수브라크누드 출혈의 모델로 시스테나 마그나에 혈액을 이중 직접 주입

요약

우리는 이 프로토콜에서 시스테나 마그나에 자가 전혈을 이중 으로 주입하여 표준화된 지주막 출혈(SAH) 마우스 모델을 기술하였다. 이중 주사 절차의 높은 수준의 표준화는 사망률에 관한 상대적 안전과 SAH의 중간-급성 모델을 나타낸다.

초록

뇌졸중 중, 뇌동맥류의 파열에 연속 된 뇌동맥류 (SAH)는 5-9 %를 나타내지만 신경 학적 결과의 관점에서 중요한 이환율을 가진 총 뇌졸중 관련 사망률의 약 30 %를 담당합니다. 지연된 대뇌 혈관경련(CVS)은 지연된 대뇌 허혈과 관련하여 가장 자주 발생할 수 있습니다. SAH의 다른 동물 모델은 현재 혈관 내 천공 및 시스테나 마그나 또는 심지어 전치질 통에 혈액의 직접 주입을 포함하여 사용되고 있으며, 각각 뚜렷한 장점과 단점을 나타낸다. 본 기사에서는, SAH의 표준화된 마우스 모델이 시스테나 마그나로 의정된 부피의 결정된 볼륨을 이중 직접 주입하여 제시된다. 간단히 말해서, 마우스는 이소플루란 흡입에 의해 계량한 다음 마취하였다. 이어서, 동물은 37°C의 직장 온도를 유지하는 가열된 담요상에 기대어 배치하고 약 30°의 자궁경부 굴곡이 있는 스테레오테틱 프레임에 배치하였다. 일단 제자리에, 같은 나이와 성별의 다른 마우스의 경동맥에서 가져온 상동성 동맥 혈액으로 채워진 길쭉한 유리 마이크로피펫의 끝 (C57Bl/6J)은 미세 조작기를 통해 아틀란토 -문부막과 접촉하는 직각으로 위치하였다. 그런 다음 60 μL의 혈액을 시스테르나 마그나에 주입한 다음 2분 동안 동물의 30° 하향 기울기가 뒤따랐습니다. 시스테나 마그나에 혈액 30 μL의 두 번째 주입은 첫 번째 후 24 시간 수행되었다. 각 동물의 개별 후속 은 매일 수행됩니다 (무게와 웰빙의 주의 평가). 이 절차는 인공 뇌 척수액 (CSF)의 동등한 주입에 의해 모방 될 수있는 두개 내 압력 고도를 동반, 혈액의 예측 가능하고 매우 재현 가능한 분포를 허용하고, 낮은 사망률을 유도 SAH의 급성에서 온화한 모델을 나타냅니다.

서론

수막치출혈(SAH)은 모든 뇌졸중 사례의 최대 5%를 차지하며, 100,000명당 7.2~9명의 환자를 발생시키고, 연구^3결과에따라 사망률이 20%-60%인 비교적 흔한 병리학을^{2구성한다.,} 급성 단계에서, 사망률은 출혈, 재출혈, 뇌 혈관 경련 (CVS) 및 /또는 의학적 합병증^4의중증도에 기인한다. 생존자에서, 초기 뇌 손상 (EBI)는 출혈의 빈약한 연장및 두개내 압력의 급격한 증가와 연관됩니다, 이는 1 차대 뇌 허혈^귀착될 수 있는 5 및^케이스6의 대략 10%-15%에 있는 즉각적인 죽음 귀착될 수 있습니다. SAH의 초기 "급성" 단계 후, 예후는 대뇌 전산 단층 촬영에 의해 환자의 거의 40%에서 검출된 "이차" 또는 지연된 대뇌 허혈(DCI)의 발생에 달려 있으며, 자기 공명 영상(MRI)^7,,8후 환자의 최대 80%에서 검출된다. CAH 환자의 대다수에서 동맥류 파열 후 4~21일 ....

