초록

인지질및공중합체에서 얻은 거대 소포는 제어 및 표적 약물 전달, 진단을 위한 바이오센서 내 생체 분자 인식, 인공 세포를 위한 기능성 멤브레인, 바이오영감 마이크로/나노 반응기 개발 등 다양한 응용 분야에서 이용될 수 있습니다. 이러한 모든 응용 분야에서 멤브레인 특성의 특성화는 근본적으로 중요합니다. E. Evans가 개척한 기존 특성화 기술 중 에는 면적 압축성 계수, 굴곡 계수 및 용해 응력 및 변형과 같은 멤브레인의 기계적 특성을 측정할 수 있습니다. 여기서, 우리는 지질 또는 공중합체 (또는 둘 다)의 박막에서 거대한 소포를 얻기 위한 모든 방법론 및 상세한 절차, 마이크로파이펫의 제조 및 표면 처리, 및 이전에 언급한 모든 파라미터의 측정으로 이어지는 흡인 절차를 제시한다.

서론

인지질(liposomes)으로부터 얻은 거대 소포는 1970년대부터 기본 세포막 모델1로서널리 사용되어 왔다. 1990 년대 후반에, 그들의 지질 유사체2,3에관하여 명명된 폴리머의 자기 조립에서 얻은 포식어는, 급속하게 약한 기계적 안정성 및 가난한 모듈형 화학 기능을 가진 리포좀에 대한 흥미로운 대안으로 나타났습니다. 그러나, 그들의 세포 생모방 특성은 세포막의 주성분인 인지질로 구성되어 있기 때문에 리포좀에 비해 다소 제한적이다. 더욱이, 그들의 낮은 막 투과성은 막을 통해 종의 통제된 확산이 요구되는 약 납품 같이 몇몇 응용에서 문제가 될 수 있습니다. 최근, 하이브리드 폴리머-지질 소포 및 멤브레인을 설계하는 블록 공중합체와 인지질의 연관성이4,5연구의증가의 대상이 되고 있다. 주요 아이디어는 각 구성 요소의 이점 (지질 이중층의 생체 기능 및 투과성 및 폴리머 멤브레인의 기계적 안정성 및 화학적 다양성)을 시너지 효과로 결합하는 법인을 설계하는 것입니다: 제어 및 표적 약물 전달, 진단을위한 바이오 센서 내의 생체 분자 인식, 인공 세포를위한 기능성 멤브레인, 바이오 영감 마이크로 / 나노 반응기 의 개발.

요즘, 다른 과학 공동체 (생화학자, 화학자, 생물 물리학자, 물리 학자, 생물학자)는 더 진보 된 세포막 모델의 개발에 대한 관심이 증가하고있다. 여기서, 우리의 목표는 가능한 한 상세히, 기존의 방법론(전기형성, 마이크로파이펫 흡인)을 획득하고 거대 소포의 기계적 특성을 특성화하는 것 및 하이브리드 폴리머 지질 거대소포인최근 "고급" 세포막 모델을 제시하는것이다.

이러한 방법의 목적은 용해 응력 및 변형뿐만 아니라 멤브레인의 영역 압축성 및 굽힘 계수의 신뢰할 수있는 측정을 얻는 것입니다. 거대 소포의 굽힘 강성을 측정하기 위해 존재하는 가장 일반적인 기술 중 하나는 직접 비디오 현미경 관찰에 기초한 변동 분석6,7입니다. 그러나 이것은 큰 가시적인 막 변동을 요구하고, 두꺼운 막 (예를 들면 폴리머 섬)에 체계적으로 장악되지 않습니다. 면적 압축성 계수는 Langmuir Blodgett 기술을 사용하여 실험적으로 결정될 수 있지만 대부분의 경우 단층8에서결정됩니다. 마이크로파이펫 흡인 기술은 한 실험에서 거대한 unilamellar 소포 (GUV)를 형성하는 이중층에서 둘 다 moduli의 측정을 허용합니다.

