카달 정맥 포도당 주사에 의한 파라바이오틱 마우스의 공유 혈액 공급 확립 감지

요약

여기에서 우리는 포도당의 꼬리 정맥 주입을 통해 2개의 parabionts의 공유 혈액 순환의 성공적인 설치를 검출하는 새로운 방법을 기술합니다, 이는 최소한의 손상을 일으키는 원인이 되고 parabionts에 치명적이지 않습니다.

초록

파라바이오시스는 신체의 세로 축을 따라 두 마리의 평행 동물을 외과적으로 결합시키는 실험적인 방법입니다. 우리는 포도당의 꼬리 정맥 주입에 의하여 parabionts에 있는 혈액 키메증의 성공적인 설치를 검출하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 파라바이오틱 마우스를 시공하였다. 포도당은 꼬리 정맥을 통해 기증자 마우스에 주입되었고, 혈당 수치의 변동은 서로 다른 시점에서 혈액 글루컴터를 사용하여 두 마우스모두에서 측정되었다. 우리의 결과는 포도당 주입 후에, 기증자 마우스에 있는 혈액 포도당 수준이 1 분 후에 급격하게 증가하고 그 후에 천천히 감소한다는 것을 보여주었습니다. 한편, 수용자 마우스의 혈당 수준은 주사 후 15분 만에 정점을 찍었다. 유사한 결과 에반스 블루와 함께 얻은, 포도 당에 대 한 긍정적인 제어로 사용. 혈액 포도당 수준의 동기 변동은 두 마우스 사이의 혈류가 성공적으로 확립되었다는 것을 나타냅니다.

서론

파라바이오시스는 두 개의 살아있는 유기체가 외과적으로 결합되어 공유^{순환계통1을}가진 단일 생리시스템으로 발전하는 모델링 방법이다. 이러한 모델은 한 개인에 의해 생성된 물질이 공유 순환 계통을 통해 동시에 두 동물에 작용할 수 있다는 이점 때문에 생리학을 연구하는 데 널리 사용되어 왔다. 1800년대 중반 폴^버트(PaulBert 2)가 파라바이오틱 실험을 개척한 이래, 파라바이오틱 모델을 만드는 방법이 표준화되었다. 그러나 혈액 키메라의 성공적인 확립을 확인하는 간단하고 편리한 방법이 누락되었습니다. 교차 순환은 0.5% 에반스 청색 염료를 파라비오엔트 중 하나에 주입한 후 마이크로플레이트 판독기를 가진 두 파라비오트의 혈액에서 에반스 블루의 흡광도를 측정함으로써 성공적으로 평가될 수 있다고 보고되었다^3. 또 다른 방법은 각 파라비올트에 CD45.1⁺및 CD45.2⁺-표지된 단핵구를 포함하는 특정 마우스 품종을 필요로 한다. 세포 세포측정은 비장 또는 혈액^4에서단핵구에 있는 2개의 마커의 주파수를 측정하여 혈액 키메라증을 결정하기 위하여 그 때 이용됩니다. 그러나, 이러한 방법은 종종 ....

프로토콜

동물과 그들의 배려를 관련시키는 모든 절차는 하얼빈 의과 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인되었습니다.

참고: 이 방법에 필요한 도구와 장비는 재료 표에나열되어 있습니다.

1. 재료 및 동물의 준비

1. 표준 실험실 동물 공급 업체에서 20 g-25 g 사이의 무게를 가진 C57BL/6 남성 마우스를 주문하십시오.
2. 12 시간 빛의 주기에 마우스를 집: 물과 음식에 광고 libitum 액세스와 24-26 °C에서 12 시간 어둠.

2. 파라바이오시스

1. 0.1 mL/10 g의 농도로 20 g/L 2,2,2-tribromoethanol의 복강 내 주사로 마우스를 마취.
2. 안구 건조를 방지하기 위해 Q-tip으로 안과 연고를 바르십시오.
3. 앞서 설명한 대로 파라바이오시스 절차를^수행5.
   1. 마우스를 척추 위치에 놓습니다. 한 마우스의 왼쪽과 다른 마우스의 오른쪽을 전기 면도기로 무릎 아래 1cm까지 팔꿈치 위 약 1cm에서 시작하십시오. 제모 크림을 사용하여 면도한 ....

결과

6명의 기증자 마우스에서, 혈액 포도당 수준은 꼬리 정맥을 통해포도당 (1.2 g/kg)의 100 μL의 주입 후에 1 분의 평균에서 26.5 μmol/L (173% 증가)로 급격히 증가한 다음 60 분에 13.3 μmol/L로 점차적으로 감소했습니다. 수용자 마우스에서, 혈액 포도 당은 주입 후 천천히 증가하고 15 분 (47 % 증가, 12.2 μmol / L)에서 첫 번째 피크 수준에 도달했습니다. 상기 결과에 기초하여, 순환 키메라에 대한 표준은 다음과 같이 설정하였다: 1) 혈당 수치의 급격한 증가(최소 100% 증가 또는 >20 μmol/L) 포도당 주사 후 1분 이내의 공여자 마우스에서, 2) 주사 후 15분 후에 수용자 마우스에서 혈당 수치가 현저한 증가(최소 37% 증가)(도1).

파라비오.......

토론

파라바이오시스는 실험수단^6,7,8에의해 일반적인 혈관시스템을 확립하기 위해 두 마리의 살아있는 동물을 연결하는 외과적 기법을 말한다. 이 모델의 장점은 한 개인이 생산한 물질이 동시에 두 동물에 작용할 수 있다는 것입니다. 따라서, 파라바이오시스 모델은 관련 질환에서 물질 또는 요인의 역할을 탐구하는데 사용될 수 있으며, 많은 의미 있고 혁신적인 결론을 낳을 수 있다. 그것의 중대한 적용 가치의 관점에서, 모형은 심장 혈관 시스템 질병의 더 나은 이해를 초래했습니다^{8,9,10,11, 12,}

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
곡선 겸자	JZ 수술 기구, 중국	J31340
미세 가위	JZ 수술 기구, 중국	WA1030
바늘 겸자	JZ 수술 기구, 중국	60017961
2.5 mL 주사기	애질런트, 미국	5182-9642
Tribromoethano	Sigma-Aldrich, 미국	T48402-5G
페니실린	Solarbio, 중국	IP0150
트라마돌	Yijishiye, 중국	YJT712520
혈당계	Roche 당뇨병 관리, 인디애나	Accu-Chek 활성 테스트 스트립
Evan's blue Counterstain	Solarbio, 중국	G1810
탈모 크림	Nair, 미국	LL9161
온난화 담요 ( 가열 패드)	Kent Scientific Corp, 미국	TP-22G
전기 면도기	Codos, 중국	CP-5000
3-0,5-0 외과 봉합	상하이 의료 봉합사 바늘 공장, 중국	SYZ 3-0#, SYZ 5-0#

사