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방법 논문

자유롭게 수영 물고기에서 이동 식 Tetrodes에 의해 뉴런의 무선 전기 생리적 기록

8.7K 조회수

DOI:

10.3791/60524

2019년 11월 26일

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

자유롭게 수영하는 금붕어의 뇌에서 세포 외 신경 신호를 기록하기위한 새로운 무선 기술이 제시됩니다. 기록 장치는 두 개의 테트로데스, 마이크로 드라이브, 신경 데이터 로거 및 방수 케이스로 구성됩니다. 데이터 로거와 커넥터를 제외한 모든 부품은 맞춤 제작됩니다.

초록

물고기는 모든 척추 동물의 대부분을 구성하지만 물고기 행동을 지배하는 신경 메커니즘은 대부분 알 수없는 남아있다. 자유롭게 움직이는 물고기에서 뇌 활동을 기록하는 능력은 상당히 물고기 행동의 신경 기초에 연구를 진행합니다. 또한, 뇌의 기록 위치를 정밀하게 제어하는 것은 물고기 뇌의 영역에서 조정 된 신경 활동을 연구하는 데 중요합니다. 여기서는 자유롭게 수영하는 물고기의 뇌에서 무선으로 기록하는 기술을 제시하면서 기록 위치의 깊이를 제어합니다. 이 시스템은 마이크로 드라이브 제어 테트로드에 의해 기록 위치를 조정할 수있는 새로운 수성 호환 임플란트와 관련된 신경 로거를 기반으로합니다. 시스템의 기능은 금붕어의 텔렌세팔론에서 녹음을 통해 설명된다.

서론

물고기는 척추동물의 가장 크고 가장 다양한 그룹이며, 다른 척추동물과 마찬가지로 탐색, 사교, 수면, 사냥 등과 같은 복잡한 인지 능력을 발휘합니다. 그럼에도 불구 하 고, 물고기 행동을 지배 하는 신경 메커니즘 은 대부분 알 수 없는 남아.

지난 수십 년 동안, 고정 된 물고기에서 세포 외 기록은 주로 행동1,2의신경 기초의 다른 측면을 조사하기 위해 구현되었습니다. 이 기술은 일부 감각 시스템에 적합하지만, 고정화 동물에서 불가능하지 않은 경우 행동의 신경 기초의 전체 스펙트럼의 조사는 어렵다. 첫 번째 발전은 테더 드 수영 물고기3,4의Mauthner 세포에서 녹음을 포함. 그러나 Mauthner 셀은 불균형적으로 크고 몇 mV만큼 높게 갈 수있는 기록 된 동작 전위 진폭은 기록을 용이하게합니다. 나중에 Canfield 등은물고기5의 말레전성에서 기록하기 위해 테더된 동물을 사용할 때 개념 증명을 설명했습니다. 물고기에서 신경 활동을 기록 하기 위한 또 다른 최근 기술은 칼슘 이미징 (오....

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프로토콜

모든 수술 절차는 동물 복지에 관한 지역 윤리 위원회(예: IACUC)의 승인을 받아야 합니다.

1. 마이크로 드라이브 하우징 의 건설

  1. 하우징을 구성하려면 1mm 너비의 황동 플레이트를 톱을 사용하여 19mm x 29mm x 1mm 플레이트로 자른다. 각 슬릿이 좁은 면에서 6.5 mm 떨어져 있도록 가장자리에 수직으로 긴 면각각에 두 개의 5.5 mm 슬릿을 잘라냅니다(그림 2A).
  2. 펜치를 사용하여 긴 측면의 슬릿 사이의 영역을 안쪽으로 접은 다음 아래쪽 부분을 안쪽으로 접고 위쪽을 바깥쪽으로 접어 하우징을 얻습니다(그림2B,C).
  3. 3mm 드릴 비트를 사용하여 마이크로 드라이브 하우징의 나사 구멍을 만듭니다.
    참고: 이러한 구멍은 나중에 하우징을 로거 박스에 부착하는 데 사용됩니다(그림2D).
  4. 하우징의 측면을 납땜합니다.
  5. 미세한 원형 파일을 사용하여 하우징 하단에 반원형....

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결과

녹음 세션 동안 금붕어는 사각 물 탱크에서 자유롭게 수레를 수레로, 말렌세팔론의 신경 활동은 기록되었습니다. 이 실험의 목표는 단 하나 세포의 신경 활동이 물고기의 행동을 결정하는 방법을 연구하는 것이었습니다. 이렇게 하려면 기록된 데이터에서 스파이크 활동을 식별해야 했습니다. 뇌 활동은 기록되는 동안 31,250 Hz에서 디지털화되었으며 데이터 로거에 의해 300 Hz에서 필터링된 하이 패스입니다. 이어서, 오프라인, 밴드 패스 필터(300-5,000 Hz)를 신호에 적용하고, 플루시드 원시 데이터를 각 테트로드의 채널 및 기준 채널로 분리하였다(도4A). 다음으로, 일반적인 스파이크 정렬알고리즘(12)은 단일 세포 활성을 특성화하기 위해 사용되었다. 먼저 각 채널은 최소 스파이크 진폭 임계값(각 채널의 노이즈 레벨에 따라)에 의해 수동으로 필.......

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토론

이 프로토콜은 자유롭게 수영 금붕어의 말살망에 tetrode 배열을 이식에 관련된 단계를 자세히 설명합니다. 이 기술은 뇌의 테트로드 위치를 조정할 수있는 마이크로 드라이브와 함께 최대 16 채널에서 획득 한 신호를 증폭하고 기록하는 신경 로거를 구현합니다. 마이크로 드라이브는 기록을 최적화하기 위해 뇌의 위치를 조정할 수 있습니다.