다음 방법은 이중층을 형성할 수 있는 모든 양과성 분자 또는 거대 분자에 적합하며, 결과적으로 전기 형성에 의한 소포에 적합합니다. 이를 위해서는 전기 형성 온도에서 이중층의 유체 특성이 필요합니다.

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프로토콜

1. 마이크로 파이펫 제조

참고: 여기에서는 내경이 6~12μm이고 테이퍼 길이가 3-4mm인 마이크로파이펫이 필요합니다. 마이크로파이펫 제조의 상세한 방법은 다음과 같은 것으로 설명되어 있다.

  1. 보로실리케이트 유리 모세관을 풀러의 드로바에 넣고 손잡이를 조여 끝부분 중 하나를 고정시다.
  2. 조심스럽게 히터 챔버의 측면에있는 구멍을 통해 유리를 밀어.
  3. 다른 쪽 끝에 있는 클램핑 노브를 아래로 조입니다.
  4. 원하는 사양을 달성하기 위해 팁의 크기와 테이퍼 길이를 제어합니다. 이를 위해 가열 온도, 당김, 속도, 지연 및 압력과 같은 기술적 파라미터를 최적화합니다. 다음은 사용되는 프로그램의 예입니다.
    열: 550 °C
    당기기: 10 (기계 범위: 임의 의 단위에서 0-255)
    속도: 30 (범위: 0-255 임의의 단위)
    지연: 1 (범위: 0-255 임의의 단위)
    압력: 500 (범위: 0-999 임의 의 단위)
  5. PUL L을 클릭하여 프로그램에서 정의한 이벤트를 실행합니다. 모세관은 두 개의 마이크로 파이펫으로 분리되어 마이크로 포지를 사용하여 치수를 조정해야합니다.
  6. 마이크로포지의 금속 파이펫 홀더에 마이크로파이펫을 삽입합니다(그림 1참조). 10x 대물렌즈를 사용하여 파이펫 팁이 유리 비드 표면에 가까워질 때까지 현미경 스테이지와 파이펫 조작기(수직 및 수평 이동)를 조정합니다.
  7. 발 스위치를 눌러 유리 비드를 녹입니다. 팁을 내리고 용융 유리 비드와 접촉합니다. 용융 유리는 모세관 작용에 의해 파이펫으로 흐를 것입니다. 도 1의삽입과 같이 용융 유리의 레벨이 특정 높이에 도달할 때까지 몇 초 정도 기다립니다.
  8. 발 스위치의 압력을 제거하여 가열을 중지하고 수직 파이펫 조작기를 사용하여 팁을 신속하게 당겨 날카로운 파손을 일으킵니다.
  9. 원하는 직경이 얻어지도록 1.7 및 1.8 단계를 반복합니다(6~12 μm).
    참고: 직경 측정의 정확도를 향상시키기 위해 마지막 단계에서 는 레티클이 장착된 32x 대물렌즈를 사용하십시오.

2. BSA (소 혈청 알부민)와 코팅 파이펫 팁

  1. 순수한 물에 1% wt. BSA를 함유하는 포도당의 0.1 M 용액을 준비한다.
    1. 180 mg의 포도당 분말을 계량하고 15 mL 폴리 프로필렌 원두 튜브에 놓고 10 mL의 순수한 물로 완성하십시오.
    2. 0.1 g의 BSA 파우더를 넣고 시험관 회전 믹서를 사용하여 완전히 용해될 때까지 부드럽게 흔들어 줍니다(약 4시간).
  2. 바늘이 장착 된 10 mL 일회용 Luer 주사기로 용액을 가져 가라. 일단 충전되면, 바늘을 제거하고 0.22 μm 아세테이트 셀룰로오스 필터를 설치한다. 팁을 담그는 데 사용되는 여러 폴리 프로필렌 마이크로 원심 분리튜브 (1.5 mL)를 채웁니다.
  3. 모세혈관을 홀더에 수직으로 놓습니다. 홀더를 내리고 팁을 밤새 포도당/BSA 용액에 담급전시. 용액은 모세관 작용에 의해 약 1cm 높이로 상승해야합니다.
  4. 포도당/BSA 용액에서 파이펫 팁을 제거합니다. 0.1 M 포도당 용액 5 mL (순수한 물 5 mL에서 포도당 분말 90 mg 희석)을 준비하고 0.22 μm 아세테이트 셀룰로오스 필터를 통해 여과하십시오.
  5. 유연한 융합 실리카 모세관이 장착된 500 μL 유리 주사기를 사용하여 포도당 용액으로 파이펫을 채웁니다. 그런 다음 모든 포도당 용액을 다시 빨아서 제거하고 폐기하십시오(그림 2). 이 단계를 여러 번 반복하여 무한BSA를 제거합니다.