프로토콜

모든 절차는 프랑스 윤리위원회와 유럽 의회 지침 2010/63/EU 및 과학 목적으로 사용되는 동물 보호 위원회의 지침에 따라 H. 카스텔의 감독하에 수행되었습니다. 이 프로젝트는 지역 CENOMEXA와 동물 연구 및 테스트에 대한 국가 윤리 위원회의 승인을 받았습니다. 8-12주 세의 남성 C57Bl/6J Rj 마우스(Janvier)는 통제된 표준 환경 조건하에서 보관되었습니다: 22°C ±1°C, 12시간/12시간 빛/어두운 사이클, 물 및 식품 사용 가능한 광고 리비툼.

1. SAH 수술 및 주사 준비 설정

1. 수술이 시작되기 전에 마이크로 피펫 풀러를 사용하여 적절한 수의 유리 모세 혈관을 당깁니다. 사출 파이펫은 0.86mm의 내지름과 1.5mm의 외경을 나타내야 한다.
2. 가짜 상태에 대한 인공 뇌척수액 (aCSF)을 준비합니다.
   1. 119mM NaCl, 2.5mM KCl, 1mM NaH 2 PO_4,1.3mM MgCl_2,10mMM 포도당, 26.2 mM NaHCO₂₃ In_H2O, pH 7.4로 용액을 준비한다.
   2. 가스 aCSF 와 95% O_....

결과

실험적 타임라인, 절차, 후속 및 사망률
도 1A 및 도 1B는 혈액의 이중 인종 차별적 주입에 의해 SAH 모델 프로토콜을 요약한다. 간략하게, SAH 유도 (D-1)의 첫날에, 60 μL의 혈액은 동종 마우스 또는 인공 뇌척수액 (aCSF)의 60 μL에서 각각 SAH 또는 sham 조건에서 시스테나 마그나로 주입되었다. 다음 날(D0), 동종 마우스에서 30μL 또는 aCSF의 30 μL을 각각 SAH 또는 샴 조건에서 시스테나 마그나에 주입했다. 수술 후 24시간, 마우스 살해 및 뇌 분석은 도 1C에도시된 바와 같이 파라혈관 공간으로의 혈액 분포를 관찰할 수 있게 되었다. D1에서 희생까지 일반적인 복지에 대한 민감한 지표로서, 체중은 D1에서 D8까지 매일 평가되었고, D1에서 D8까지의 가짜 동물에 비해 SAH에서 체중이 .......

토론

SAH 분야의 연구의 강도와 지난 20년 동안 증가하는 혈관 내 및 약리학적 치료 옵션과 같은 치료 전략의 발달에도 불구하고 사망률은 입원 첫 주 내에 높게 유지되며 다음 6개월 동안 약 50%에 도달하고^{,있으며, 25년}후 6개월 동안 약 50%에²⁴도달한다.. 시스테나 마그나에 동종 동맥 혈액의 매일 이중 주입에 의한 이 현재 전임상 모델은 그것의 타당성 및 낮은 사망률과의 협회에 대한 인식되고 있습니다. 실제로, SAH 설치류 모델 중, 사망률의 넓은 범위가 보고되었습니다 : 시스테나 마그른26,^{2727,,,28,,,,26}<.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
흡수성 지혈제	Ethicon	Surgicel
흡수성 봉합사	Ethicon	Vicryl 5.0
자동 조절 전기 담요	Harvard Apparatus	50-7087-F
모세관 고정용 블루택	UHU	Patafix
전자 저울	Denver Instrument	MXX-2001
유리 모세관	Harvard Apparatus	GC150F-15	내경 0.86 mm 외경 1.5 mm
이소플루란 기화기	Phymep	V100
마이크로피펫 풀러	Sutter Instrument Company	P-97
바늘 26 G	BD 마이크로밸런스	300300
비흡수성 봉합사	Peters surgical	Filapeau 4.0
입체 프레임	David Kopf 악기	모델 902
수술 장비	켄트 과학	클램프, 마이크로 가위, 얇은 가위
주사기, 20mL TERUMO	Thermofisher	11866071

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