이 동물 모델은 연구원이 적어도 8 주 지속되는 마우스의 뒷다리에 있는 통계적으로 유의한 이차 림프부종을 유도하는 것을 가능하게 합니다. 이 모델은 림프부종의 병리생리학을 연구하고 새로운 치료 옵션을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
동물 모형은 질병의 병리생리학을 이해하기 위하여 림프부종의 연구에서 가장 중요하고 또한 잠재적인 처리 선택권을 탐구하기 위하여. 이 마우스 모형은 연구원이 적어도 8 주 지속되는 중요한 림프부종을 유도하는 것을 허용합니다. 림프부종은 분별 된 방사선 요법과 림프의 외과 적 절제의 조합을 사용하여 유도됩니다. 이 모형은 마우스가 수술 전후에 10 회색 (Gy) 방사선의 복용량을 얻을 것을 요구합니다. 모델의 외과 부분은 3 개의 림프관의 결찰과 마우스 뒷다리에서 두 개의 림프절추출을 포함합니다. 마우스의 작은 해부학 적 구조로 인해 미세 수술 도구와 현미경에 액세스 하는 것은 필수적이다. 이 모델의 장점은 다른 치료 옵션을 평가하기위한 좋은 기초를 제공하는 통계적으로 유의한 림프부종을 초래한다는 것입니다. 그것은 또한 미세 수술 훈련에 대 한 중대 하 고 쉽게 사용할 수 있는 옵션. 이 모델의 제한사항은 특히 사전에 실행하지 않은 경우 프로시저가 시간이 많이 소요될 수 있다는 것입니다. 이 모델은 쥐에서 객관적으로 정량화 할 수있는 림프부종을 초래하며, 심각한 이환율을 일으키지 않고 세 가지 별도 프로젝트에서 테스트되었습니다.
서론
림프부종은 주로 림프관에서 림프액의 손상 또는 중단 된 흐름으로 인해 발생하는 국소 조직 부종으로 이어지는 림프액의 축적을 특징으로합니다1. 림프 흐름은림프계의감염, 방해, 부상 또는 선천적 결함에 의해 손상되거나 중단 될 수 있습니다 2 . 이러한 병인은 림프액의 축적을 초래하여 만성 염증 상태로 이어져 후속 섬유증뿐만 아니라 지방 조직의 침착을 초래합니다3. 림프부종은 1 차 또는 이차 림프부종으로 분류 될 수있다. 1차 림프부종은 발달 이상 또는 유전적돌연변이에의해 유발된다2,4. 이차 림프부종은 근본적인 전신 질환, 수술 또는 외상으로 인해발생2,4. 이차 림프부종은세계2에서 림프부종의 가장 일반적인 형태입니다. 선진국에서는 보조 림프부종의 가장 흔한 원인은 보조 방사선 요법 및 림프절 해부5와같은 종양학 치료입니다. 림프부종은 유방암 환자 중 가장 빈번하지만 부인과....
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프로토콜
동물은 기관 지침에 따라 남부 덴마크 동물 관리 시설의 대학에 보관되었다. 동물 과목과 관련된 모든 절차는 덴마크 환경 식품부 동물 실험 검사관의 승인을 받았습니다.
1. 수술 전 조사
참고: 수술 전 조사는 수술 7일 전에 이루어집니다.
- 마취를 유도.
- 유도 상자에 마우스를 놓고 흡입 마취를 유도하는 0.8-1.2 L /min의 산소 유량으로 기화기를 3 %의 이소플루란으로 설정합니다.
참고 : 또는 주사용 마취제를 사용할 수 있지만 흡입 마취를 유도하는 조사의 짧은 기간 동안 충분했습니다. 이 문서에 제시 된 결과 얻기 위해, 9 주 된 여성 C57BL6 마우스를 사용 했다. - 마우스가 꼬리 또는 발 핀치 테스트로 완전히 마취되었는지 확인하십시오.
- 유도 상자에 마우스를 놓고 흡입 마취를 유도하는 0.8-1.2 L /min의 산소 유량으로 기화기를 3 %의 이소플루란으로 설정합니다.
- 조사를 위해 마우스를 배치합니다.
- 완전히 진정되면 유도 상자에서 마우스를 이동하고 방사원 아래에 놓고 테이프로 뒷다리를 부드럽게 고정시십시오.
참고: 마우스는 방사선의 짧은 기간 동안 진정된 상태로 유지됩니다. - 1.5mm 두께의 리드 패드를 배치하여 수술을 받는 부위(즉, 무릎 주위 직경 25mm의 원형 영역)만 ....
- 완전히 진정되면 유도 상자에서 마우스를 이동하고 방사원 아래에 놓고 테이프로 뒷다리를 부드럽게 고정시십시오.