3. 전기형성에 의한 ROV 및 GUV 형성

참고 : 전기 형성은 안젤로바9에의해 개발 된 일반적으로 사용되는 기술이다. 전기 형성 챔버를 획득하고, 지질 또는 폴리머 필름(또는 GHUVs(자이언트 하이브리드 Unilamellar Vesicles)에 대해 둘 다)를 증착하고 대체 전기장 하에서 필름을 수화하는 절차는 다음과 같습니다. 얻어진 GUV를 수집하는 절차도 설명된다.

  1. 양과필, 자당 및 포도당 용액 준비
    1. 1 mg /mL의 농도로 양서류 용액을 준비하십시오. 10 mg의 양서류의 무게를 측정하고 10 mL의 클로로포름에 용해하십시오. 용매 증발을 방지하기 위해 밀봉 된 바이알에 용액을 보관하십시오.
    2. 클로로포름에서 1 mg/mL에서1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올라민-N-(리사민 로다민 B 설포닐)(DOPE-Rhod)의 스톡 용액을 준비합니다.
    3. 양서류 용액에 10 μL의 형광 지질 용액을 추가하십시오. 용매 증발을 방지하기 위해 밀봉 된 바이알에 용액을 보관하십시오.
    4. 자당과 포도당 용액을 0.1 M. 무게 342 mg과 180 mg의 자당과 포도당을 각각 준비하고 순수한 물 10 mL에 녹입니다.
  2. 전기 형성 챔버의 준비
    참고 : 다른 전도성 재료는 전기 성형 장치를 만들기 위해 사용될 수있다 (예를 들어, 백금 와이어10,스테인레스 바늘11). 전기 형성 챔버는 조리개를 만들기 위해 한쪽에 절단 된 O 링 고무 스페이서로 분리 된 두 개의 ITO 슬라이드로 구성됩니다. 슬라이드는 두 개의 전선을 통해 전압 발생기에 연결됩니다(그림3 및 그림 4A).
    1. 유기 용매 (예 : 클로로포름)로 ITO 슬라이드를 청소하십시오. 옴미터를 사용하여 전도성 표면을 식별합니다.
    2. 접착제 테이프를 사용하여 전도성 측에 전선을 부착합니다.
    3. 양서류 용액 증착
      1. 모세관 작용에 의해 레벨이 증가할 때까지 용액에 모세관을 담그고 용액의 약 5 μL을 수집합니다.
      2. 모세관을 ITO 유리 판의 중앙과 접촉시키고 용액을 부드럽게 펴십시오. 완전한 용매 증발을 보장하기 위해 10 초 동안 기다립니다(그림 4A).
      3. 이 절차를 각 면에 대해 3번 반복합니다.
    4. 열린 O-링 스페이서의 양쪽에 실리콘 프리 그리스 레이어를 추가합니다. 증착 부위에 두어 두어 두어 두어 두어 두어 두는다. 스페이서 의 상단에 두 번째 ITO 유리 판의 도전성 면을 놓습니다.
    5. 유기 용매의 흔적을 제거하기 위해 3 시간 동안 진공 아래에 전기 형성 챔버를 놓습니다.
  3. 전기 형성 절차
    1. 전선을 발전기에 연결합니다.
    2. 생성기의 다음 설정을 사용합니다.
      대체 정현파 장력
      주파수: 10 Hz
      진폭: 2V피크-피크
      참고: 각 시스템에 대해 최적의 전압 주파수와 지속 시간을 찾아야 합니다.
    3. 챔버에 용액을 주입하기 전에 전압이 가해지도록 하십시오.
    4. 챔버를 채우기 위해 0.8 mm 내경 바늘이있는 주사기를 사용하여 용액 1 mL을 주입하십시오. 최종 거품을 제거합니다.
    5. 챔버를 75분 동안 인가된 전압/주파수 아래에 놓습니다(그림4B).
  4. 굽스 수확
    1. 발전기를 끕지.
    2. 0.8 mm 내경 바늘로 1 mL 주사기를 사용하여 챔버 내부에 기포를 생성하기 위해 용액의 작은 부분을 빨아. 이 거품이 챔버 내부로 이동하기 위해 챔버를 약간 기울입니다. 이렇게 하면 GUV가 ITO 표면에서 분리하는 데 도움이 될 수있습니다(그림4C).
    3. 모든 용액을 빨아 1mL 플라스틱 튜브로 옮김하십시오.
    4. 와이어를 제거하고 유기 용매 (톨루엔 다음 클로로포름)로 ITO 슬라이드를 청소하십시오.

