여기서, 우리는 실리콘 오일의 내카메라 주입에 의해 마우스 눈에 안구 고혈압 과 녹내장 신경 변성을 유도하는 프로토콜을 제시하고 전방 챔버에서 실리콘 오일 제거를위한 절차는 높은 안구 압력을 반환 정상적인.
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이 논문에서
요약
초록
높은 안구 내 압력 (IOP)은 녹내장에 대한 잘 문서화 된 위험 요소입니다. 여기에서 우리는 인간 vitreoretinal 수술에 있는 탐포네이드 에이전트로 실리콘 기름 (SO)를 사용하는 수술 후 합병증을 모방하는 마우스에 있는 안정한 IOP 고도를 일관되게 유도하기 위한 참신하고 효과적인 방법을 기술합니다. 이 프로토콜에서, SO는 동공을 차단하고 수성 유머의 유입을 방지하기 위해 마우스 눈의 전방 챔버에 주입된다. 후방 챔버는 수성 유머를 축적하고 이것은 차례로 후방 세그먼트의 IOP를 증가시킨다. 단일 SO 주사는 신뢰할 수 있는 생산, 충분 한, 그리고 안정적인 IOP 상승, 중요 한 녹 내장 신경 변성을 유도. 이 모형은 안과 진료소에 있는 이차 녹내장의 참된 복제입니다. 임상 적 설정을 더 모방하기 위해, SO는 배수 경로를 재개하고 전방 챔버의 각도로 trabecular 메쉬 워크 (TM)를 통해 배수되는 수성 유머의 유입을 허용하기 위해 전방 챔버에서 제거 될 수 있습니다. IOP는 빨리 정상으로 돌아오기 때문에, 모형은 녹내장 망막 신경절 세포에 IOP를 낮추는 효력을 시험하기 위하여 이용될 수 있습니다. 이 방법은 간단하고, 특수 장비 또는 반복 절차가 필요하지 않으며, 임상 상황을 면밀히 시뮬레이션하며 다양한 동물 종에 적용 될 수 있습니다. 그러나 사소한 수정이 필요할 수 있습니다.
서론
망막 신경절 세포 (RGCs)와 그들의 축세포의 점진적 인 손실은 녹내장의 특징이며,망막1의일반적인 신경 퇴행성 질환입니다. 2040년2월까지40~80세 의 1억 명 이상이 영향을 미칠 것입니다. IOP는 녹내장의 발달과 진행에 있는 유일한 변경 가능한 위험 요소입니다. 녹내장의 병인, 진행 및 잠재적 인 치료법을 탐구하기 위해서는 인간 환자의 주요 특징을 복제하는 신뢰할 수 있고 재현 가능하며 유도 할 수없는 실험용 안구 고혈압 / 녹내장 모델이 필수적입니다.
IOP는 후방 챔버내의 섬모 체로부터 전방 챔버로 수성 유머 유입에 의존하고 전방 챔버의 각도에서 근방 메쉬워크(TM)를 통해 유출된다. 정상 상태에 도달하면 IOP가 유지됩니다. 유입이 유출을 초과하거나 적으면 IOP는 각각 상승 또는 하락합니다. 전방 챔버의 각도를 폐색하거나 TM을 손상시킴으로써 수성 유출을 감소시킴으로써, 여러 녹내장 모델이3,4,5,6,
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프로토콜
모든 절차는 스탠포드 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다.
1. SO의 카메라 내 주입에 의한 안구 고혈압 유도
- 피펫 풀러로 유리 모세관을 당겨 마이크로파이펫을 생성하여 카메라 내 SO 주입을 위한 유리 마이크로파이펫을 준비한다. 마이크로파이펫 끝의 개구부를 절단하고 마이크로그라인더 베벨링 기계로 팁을 더욱 선명하게 하여 35°-40° 경사를 만듭니다.
- 경사의 가장자리를 연마하고 물로 세척하여 모든 파편을 제거합니다. 사용하기 전에 마이크로 파이펫을 오토클레이브하십시오.
- 각막 항목에 대한 paracentesis 바늘을 준비합니다. 이렇게 하려면 32G 바늘을 Luer 잠금 장치5mL 주사기에 부착하고 테이프로 더 고정하십시오. 바늘 베벨 팁을 30°에서 위로 구부립니다.
- SO 인젝터를 먼저 10 mL 주사기에 무딘 말단 18 G 바늘을 부착하고 고정시킴으로써 준비한다. 그런 다음 한쪽 끝에 18G 바늘이있는 플라스틱 튜브를 부착하고 다른 쪽 끝을 통해 필요에 따라 SO로 채웁니다.
- 멸균 된 마이크로 파이펫을 플라스틱 튜브에 부착하고 주사기 플런저를 밀어 전체 마이크로 파이펫을 SO로 채웁니다.
