본 의정서에서는, 점막 조직에 있는 바이러스성 감염을 모방하고 활성화시 선천적인 면역 반응을 공부하기 위하여 부분적인 외과 편도선 절제술을 겪고 있는 건강한 인간에게서 편도선 단핵 세포를 쉽게 처리하고 배양하는 방법을 설명합니다.
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방법 논문
편도선 단핵 세포의 격리는 인간 점막 림프구 조직에서 Ex Vivo 타고난 면역 반응을 연구합니다
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
점막 관련 림프조직(MALT)에서 분리된 세포를 연구하면 조직에서 숙주 병원체 상호 작용을 모델링할 수 있기 때문에 점막 면역과 관련된 병리학에서 면역 세포 반응을 이해할 수 있습니다. 조직에서 유래된 분리된 세포는 첫번째 세포 배양 모형인 동안, 조직이 얻기 어려울 수 있기 때문에 그들의 사용은 무시되었습니다. 본 의정서에서는 건강한 인간 편도선으로부터 편도선 단핵세포(TMC)를 쉽게 처리하고 배양하여 활성화 시 선천적인 면역 반응을 연구하고 점막 조직의 바이러스 감염을 모방하는 방법을 설명합니다. 편도선에서 TMC의 격리는 빠르다, 편도선은 거의 어떤 상피를 가지고 모든 주요 면역 세포 유형의 수십억까지 항복하기 때문에. 이 방법은 혈액에서 말초 단핵 세포 (PBMC)의 사용과 유사한 면역 분석, qPCR, 현미경, 유동 세포 측정 등을 포함한 여러 기술을 사용하여 사이토카인 생산을 검출 할 수 있습니다. 또한, TMC는 미래의 독성 검사에 대해 고려해야 할 PBMC보다 약물 검사에 더 높은 민감성을 보여줍니다. 따라서, ex vivo TMC 문화는 쉽고 접근 가능한 점막 모델입니다.
서론
인간의 장기에 대한 연구는 접근성뿐만 아니라 명백한 윤리적 이유로 인해 제한됩니다. 그러나, 그(것)들은 인간 생물학의 복잡성을 완전히 이해하기 위하여 필수적입니다. 고립 된 세포의 배양 (1 차 배양 또는 세포주) 그들의 가용성 때문에 세포 생물학 연구에 표준 시스템. 고립 된 세포 배양은 뛰어난 발견을 허용했지만 생체 기관의 생물학에서 완전히 모방하지 않기 때문에 세포주를 사용하는 것은 면밀한 조사를 받고 있습니다. 그러나, 3차원 세포 또는 조직 이종의 배양은 매우4복잡4,5,,6이다. 실제로, 조직 이나 장기의 조각은 매우 이종성 때문에 그것의 세포 구성 조직에 국소화에 따라 다릅니다. 따라서 조직 블록을 사용하면 많은 기술적 및 생물학적 복제의 분석이 필요하며 많은 수의 기증자 또는 환자가 필요합니다.
점막 관련 림프조직(MALT)은 림프절과 구조적으로 유사하지만 점막 면역7을조절하는 것이 주된 역할이기 때문에 독특한 기능을 가지고 있다. 일반적으로 조직에서 어느 정도 떨어진 곳에 위치한 림프절과 달리, 몰트는 일반적으로 점막....
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프로토콜
표본은 연구 목적을 위해 특별히 수집되지 않으며 연구 결과는 침략적인 것으로 간주되지 않습니다. 그러나 인간 편도선 수집은 지역 관계 당국의 윤리적 승인이 필요합니다. 우리의 경우, 그것은 코미테 드 보호 데 페르소네스 (IDRCB / EUDRACT: 2018A0135847)에 의해 승인되었다. 또한, 각 환자 또는 법정 대리인의 동의는 실험 결과를 해석하는 데 도움이 될 수 있는 기증자의 개인 데이터(예: 성별, 연령, 이력)를 획득하도록 요청됩니다.
1. 인간 편도선 조직 취급
- 모든 기증자의 편도선에 25mL PBS 1x를 함유한 멸균 50mL 바이알 1개에 넣고 실온(RT)에서 실험실로 이송합니다(바이알, 안전 상자 및 가방 의 세 가지 수준의 보호 를 사용).
참고: 전체 절차는 생물학적 안전 수준 2 실험실에서 수행되어야합니다. 모든 인간 표본은 이전에 자격을 갖추지 못했으며 전염성 요원을 포함할 수 있기 때문에 주의하여 처리되어야 합니다. -
각 사용 사이에 모든 도구를 청소합니다.
- 사용 후, 세포 스트레이너를 분해하고 세제 용액 (H2O의1/10 부피 세제)을 포함하는 욕조에서 다른 모든 악기 ....
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결과
우리는 먼저 배양에 존재하는 세포의 면역 프로파일을 특성화하고 TMC의 양을 분석했습니다. 우리는 유동 세포측정을 사용하여 편도선에서 TMC를 표현했습니다. 도 1에도시된 바와 같이, 혈액으로부터 PBMC에 존재하는 모든 주요 면역 세포 유형은 편도선으로부터 TMC에서 나타내고 있었다. 그러나, TMC에서 B 세포를 제외한 모든 세포 유형의 빈도는 PBMC보다 낮았다.
그림 1: 편도선에서 TMC의 표토. 건강한 기증자로부터 TMC는 인간 편도선 조직의 해부 및 세포의 격리 후에 얻어졌습니다. (A)세포.......
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토론
인간 편도선은 점막 계면에서 타고난 면역 반응을 연구하기 위한 통합 및 생리학적 전 생체 모델을 나타내며, 이는 이차 림프구 기관의 역할을 모방하기 때문이다. 흥미롭게도, TMC의 세포 조성은 PBMC와 유사하며 혈액으로부터 PBMC와 다를 수 있지만 모든 주요 세포 집단을포함한다(도 1). 추가 인구는 또한 발견될 수 있습니다, 모든 면역 반응은 조직에서 시작되기 때문에 (점막 또는 이차 림프구 기관) 혈액에서 하지.
인간 조직의 사용뿐만 아니라 세포 배양 또는 혈액 세포의 사용은 각각 자신의 장점이 있다. 그러나, 연구 사이토카인 분비 및 세포 활성화의 경우, 조직 이식은 최고의 모델이 아니었다. 사실, 우리는 조직 이출의 상부에서 어떤 IFN 생산을 감지 할 수 없습니다(도 2B). 우리는 그것이 직접 주변 세포에 의해 소비되는 것을 추측.......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없습니다.
감사의 글
이 작품은 기관 국립 드 라 Recherche sur le SIDA et les Hépatites ANRS (J-P)에 의해 지원되었다. H) 실험 및 N.B. 펠로우십 (AAP 2017 166). N.S.는 동호회ANRS(AAP 2016 1), 유럽 분자생물학기구 EMBO(LT 834 2017), 울름대학교 의과대학 의학학부의 스타트업 자금 조달 프로그램 "바우스타인", 도이치 포르스충스게마인샤프트 DFG(SM 544/1)의 지원을 인정합니다.
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참고문헌
- Taylor, M. W. A History of Cell Culture. Viruses and Man: A History of Interactions. , 41-52 (2014).
- Scherer, W. F., Syverton, J. T., Gey, G. O.
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재인쇄 및 허가