4. 마이크로 조작 설정

참고 : 마이크로 파이펫 포부의 원리는 우울증을 적용하여 유리 마이크로 파이펫을 통해 단일 소포를 빨아하는 것입니다. 파이펫 내부의 혀 길이는 흡입 압력의 함수로 측정됩니다. 앞서 설명한 BSA의 피펫 코팅은 소포 막과 파이펫 사이의 접착을 방지하거나 최소화하는 데 필수적입니다.

프로토콜은 아래에 설명되어 있습니다.

  1. 파이펫 및 물 충전 저수지 연결
    참고 : 물 채워진 탱크와 마이크로 미터는 슬라이딩 플레이트에 고정되어 있습니다. 마이크로미터 헤드가 있는 디지털 카운터는 0~2.5cm 범위의 장치의 수직 변위를 허용하고 알루미늄 광학 레일을 따라 1μm의 정확도를 제공합니다. 실리콘 튜브는 저수지와 모세관 홀더를 연결합니다(그림5A).
    1. 탱크에 순수한 물을 채웁니다. 일회용 5mL 주사기를 실리콘 튜브를 통해 모세관 금속 홀더에 연결하고 흡인하여 탱크에서 홀더로의 물 흐름을 만듭니다.
    2. 튜브를 약간 터치하여 기포를 제거합니다. 동시에 물 탱크를 올려 양압을 만듭니다. 5mL 주사기는 여전히 홀더에 부착되어 있습니다.
    3. 앞서 설명한 코팅 및 세척 단계(2단계 참조)를 마친 후, 모세관을 포도당 용액으로 채우고, 마지막에 방울이 형성될 때까지 채웁니다. 금속 홀더에서 주사기 튜브를 제거하여 끝에 약간의 물 흐름을 만듭니다.
    4. 모세관을 거꾸로 뒤집고 홀더의 물 흐름과 포도당 강하를 연결합니다. 모세관과 홀더를 함께 나사로 고정시고 고정합니다.
  2. 파이펫 배치
    참고 : 이 작업 동안 물 탱크는 여전히 양압을 유지하기 위해 알루미늄 레일에 배치됩니다.
    1. 두 개의 유리 슬라이드 (이전에 에탄올로 청소)가 장착 된 수제 알루미늄 무대를 가지고 양쪽에 진공 그리스로 접착제. 현미경 단계에 설치하고 도 5B,C에도시된 바와 같이 0.1 M의 포도당을 함유하는 1 mL 주사기를 사용하여 두 슬라이드 사이에 반월상 연골을 형성한다.
    2. 파이펫과 홀더를 마이크로 매니더의 모터 유닛에 놓고 클램핑 노브를 조입니다.
    3. 거친 모드에서 제어판 조이스틱을 사용하여 포도당 반월 상 연골 근처의 마이크로 파이펫을 낮춥시됩니다. 미세 모드를 사용하여 팁의 위치를 반월 상 연골의 중심으로 조정합니다.
    4. 포도당에 침지된 팁을 몇 분 간 유지하여 외부 및 내부 표면을 청소합니다(양압이 유지됨에 따라 물의 흐름이 피펫의 내부 표면을 헹구어 코팅되지 않은 BSA를 제거합니다).