이 프로토콜은 다른 뇌 영역(유사한 기술을 사용하여 광학 지각에서 기록하기 위한 Vinepinsky et al.8 참조) 또는 15cm 길이 이상의 다른 수생 동물(금붕어 머리에서 꼬리까지 거의 100그램 무게)에서 기록을 위해 쉽게 수정할 수 있습니다. 또한, 프로토콜은 물에 침투할 수 있는 주파수에서 통신하는 한 모든 데이터 로거와 함께 작동하도록 수정할 수 있습니다. 여기서 사용되는 로거는 900MHz의 무선 주파수를 사용하여 통신하며 약 20cm의 물을 통해 통신할 수 있습니다. 2.4 GHz의 무선.......

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공개 사항

저자는 공개 할 것이 없다.

감사의 글

우리는 나추움 울라노프스키와 울라노프스키 연구소의 모든 도움에 감사드립니다. 또한, 우리는 도움이 기술 지원을 탈 노보 플랑 스키 - Tzur에 감사드립니다. 우리는 이스라엘 과학 재단의 재정적 지원을 감사하게 생각합니다 - 첫 번째 프로그램 (부여 번호 281/15), 네게브의 벤 구리온 대학의 농업, 생물학 및 인지 로봇 이니셔티브를 통해 헬름슬리 자선 신탁.

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
0.7mm 원형 드릴 비트드릴과 호환됩니다.
15 블레이드 메스시그마-알드리치
16 채널 PCB 보드NeurlynxEIB-16
1x3M 필립스 플랫 헤드 나사스테인레스 스틸. 모든 유형.
1x3M 필립스 라운드 헤드 나사스테인레스 스틸. 모든 유형.
27cm x 19cm x 1mm 황동 플레이트그림 2
참조 2x6M 필립스 납작머리 나사스테인리스 스틸. 모든 유형.
3140 RTV 코팅Dow Crowning2767996
75 µ m 은 철사A-M 체계
금관 악기 기계 나사 #00-90947-1006
금관 악기 판 7.5 mm x 2.5 mm x 0.6 mm3D 그림은 제공됩니다. 보충 1
코팅 텅스텐 와이어 25µ 참조; mCalifornia Fine Wire Company5000160응용 프로그램에 따라 사극체는 모든 유형의 전선으로 제작될 수 있습니다. 인기 있는 전선은 더 낮은 직경에서 찾을 수 있는 니크롬 전선입니다(예: AM 시스템, 762000)
코팅 텅스텐 와이어 50 &마이크로; mA-M Systems795500
Dental BurnisherComDent UK모든 소형 멸균 스테인리스 스틸 도구가 가능합니다.
치과용 시멘트 - GCFujiPLUSGC431011다른 치과용 시멘트는 다른 것을 시도한 적이 없지만 아마도 잘 작동할 것입니다.
치과 드릴 또는 매니큐어 드릴치과 드릴은 비싸고 매니큐어 드릴은 저렴한 대체품이 될 수 있습니다.
드릴 비트 #65947-65
빠른 경화 에폭시5분 경화 에폭시를 여기에 사용할 수 있습니다.
O-링 씰링3D 도면이 제공됩니다. 보충 1-3을 참조하십시오. 상자는 기계로 제작되어야 합니다(3D 프린터를 사용하지 마십시오). 로거의 표시기 LED를 볼 수 있도록 투명 재료를 사용하십시오.
전동 터닝 장치"open ephys" 웹사이트에 설명된 대로 맞춤 제작되었습니다. neurolynx ( "Tetrode Spinner 2.0")에서 구매하거나 다른 방법으로 bulit을 구입할 수도 있습니다.
Mouselog-16 신경 로거Deuteron Technologies Ltd시장에는 SpikeGadget(UH32 32채널) 및 Alexei Vyssotski의 Neurologger 2/2A/2B를 포함하여 여러 신경 로거가 있습니다. 무게는 떠 다니는 스티로폼
MS-222시그마 알드리치E10521Ethtl 3- 아미노 벤조 에이트 메탄 설포 네이트 98 %
나노 -Z 도금백질 LLC. 예를 들어 IMP-1 / 6662 / 2788, BAK Electronics와 같은 모든 임피던스 미터를 사용할 수 있습니다.
PCB 핀NeurlynxNeuralynx EIB 핀
폴리미드 튜빙 250 &마이크로; mAM 시스템822000
충전식 배터리3.7 Lipo 배터리, 370mAh. 약 6시간 분량의 녹음을 할 수 있습니다. 더 작거나 더 큰 배터리를 사용하여 무게를 줄이거나 녹음 시간을 연장할 수 있습니다.
실리콘 튜빙 0.64mmAM 시스템806100
스테인리스강 1.5mmAM 시스템846000
중탄산수듐 시그마 AldrichS9625
탭 #00-90947-1301
바셀린모든 유형의 연질 석유 피부 보호제를 여기에 사용할 수 있습니다.
저임피던스 Cyanoacrilic glue 의 다른 전선으로 교체 가능 이 있는 로거 상자 , , 와 균형을 이룰 수 있기 때문에 주요 제약이 아니라는 점에 유의해야합니다수소

참고문헌

  1. Jacobson, M., Gaze, R. M. Types of visual response from single units in the optic tectum and optic nerve of the goldfish. Quarterly Journal of Experimental Physiology and Cognate Medical Sciences. 49 (2), 199-209 (1964).
  2. Ben-Tov, M., Donchin, O., Ben-Shahar, O., Segev, R.

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