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결과
이 절차는 이전에 세 가지 별도 실험에서 사용되었습니다. 모든 실험은 모두이 문서의 공동 저자 다른 수석 조사자에 의해 만들어졌다. 세 가지 실험 모두에서 이 프로토콜에 설명된 것과 동일한 절차를 준수하기 위해 세심한 주의를 기울였습니다. 모든 3개의 실험에서, 이차 림프부종은 다른 뒷다리가 대조군으로 봉사하는 동안 1개의 뒷다리에 유도되었습니다. 뒷다리의 부피는 세 가지 실험 모두의 주요 결과였다. 그림 1은 스터디 설계를 도시한다.
모든 마우스는 뒷다리의 부피를 측정하기 위하여 수술 다음 주에 있는 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 (μCT) 검사를 겪었습니다. μCT 스캔은 다중 모달성 전임상스캐너(표 오브 머티리얼)에서수행되었고, 뒤26일 설명한 바와 같이 관련 소프트웨어에서 관심.......
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토론
이 프로토콜에는 몇 가지 중요한 단계가 있습니다. 첫째, 방사능으로 작업할 때 연구원들이 안전 예방 조치를 취하는 것이 중요합니다. 둘째, 이 프로토콜의 수술 부분 동안 마우스가 마취되면 절차를 시작하고 불필요한 휴식없이 완료하는 것이 중요합니다. 이것은 동물을 위한 지나치게 긴 수술 기간을 피하고 마취가 수술 도중 효력을 분실하는 것을 방지하기 위하여 중요합니다. 마취제의 볼루스 주사를 한 번만 투여하고 한 번 앉아서 수술 절차를 완료하는 것이 좋습니다. 또한 과도한 특허 블루 V가 림프관을 둘러싼 조직을 변색시키기 때문에 너무 많은 특허 블루 V를 투여하지 않는 것이 중요한 단계이다. 주변 조직이 변색되면 림프혈관을 시각화하는 것이 거의 불가능할 수 있으며 이로 인해 절차가 손상됩니다. 하나는 림프관을 시각화 관리하더라도, 변색 된 조직은 특허 블루 V가 합자에 근접 을 통과하는지 여부를 평가하기 어렵게 만들 것입니다. 작업자가 배치 된 합자가 림프 흐름을 수축하고 있는지 확인하여 절차가 성공할 수 있도록해야하기 때문에 문제.......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없다.
감사의 글
저자는 현미경을 통해 본 영상을 기록하는 데 필요한 장비를 빌려 준 생물 의학 연구소의 피터 볼렌 (Peter Bollen)에게 감사드립니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 10-0 나일론 봉합사 | S & T | 12051-10 | |
| 6-0 나일론 봉합사 - Dafilon | B Braun | C0933112 | |
| 응고제 - ICC 50 | ERBE | ||
| 코튼 팁 애플리케이터 | Yibon medical co | ||
| 해부 겸 | Lawton | 09-0190 | |
| 탄성 견인기 | Odense University Hospital | ||
| Electrical 클리퍼 | Aesculap | GT420 | |
| 펜타닐 0,315 mg/ml | 매트릭스 | ||
| 가열 패드 - PhysioSuite | Kent Scientific Corp. | ||
| 이소플루란 1000mg 아탄 | 스캔 수의사 | ||
| 이소플루란 기화기 - PPV | Penlon | ||
| 마이크로 주얼러 집게 | Lawton | 1405-05 | |
| 마이크로 바늘 홀더 | Lawton | 25679-14 | |
| 마이크로 가위 | Lawton | 10128-15 | |
| 마이크로 묶는 집게 | Lawton | 43953-10 | |
| Microfine U-40 주사기 0,5ml | BD | 328821 | |
| Microlance 주사기 25g | BD | ||
| Microlance 주사기 27g | BD | ||
| Midazolam 5 mg/ml (hameln) | 매트릭스 | ||
| 바늘 홀더 - 서클 우드 | Lawton | 08-0065 | |
| 부직포 면봉 | Selefa | ||
| Opmi 피코 현미경 F170 | Zeiss | ||
| 페이턴트 블루 V - 25 mg/ml | Guerbet | ||
| 가위 - Joseph | BD | RH1630 | |
| Siemens INVEON 다중 양식 전임상 스캐너 | Siemens 전임상 솔루션 | ||
| 방사선 소스 - D3100 | Gulmay | ||
| Stata 통계 소프트웨어: 출시 15 | StataCorp LLC | ||
| Temgesic - 0,2 mg | Indivior | ||
| Vet 눈 연고 - viscotears | Bausch & 롬 |
참고문헌
- Lawenda, B. D., Mondry, T. E., Johnstone, P. A. S. Lymphedema: a primer on the identification and management of a chronic condition in oncologic treatment. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 59 (1), 8-24 (2009).
- Greene, A. K. Epidemiology and morbidity of lymphedema.
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재인쇄 및 허가