    5. 마이크로 매니더키보드에 팁의 위치를 저장하고 반월 상 연골에서 철회.
    6. 포도당 반월 상 연골을 제거하고 신선한 것으로 대체하십시오. 20 μL 마이크로파이펫을 사용하여 0.1 M 자당에서 GUV 2 μL을 빨아 신선한 포도당 반월 상 연골에 넣습니다. DIC 모드 (차동 간섭 대비)에서 자당 (주로 GUV 내부)과 포도당 (주로 GUV 외부)의 밀도 차이로 인해 하단에위치한 GUV를 관찰하십시오.
    7. 소포가 약간 수축되면 흡입 파이펫을 다시 삽입하고 팁에 초점을 맞춥니다. 압력이 거의 0인 물 탱크의 높이 H0을 설정합니다. 이를 위해 용액에 자연적으로 존재하는 작은 소포 또는 입자를 활용하고 이러한 입자의 움직임이 멈출 때까지 물 탱크 높이를 조정하십시오.
    8. 이 시점에서 반월 상 연골을 미네랄 오일로 둘러싸서 물 증발을 방지하고 그림 5D를참조하십시오.
      참고: 에어컨을 사용하여 실온을 20-22°C 사이에서 조절해야 합니다.
  3. 마이크로파이펫 흡인 실험
    1. 파이펫 팁(직경 6-12 μm)을 낮추고 작은 흡입(-1cm)을 만들어 소포(직경 15-30 μm)를 흡인합니다. 선택한 소포의 멤브레인은 약간 변동되어야하며 눈에 보이는 결함 (싹이나 필라멘트가 없음)을 제시해서는 안됩니다(그림 6).
    2. 마이크로 조작기를 사용하여 다른 소포에서 흡인 된 소포를 분리하고 전체 실험 중에이 위치를 유지하기 위해 더 높은 수준으로 파이펫을 올립니다.
    3. 물을 채워진 탱크를 약 -10cm로 낮추어 소포를 미리 응력한 다음 압력을 줄여 초기 값(-1cm)으로 되돌릴 수 있습니다. 이 단계를 여러 번 반복하여 막에서 막 과잉 및 작은 결함을 제거하십시오.
    4. 물 탱크의 위치에 의해 정의 된 -0.5 cm의 높이에서, 천천히 멤브레인이 변동하는 정권에 도달하기 위해 마이크로 미터와 흡입 압력을 감소. 그런 다음 상당한 투영 길이 (몇 미크론)로 팁의 혀를 명확하게 시각화하는 압력을 증가시다.
      참고: 가장 작은 멤브레인 프로젝션 길이(L0)를빨아 낼 수 있는 가장 낮은 인가 압력(P0)은 기준점 α0(도 7A)을정의합니다. 곡선의 모든 점은 이 기준에 따라 측정됩니다(ΔL = L-L0 및 ΔP = P-P0).
    5. 0.5 -0.8 mN/m에 도달할 때까지 마이크로미터로 흡입 압력을 단계적으로 증가시다. 각 단계에서 5s를 기다렸다가 혀의 스냅 샷을 찍습니다. 낮은 장력에서이 절차는 굽힘 계수의 결정을 가능하게한다.
