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방법 논문

관상 동맥 혈관 성형술 후 심혈관 예후의 관상 동맥 전구 세포 및 수용성 바이오마커

5.1K 조회수

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DOI:

10.3791/60504

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2020년 1월 28일

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이 논문에서

요약

관상 동맥 혈관 성형술 후 심장 혈관 예후에 영향을 미치는 주요 불리한 심혈관 사건의 개발은 관상 동맥 손상 및 혈관 수리의 정도에 의해 영향을 받습니다. 새로운 관상 동맥 세포 및 수용성 바이오 마커의 사용은 혈관 손상 및 수리에 반응성으로 MACEs 및 예후의 발달을 예측하는 데 유용합니다.

초록

주요 불리한 심장 혈관 사건 (MACEs) 관상 동맥 허혈성 상해 때문에 관상 동맥 혈관 성형술을 겪고 있는 환자의 심장 혈관 예후에 부정적인 영향을 미칩니다. 관상 동맥 손상의 정도 및 혈관 수선 기전은 MACEs의 미래 발달에 영향을 미치는 요인입니다. 플라크 특성 및 관상 동맥 복잡성과 같은 본질적인 혈관 특징은 MACEs에 대한 예후 정보를 입증했습니다. 그러나 관상 동맥 내 순환 바이오마커의 사용은 관상 동맥 손상 및 수리와 관련된 동적 메커니즘을 보다 밀접하게 반영하기 때문에 MACE의 조기 식별 및 예후를 위한 편리한 방법으로 가정되었습니다. 단핵 전구 세포 (MPC)의 하위 집단의 수뿐만 아니라 염증, 세포 부착 및 수리를 반영하는 가용성 분자의 농도와 같은 혈관 성형술 중 관상 동맥 순환 바이오 마커의 결정은 향후 개발 및 MACEs의 예후 평가 6 개월 후 관상 동맥 혈관 성형술. 이 방법은 MACEs의 예측과 환자의 위험 계층화에 적용 될 수있는 심혈관 예후의 예측에 관한 말초 혈액 순환 바이오 마커보다 번역 특성과 더 나은 성능에 의해 강조된다 관상 동맥 질환이 혈관 성형술을 겪고있습니다.

서론

관상 동맥 혈관 성형술 및 스텐트 삽입은 관상 동맥 질환 (CAD)을 가진 환자를위한 인양 절차를 나타냅니다. 그러나, 심장 혈관 죽음, 심근 경색, 관상 동맥 재협착 및 협심증 또는 보상 심부전의 에피소드를 포함하여 중요한 불리한 심장 혈관 사건 (MACEs는, 관상 동맥 내정간섭 후에 달, 병원에 예정되지 않은 방문을 자극하는 생길 수 있습니다. MACEs는 전 세계적으로 일반적이며, 그들의 morbi 사망률은 높은1.

관상 동맥 허혈성 상해는 그들의 분화 능력 및/또는 혈관 회복 잠재력 때문에 MPC의 동원을 관련시키는 초기 혈관 반응 및 회복 기계장치를 유도합니다, 세포 간 접착 분자 같이 수용성 분자의 생산 뿐만 아니라 (ICAMs), 매트릭스 금속 loloproteinases (MMPs), 및 반응성 산소 종, 세포 접착, 반사성, 조직 을 반영하는. 플라크 특성 및 관상 동맥 복잡성과 같은 본질적인 혈관 특징이 MACE를 예측하는 데 사용되었지만, 일부 연구는 관상 동맥 내피에서 발생하는 부상 및 수리 메커니즘과 관련된 바이오 마커가 관상 동맥 혈관 성형술2,

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프로토콜

이 프로토콜은 인간 연구 윤리 위원회의 제도적 지침을 충족합니다.

1. 관상 동맥 혈관 조영술, 초음파 및 혈액 샘플링

  1. 관상 동맥 개입 전에 기준 임상 및 인구 통계 학적 정보를 요청하십시오. 개인의 데이터를 수집: 나이, 성별, 현재 흡연 상태, 체질량 지수 (BMI), 고혈압, 이상지질혈증, 당뇨병 mellitus, 약물, 현재 관상 동맥 혈관 조영술에 대한 표시.
  2. 방사형 접근법을 사용하여 심장 카테터화를 통해 관상 동맥 혈관 조영술을 수행합니다. 이 절차는 전문 심장 전문의가 혈역학 실에서 형광 투시경 가이드하에 수행해야합니다.
    참고: 귀중한 선박을 식별합니다. 본 연구를 위해, 귀중한 혈관은 1.5 mm 보다 큰 단면도및 50% 이상의 루멘 협착을 가진 동맥으로 정의되었습니다.
  3. 혈관 내 초음파 카테터를 관심 영역으로 진행하고 이미지를 기록합니다. 적절한 소프트웨어를 사용하여 가장 작은 발광 영역을 찾고 측정합니다.
  4. 관상 동맥 카테터를 사용하여 플라크에 가장 가까운 위치에서 10 mL의 혈액을 수집하십시오.
  5. 환자 퇴원 후, 정기적인 의학적 평가를 예약하여 연구 종점을 추적합니다. 전화 연락이 불가능하거나 의사 방문이 2개월 이상 지연되는 경우,....