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결과
곧 주입 후 우리는 SO 방울이 너무 작기 때문에 안정적인 안구 고혈압을 생성하지 않는 마우스를 쉽게 식별 할 수 있습니다 (≤1.5 mm)13. 이들 동물은 후속 실험에서 제외된다. 주사 절차에 따라, SO 주입 마우스의 80% 이상은 1.6 mm 보다 큰 작은 물방울로 끝납니다. 우리는 단 하나 SO 주입 후에 8 주 동안 이 마우스 눈의 IOP를 일주일에 한 번 측정했습니다. SO를 수신하는 눈의 IOP는 높게 남아 있었고, 일반적으로 효과적인 동공 차단을 나타내는 반대측 제어 눈의 IOP를 두 배로하였다(도 1). 마우스 각막에 있는 부종은 일반적으로 복구를 위해 2-3 일이 걸리는 내부 카메라 주입 후에 가벼운 해부 현미경의 밑에 검사될 수 있습니다. 동공 팽창은 시간이 걸리고, 하나는 IOP 측정을 복용하기 전에 동공 팽창을 기다려야합니다. 따라서, 우리는 주사 후 너무 빨리 IOP를 측정하지 않으려고. 같은 이유로 IOP.......
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토론
여기에서 우리는 SO의 사내 주입에 의하여 마우스 눈에서 지속적인 IOP 고도를 유도하기 위한 간단하고 효과적인 절차를 보여줍니다. 이 절차는 현미경의 밑에 현미경 절제술에 있는 경험이 있는 누군가에 의해 빨리 배울 수 있습니다. 실패의 주요 잠재적인 위험은 각막 절개에서 SO의 누설입니다. 그러나 SO를 사용하는 장점 중 하나는 오일 액적이 눈에 보이고 측정 가능하기 때문에 주사 직후 안정된 안구 고혈압을 유발하고 후속 실험에서 제외하기에는 너무 작은 방울을 받은 마우스를 쉽게 식별할 수 있다는 것입니다. 우리는 일상적으로 80%의 성공률을 달성하고 작은 SO 액적 (≤1.5 mm)13때문에 마우스의 대략 20%를 제외했습니다. 그러나, 경사진 끝으로 전방 챔버로 각막을 관통하기 전에 각막의 층 내에서 상대적으로 긴 터널 (0.3 mm)을 만들 수있는 경험이 풍부한 외과 의사는 거의 외부 개구부보다 훨씬 작은 각막 터널의 내부 개방을함으로써 SO 누출을 방지 할 수 있습니다. 따라서 .......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없다.
감사의 글
이 작품은 NIH 보조금 EY024932, EY023295, EY028106에 의해 지원됩니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 0.5 % 프로 파라카인 염산염 | Akorn, Somerset | ||
| 10mL syinge | BD | Luer-Lok Tip | |
| 18G 바늘 | BD | (일반 베벨 포함), 바늘 길이 : 25.4 mm | |
| 2,2,2- 트리 브로 모에탄올 (Avertin) | Fisher Scientific | CAS # 75-80-9 | 50g |
| 32G 나노 | BD | 320122 | BD 나노 초극세 펜 바늘 -32G 4mm |
| 33G 안과 바늘 | TSK/ VWR | TSK3313/ 10147-200 | |
| 5mL syinge | BD | Luer-Lok Tip | |
| AnaSed Injection(xylazine) | Butler Schein | 100mg/ml, 50ml | |
| 인공 눈물 | Alcon Laboratories | 300651431414 | Systane Ultra Lubricant 점안액 |
| BSS PLUS 관개 솔루션 | Alcon Laboratories | ||
| 듀얼 스테이지 유리 마이크로 피펫 풀러 | NARISHIGE | PC-10 | |
| EZ-7000 클래식 시스템 | EZ 시스템 | ||
| Isoflurane | VetOne | 502017 | isoflurane, USP, 250ml / bottle |
| IV 관리 세트 | EXELint / Fisher | 29081 | |
| 케타민 염산염 주입 | VEDCO | 50989-996-06 | 케타베드 100mg/ml * 10ml |
| microgrind 베벨 기계 | NARISHIGE | EG-401 | |
| 소형 EVA 튜빙 | McMaster-Carr | 1883T4 | 0.05 "ID, 0.09"OD, 10 피트 길이 |
| 실리콘 오일 (SILIKON) | Alcon Laboratories | 8065601185 | 1,000 mPa.s |
| 표준 유리 모세 혈관 | WPI / Fisher | 1B150-4 | 4 in. (100mm) OD 1.5mm ID 0.84mm |
| TonoLab 안압계 | Colonial Medical Supply, 핀란드 | ||
| 수의학 항생제 연고 | Dechra Veterinary | 1223RX | BNP 안과 연고, Vetropolycin |
참고문헌
- Chang, E. E., Goldberg, J. L. Glaucoma 2.0: neuroprotection, neuroregeneration, neuroenhancement. Ophthalmology. 119 (5), 979-986 (2012).
- Tham, Y. C., et al. Global prevalence of glaucoma and projections of glaucoma ....
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재인쇄 및 허가