    6. 레일에 채워진 물의 높이를 조정하여 0.5 mN/m에서 파열 장력까지 흡입 압력을 계속 증가시키십시오(-2에서 -50cm까지)(그림 7B-D). 높은 장력 정권에서이 실험에서, 영역 압축성 계수, 용해 긴장 및 용해 변형이 측정됩니다.
    7. 중요한 통계를 얻기 위해 약 15-20 개의 소포를 늘입니다. 각 마이크로파이펫 흡인 실험은 7~10분 정도 소요됩니다. 혀의 투영 길이, 소포의 직경 및 모세관의 반경을 측정하기 위한 LASAF 소프트웨어를 사용하여 이미지 분석을 수행합니다.
  4. 벤딩 계수, 면적 압축성 계수, 용해 장력 및 용해 변형 측정
    1. 이러한 매개 변수에 액세스하려면 E. Evans12가정한 형식주의를 사용하십시오. 방정식 1에서 멤브레인 위에 가해지는 흡입 압력을 계산합니다.
      Δ P =θ wg (h−h0) (1)
      여기서 g는 중력 가속도(9.8m∙s-2)이고,θw는 물의 밀도(θ = 1 g∙cm-3),h는물탱크의 위치이고h0은 압력이 0과 같은 초기 위치이다.
    2. Laplace 방정식에서 멤브레인 장력을 계산합니다.
      figure-protocol-1(2)
      ΔP는 마이크로파이펫에 대한 흡입 압력, Rp 및 Rv는 각각 마이크로파이펫 및 소포 반경(마이크로파이펫 외부)이다. 멤브레인의 표면적 변형률(α)은 다음과 같이 정의됩니다.
      figure-protocol-2(3)
      figure-protocol-3낮은 흡입 압력에서 소포의 막 영역이되는.
    3. 방정식 412에따라 모세관 팁 내부의 소포의 투영 길이 ΔL 증가에서 α를 계산합니다.
      figure-protocol-4(4)
    4. 매우 낮은 장력 체제하에서, 열 굽힘 기복의 평활화는 명백한 확장을 지배한다. 플롯 ln(σ) 대 α. 낮은 σ 값 (일반적으로 0.001-0.5 mN.m-13)에서,이것은 그 경사가 굽힘 계수, Kb (방정식 5의 첫 번째 용어)에 연결되는 직선을 제공합니다14:
      figure-protocol-5(5)
      참고: 높은 장력(> 0.5mN.m-1)에서는분자 간의 간격이 증가하여 멤브레인 기복이 완전히 억제되고 멤브레인 영역이 증가합니다. 이 정권에서, 수학식 5의 두 번째 용어는 영역 압축성 계수 Ka (그림 8 및 그림 9)에대한 액세스를 지배하고 제공합니다.

