쥐 경동맥 풍선 부상은 죽상 경화성 혈관에서 혈류를 복원하기 위해 수행 된 임상 혈관 성형술 절차를 모방합니다. 이 모델은 동맥 벽을 손상시키고 내피 세포의 친밀감 층을 비명하여 동맥 손상 반응을 유도하여 궁극적으로 리모델링 및 친밀한 과플라스틱 반응을 일으킵니다.
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이 논문에서
요약
초록
심혈 관 질환은 죽상 경화증으로 인해 전 세계적으로 사망과 장애의 주요 원인으로 남아 있습니다. 죽상 경화성 플라크는 동맥의 발광 표면적을 좁히어 장기및 탈조직에 대한 적절한 혈류를 줄입니다. 임상적으로, 풍선 혈관 성형술과 같은 변조 절차는 스텐트 배치의 유무에 관계없이 혈류를 회복하는 것을 목표로합니다. 이러한 절차는 플라크 부담을 줄여 혈류를 재확립하지만, 동맥 치유 반응을 시작하는 혈관 벽을 손상시킵니다. 장기간 치유 반응은 동맥 재결석을 일으키거나 다시 좁히며 궁극적으로 이러한 재혈관화 절차의 장기적인 성공을 제한합니다. 따라서, 전임상 동물 모델은 레스테노시스를 구동하는 병리학적 메커니즘을 분석하는 데 필수적이며, 새로운 치료 전략을 시험할 기회를 제공한다. Murine 모델은 대형 동물 모델보다 저렴하고 조작하기 쉽습니다. 풍선 또는 와이어 부상은 뮤린 모델에 사용되는 두 가지 일반적으로 허용되는 부상 양식입니다. 특히 풍선 상해 모델은 임상 혈관 성형술 절차를 모방하고 restenosis의 발달을 위한 동맥에 적당한 손상을 일으키는 원인이 됩니다. 본원에서 우리는 변형된 압력 조절 쥐 경동맥 풍선 상해 모형을 수행하고 조직학적으로 분석하기 위한 수술 세부 사항을 기술합니다. 추가적으로, 이 프로토콜은 치료의 현지 periadventitial 응용이 어떻게 신자극성 과대증을 억제하기 위하여 이용될 수 있는지 강조합니다. 마지막으로, 우리는 3 차원으로 동맥 상해를 화상 진찰하고 시각화하기위한 새로운 접근법으로 가벼운 시트 형광 현미경 검사를 제시합니다.
서론
심혈관 질환(CVD)은 전 세계적으로 사망의 주요 원인으로 남아있다. 죽상 동맥 경화증은 대부분의 CVD 관련 이환율및 사망의 근본 원인입니다. 죽상 동맥 경화증은 좁은 루멘을 초래하는 동맥 내부의 플라크가 축적되어 장기및 탈구 조직에 적절한 혈액 관류를 방해합니다2. 심한 죽상 동맥 경화증 치료에 대 한 임상 개입 포함 풍선 혈관 성형술 또는 스텐트 배치 없이. 이 개입은 플라크의 사이트에 풍선 카테터를 진행하고, 동맥 벽에 플라크를 압축풍선을 팽창, 발광 영역을 확대 포함. 그러나 이 절차는 동맥 손상 반응을 시동하는 동맥을 손상시다3. 이 상해 반응의 장기간 활성화는 동맥 재분비, 또는 재협화, 신자극성 증식 및 혈관 리모델링에 이차로 이끌어 냅니다. 혈관 성형술 동안 친밀감 층은 즉각적인 혈소판 모집 및 국소 염증으로 이어지는 내피 세포의 탈모된다. 국시 신호는 혈관 원활한 근육 세포 (VSMC) 및 출현 섬유 아세포에 있는 현상 변을 유도합니다. 이것은 VSMC와 섬유아세포의 이주 및 증식으로 이끌어 내고, 신동성증식4,5로이끌어 냅니다. 순환 선조 세....
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프로토콜
여기에 설명 된 모든 방법은 채플 힐에서 노스 캐롤라이나 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다.
1. 수술 전 절차
- 수술 기구를 살균합니다. 수술 전에 모든 수술 기구를 자동 클로브하십시오. 같은 날 여러 번 수술을 하는 경우, 드라이 비드 멸균제를 사용하여 수술 사이에 기기를 멸균하십시오.
- 25% 물루론-127 젤 (멸균 증류수로 희석)로 치료 준비.
- 2F 포가티 풍선 카테터를 insufflator에 설치하고 카테터의 풍선 끝을 식염수 용액으로 채워진 1 mL 주사기에 놓습니다.
- 5% 이소플루란으로 챔버에 쥐를 배치하여 마취를 유도한다.
- 챔버에서 쥐를 제거하고 쥐의 무게를 기록합니다. 모발 클리퍼를 사용하여 복부 목 부위의 모피를 면도합니다.
- 마취의 유도를 보장하기 위해 5 % 이소플루란으로 다시 챔버에 쥐를 배치합니다.
- 쥐 의 얼굴이 외과 의사를 향해 되도록, 수술 플랫폼에 쥐 supine을 배치, 코 콘에 얼굴을 삽입.
- 흡입 마취를 1.5%로 감소시다. 4피트 모두에 발가락 핀치 반사로 마취의 깊이를 확인합니다.
- 네 다리를 ....