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결과

관상동맥, 정맥부비동 및 말초혈액을 52명의 환자로부터 채취하여 관상동맥혈관조영술을 시행하였다(도1)와고혈압 및 이상지질혈증의 높은 유병률을 보였다. 임상 후속 조치에서 11명(21.1%)이 MACEs는 관상 동맥 혈관 조영술 후 6 개월 발생 : 죽음 (n = 1), 병원 출석을 필요로하는 협심증 (n = 6), 심근 경색 (n = 2), 및 / 또는 심부전의 증거 (n = 4).

대부분의 MFC의 기준관 상동맥 농도는 MPC 하위 집단 CD34+CD133+ 및 CD45+CD133+CD133+CD184+에서더 큰 감소와 함께 MACEs(그림 4)를

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토론

영향 받은 관상 동맥에서 혈액 수집은 어려울 지도 모릅니다. 때로는 관상 동맥에 거의 접근 할 수 없습니다. 이 경우 정맥 부비동에서 샘플링하는 것이 대안이 될 수 있습니다. 우리는 관상 동맥에 있는 순환 biomarkers 대 정맥 부비동에 있는 비교하는 유효성 검사 시험을, 유의한 다름 없이 수행했습니다. 그러나, 순환 바이오마커의 성능은 관상 동맥 샘플링에 대해서만 검증되었다. 따라서 정맥 부비동으로부터 얻은 바이오마커의 성능은 아직 탐구되어야 합니다.

혈액 수집 후 처음 3 시간 이내에 MpC에 대한 샘플을 처리하는 것이 가장 좋습니다. 따라서 심장학 팀과 실험실 연구자 간에 좋은 의사 소통을 확립해야합니다. MPC 격리 동안, MPC 펠릿을 세척할 때 밀도 구배 준비 중에 혈액 샘플을 증착할 때 주의를 기울여야 합니다. 마지막으로, 편의를 위해, 우리는 항상 세포 분석 튜브로 세포를 전송하고, 1 차 항체를 추가하고, 세포를 4 °C에서 밤새 고정 및 저장하고, 다음 날.......

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공개 사항

저자는 공개 할 것이 없다.

감사의 글

저자는 기관 프로그램 E015의 지원에 감사드립니다; 및 폰도 섹터 FOSSIS-CONACYT, SALUD-2014-1-233947.

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
BSARoche10735086001소 혈청 알부민(BSA)을 완충제, 안정제, 표준 및 혼합용입니다.
캘리브레이션 비드Miltenyi Biotec / MACS# 130-093-607MACQuant 캘리브레이션 비드는 0.05 % 아지드 나트륨을 함유 한 수용액으로 공급됩니다. 최대 100 회 테스트를위한 3.5 ml
CD133 / 1 (AC133) -PEMilteny Biotec / MACS# 130-080-801에서 R-Phycoerythrin과 결합 된 항체
단클론, 동형 재조합 인간 IgG1, 공액
CD309 (VEGFR-2/KDR)-APCMiltenyi Biotec / MACS#130-093-601PBS/EDTA 완충액
CD34-FITCMiltenyi Biotec / MACS#130-081-001단클론 항체 클론 AC136은 CD34
CD45- VioBlueMiltenyi Biotec / MACS#130-092-880의 클래스 III 에피토프를 확인합니다.단클론 CD45 항체, human conjugated
Conical TubesThermo SCIENTIFIC#33965115ml 원뿔형 원심분리기 튜브
FALCON Corning Brand#3520525 mL 폴리스티렌 라운드 바닥 튜브.12x75 스타일. 메 마른.
EDTABIO-RAD#161-0729중금속, (Pb로서) < 10ppm, 철 < 0.01%, 그대로 < 1ppm, 불용성 < 0.005%
Improved Neubauer브랜드 없음카탈로그 번호 없음세포 계수를 위한 혈구계. (범위 0.1000mm, 0.0025mm2)
K2 EDTA 혈액 수집 튜브BD Vacutainer#367863라일락 플라스틱 진공 튜브(K2E) 10.8mg, 6mL.
LymphoprepStemcell Technologies01-63-12-002-A멸균 및 내독소의 존재 여부를 확인했습니다. 밀도 : 1.077± 0.001g/mL
파라포름알데히드SIGMA-ALDRICH생물학적 시료 고정, (분말, 95%)
피펫 이송 1,3mLCRM GlobePF1016, PF1015이송 피펫은 더 높은 정확도로 액체 이송을 용이하게 하는 도구입니다.
시험관KIMBLE CHASE45060 13100내열 시험관. 크기/캡 13 x 100 mm
PBS / EDTA 완충액 CD184 (CXCR4) -PE-VIO770 Miltenyi Biotec / MACS # 130-103-798#SZBF0920V

참고문헌

  1. Cassar, A., Holmes, D. R. Jr, Rihal, C. S., Gersh, B. J. Chronic coronary artery disease: diagnosis and management. Mayo Clinic Proceedings. 84 (12), 1130-1146 (2009).
  2. Regueiro, A., et al.

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