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결과

앞서 언급한 프로토콜을 통해 우리는 인지질에서 얻은 다른 합성 거대 단일 라멜라 소포 (GUV)를 연구했습니다 : 2-oleoyl-1-팔미토일 -sn-glycero-3-phophocholine (POPC), 삼중합체: 폴리 (에틸렌 옥사이드)-b-Poly (디메틸실록산)-b-폴리(에틸렌옥사이드) (PEO12-b-PDMS43-b-PEO12)이전 연구에서 합성된13,및 디블록 공중합체 폴리(디메틸실록산)-b-폴리( 에틸렌옥사이드) (PDMS27-b-PEO17). 인지질 POPC를 가진 삼중블록 공중합체 PEO8-b-PDMS22-b-PEO8의 협회가 생성된 GHUV(Gia...

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토론

마이크로파이펫 코팅은 신뢰할 수 있는 측정을 얻기 위한 핵심 포인트 중 하나입니다. 마이크로파이펫에 소포의 부착을 방지해야 하며, 코팅은 BSA, β-카제인 또는 서파실과 함께 문헌17,18,19,20,21에서일반적으로 사용된다. 코팅 절차의 세부 사항은 거의 언급되지 않습니다.

BSA의 용해는 좋은 용해화를 달성하기 위해 교반 하에서 적어도 4 시간 동안 수행되어야한다. 그럼에도 불구하고, 여과 단계는 여전히 마이크로파이펫 팁을 방해할 수 있는 임의의 응집체를 제거하기 위해 요구된다. BSA가 잘 용해되지 않은 경우, 그것의 대부분은 여과에 의해 제거되며, 코팅은 효과가없을 것입니다. 이상...

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공개 사항

저자는 공개 할 것이 없다.

감사의 글

저자는 감사하게 금융 지원 (ANR Sysa)에 대한 ANR을 인정합니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
마이크로피펫 설계에 필요한 장비 및 재료
borosilicate Glass CapillariesWorld Precision Instruments1B100-4외경 및 내경 각각 1mm 및 0.58mm.
Sutter Instrument Co.를설치했습니다FB255B2.5mm*2.5mm 상자 필라멘트
화염/갈색 마이크로피펫 풀러셔터 계기 Co.모델 P-97
MicroforgeNARISHGE Co.MF-9002개의 대물렌즈(10x 및 32x)가 장착된
BSA로 피펫 팁을 코팅하기 위한 재료
소 혈청 알부민 분획 V(BSA)시그마-알드리치10735078001
일회용 1ml 주사기 Luer TipCodan62.1612
일회용 10ml 주사기 Luer TipCodan626616
일회용 5 ml 주사기 Luer TipCodan62.5607
일회용 아세테이트 셀룰로오스 필터Cluzeau Info LaboL5003SPAPore size: 0.22µ m, 직경 : 25mm
유연한 용융 실리카 모세관 튜브Polymicro 기술.TSP530660내경 536µ m, 외경 660&마이크로; m,
포도당시그마 - AldrichG5767
주사기 500 &마이크로; L luer Lock GASTIGHTHamilton Syringe Company1750
시험관 회전 믹서Labinco28210109
Micromanipulation 설정
알루미늄 광학 레일, 1000mm 길이, M4 나사, X48 시리즈Newport
감쇠 광학 테이블Newport외부 진동을 방지하기 위해 현미경의 지지대로 사용됩니다.
MicromanipulatorEppendorfPatchman NP 2모듈 유닛(X, Y 및 Z 이동을 위한 모터 유닛)은 어댑터를 통해 도립 현미경에 장착됩니다.
마이크로미터Mitutoyo Corporation350-354-10Digimatic LCD 마이크로미터 헤드 25,4mm 범위 0,001mm
플렉시글라스 물통(100ml)집에서 만든
TCS SP5 도립 컨포칼 현미경(DMI6000)에는 공진 스캐너와 침수 대물렌즈(HCX APO L 40x/0.80 WU-V-I)가 장착되어 있습니다.Leica
X48 레일 캐리어 80 mm 길이, 1/4-20, 8-32 및 4-40 스레드포함 Newport
자당 및 양서류 용액 준비용 재료
2-Oleoyl-1-palmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholineSigma-Aldrich
클로로포름VWR22711.244
L-&알파;-포스파티딜에탄올아민-N-(리사민 로다민 B 설포닐)시그마-알드리치810146C로다민 태그 지질
자당 시그마-알드리치S7903
Electroformation 설정
10 µ L 유리 모세관 링 캡Hirschmann9600110
일회용 1ml 주사기 Luer TipCodan62.1612
H 그리스Apiezon ApiezonH 그리스실리콘 프리 그리스
인듐 주석 산화물 코팅 유리 슬라이드Sigma-Aldrich703184
NeedleTerumoAN2138R10.8 x 38mm
저항계(멀티미터)VoltcraftVC140
톨루엔VWR28676.297
전압 발생기Keysight33210A
필라멘트는 .

참고문헌

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