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결과
그림 1은 이 수술을 수행하는 데 사용되는 모든 재료와 수술 도구를 보여줍니다. 헤마톡시린 & 에오신 (H&E) 2 주 부상 동맥 단면의 염색은 신자극증의 명확한 시각화를 허용합니다. 그림 2는 건강하고, 다치고, 취급된 동맥의 H&E 염색 동맥 단면의 대표적인 영상을 보여줍니다. 도 2는 또한 널리 사용되는 이미지 프로세싱 소프트웨어인 ImageJ를 사용하여 부상당한 동맥에서 신자극의 수준을 정량화하는 방법을 설명합니다. 이러한 접근법을 이용하여, 네오인티마의 둘레뿐만 아니라 내부 및 외부 탄성 라미나는 각 영역을 정량화하기 위해 추적된다. 우리가 설명하는 압력 통제 세그먼트 상해 방법은 0.29의 표준 편차와 0.80의 미디어 비율에 친밀감결과로 초래합니다 (2 다른 외과 의사 및 n=11 쥐). 플루론에서 CA의 periadventitial 응.......
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토론
쥐 경동맥 풍선 부상은 가장 광범위하게 사용되고 연구 된 restenosis 동물 모델 중 하나입니다. 원래 풍선 상해 모델3과 변형 된 압력 제어 세그먼트 상해변화(10)는 인간에서도 발생하는 동맥 상해 반응의 많은 측면을 통보했으며, 몇 가지 제한사항은 피브린이 풍부한 혈전이 거의 발생하지 않으며 국소 염증은 콜레스테롤 토끼 또는 돼지 모델9,22와같은 다른 부상 모델에 비해 최소화된다. 쥐는 또한 동맥 상해 반응의 다른 양상을 정량화하고 분석하기 위하여 다른 시간 점에서 희생될 수 있습니다. 예를 들면, 이전 시간 점은 세포 증식, 혈관 매끄러운 근육 세포의 현상전 스위치 및 초기 면역 반응과 같은 상해에 초기 반응의 양상을 연구하기 위하여 이용될 수 있습니다. 우리는 이전에 백혈구 침투및 세포 증식이 3 일과 1 주
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공개 사항
저자는이 원고의 출판에 대한 이해의 충돌이 없다고 선언합니다.
감사의 글
N.E.B.는 국립 환경 보건 과학 연구소 (5T32ES007126-35, 2018)와 미국 심장 협회 전 박사 과정 펠로우십 (20PRE35120321)의 교육 보조금에 의해 지원되었습니다. E.S.M.B는 UNC 임상 및 번역 과학 상-K12 학자 프로그램(KL2TR002490, 2018),국립 심장, 폐 및 혈액 연구소(K01HL145354)가 부분적으로 지원하는 KL2 학자입니다. 저자는 LSFM을 지원한 UNC 현미경 서비스 연구소의 파블로 아리엘 박사에게 감사드립니다. 광시트 형광 현미경 검사는 현미경 서비스 실험실에서 수행되었다. 현미경 서비스 실험실, 병리학 및 실험실 의학의 학과는 UNC Lineberger 종합 암 센터에 P30 CA016086 암 센터 핵심 지원 교부금에 의해 부분적으로 지원됩니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 1 mL 주사기 | Fisher | 14955450 | |
| 1 mL 주사기와 바늘 BD | 309626 | ||
| 2 French Fogarty 풍선 색전 절제술 카테터 | Edwards LifeSciences | 120602F | |
| 4-0 Ethilon (나일론) 봉합사 | Ethicon Inc | 662H | |
| 4-0 Vicryl 봉합 | Ethicon Inc | J214H | |
| 7-0 Prolene 봉합사 | Ethicon Inc | 8800H | |
| 70% 에틸 알코올 | |||
| 안티 래빗 Alexa Fluor 647 | Thermo Fisher Scientific | A21245 | |
| 아트로핀 황산염 | Vedco Inc | 수의학용 | |
| 면봉 | Puritan | 806-WC | |
| 곡선형 지혈 | 정밀 과학 도구 | 13009-12 | |
| 미세 곡선 집게 | 미세 과학 도구 | 11203-25 | |
| 미세 가위 | 미세 과학 도구 | 14090-11 | |
| 거즈 | Covidien | 2252 | |
| IHC-Tek 희석제(pH 7.4) | IHC World | IW-1000 | |
| Insufflator | Merit Medical | IN4130 | |
| 요오드 용액 | |||
| 수의학용 윤활 눈 연고 | Dechra | ||
| Mayo 가위 | Fine Science Tools | 14010-15 | |
| Micro Serrefines | Fine Science Tools | 18055-05 | |
| Microdissection Scissors | Fine Science Tools | 15004-08 | |
| Micro-Serrefine 클램프 적용 겸 | Fine Science Tools | 18057-14 | |
| 바늘 홀더 | Fine Science Tools | 12003-15 | |
| Pluronic-127 (멸균 물에 희석) | Sigma-Aldrich | P2443 | 25 % 준비 |
| 토끼 Anti-CD31 | Abcam | ab28364 | |
| 견인기 | 구부러진 종이 클립이 잘 작동 | ||
| Rimadyl (Carprofen) | Zoetis Inc | 수의학 용 | |
| 식염수 용액 | |||
| 표준 펜치 | 파인 사이언스 도구 | 11006-12 | |
| 멸균 드레이프 | Dynarex | 4410 | |
| T-핀 |
참고문헌
- American Heart Association. Cardiovascular Disease: A Costly Burden for America, Projections Through 2035. American Heart Association CVD Burden Report. , (2017).
- Singh, R. B., Mengi, S. A., Xu, Y. J., Arneja, A. S., Dhalla, N. S. Pathoge....
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재인쇄 및 허가
