이 연구에서는 실험실 마우스에 부착된 캡슐을 사용하여 하드 틱의 님프및 애벌레 단계를 위한 먹이 시스템이 개발되었습니다. 수유 캡슐은 유연한 재료로 만들어졌으며 적어도 일주일 동안 마우스에 단단히 부착되어 있어 진드기 공급에 대한 편안한 모니터링을 가능하게 합니다.
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이 논문에서
요약
초록
진드기는 발달의 모든 단계에서 의무적인 혈액 공급 기생충 (계란 제외) 및 각종 병원체의 벡터로 인식됩니다. 진드기 연구에서 마우스 모델의 사용은 그들의 생물학 및 진드기 호스트 병원체 상호 작용을 이해하기 위해 중요합니다. 여기서 우리는 실험실 마우스에 단단한 진드기의 미숙한 단계의 공급에 대한 비 힘든 기술을 보여줍니다. 이 방법의 장점은 단순성, 짧은 기간 및 실험의 다른 시점에서 진드기를 모니터링하거나 수집하는 기능입니다. 또한, 이 기술은 동일한 마우스에 두 개의 개별 캡슐을 부착할 수 있으며, 이는 두 개의 서로 다른 진드기 그룹이 동일한 동물에게 먹이를 주도록 요구되는 다양한 실험에 유익합니다. 자극적이지 않고 유연한 캡슐은 쉽게 접근할 수 있는 재료로 만들어졌으며 실험 동물의 불편함을 최소화합니다. 더욱이, 안락사는 필요하지 않으며, 마우스는 실험 후에 완전히 회복되고 재사용이 가능합니다.
서론
진드기는 몇몇 병원체의 중요한 벡터이고 동물과 인간 건강에 심각한 리스크를 나타냅니다1. 효과적인 공급 시스템을 설정하는 것은 생물학, 진드기 숙주 병원체 상호 작용을 연구하거나 효과적인 통제 조치를 수립할 때 중요합니다. 현재, 살아있는 동물의 사용을 피하는 몇몇 인공 공급 시스템은 진드기2,,3,,4에 유효하며 실험 조건이 허용할 때마다 활용되어야 합니다. 그러나, 다양한 실험 환경에서 이러한 시스템은 특정 생리적 특징을 적절히 모방하지 못하며 살아있는 동물의 사용은 관련 결과를 얻기 위해 필요하다.
실험실 마우스는 일반적으로 많은 생물학적 시스템의 연구에 사용되며 정기적으로 진드기 를 공급하기위한 호스트로활용5,,6,,7,,8,,9. 마우스에....
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프로토콜
이 프로토콜은 실험실에서 모든 복지 및 안전 조치를 충족할 때만 적용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 동물 실험에 대한 윤리위원회에 의해 진드기 공급에 마우스를 사용하는 권한을 받았다ComEth Anses / ENVA / UPEC, 허가 번호 E 94 046 08. 종점에 대해, 동물들은 각각 4분과 5분의 2단계로 9분 동안CO2에 노출되었다.
1. 캡슐 의 준비
- 2mm 두께의 EVA 폼과 접착제 더블 끈적 끈적한 거품을 함께 붙입니다(그림1A).
- 20mm 직경의 가죽 홀 펀치를 사용하여 스틱 폼 조각에서 원을 자른다. 이어서, 직경 12mm의 구멍 펀치를 사용하여 내부를 잘라 이중 폼원(도 1B)을만듭니다.
참고: 캡슐의 프레임 두께는 3mm 이상의 크기로 숙주 피부에 접착 공정에 충분한 표면을 보장해야 합니다(아래 참조). - 접착제 이중 끈적 끈적한폼(도 1C)에서보호 용지 스트립을 껍질을 벗기고 직경 20mm(도1D)의투명한 원형 플라스틱을 부착합니다....
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결과
마우스 뒷면에 적용된 EVA-foam 캡슐에서 미숙한 하드 틱 스테이지를 공급하기 위한 상세한 단계별 방법을 제안합니다(그림2). 이 비힘든 프로토콜은 정밀한 진드기 모니터링 및 수집이 필요할 때 다양한 유형의 실험에 적합합니다. 이 방법의 주요 장점은 단순성, 쉽게 접근 할 수있는 비용 효율적인 재료 및 짧은 기간입니다. 또한, 동일한 동물에 두 개의 서로 다른 진드기 그룹을 공급할 수 있도록 한 마우스개인(도 2K)에2개의 캡슐을 부착하는 데 성공했습니다. 매우 효과적이고 빠른 건조 및 자극적이지 않은 라텍스 접착제를 사용하면 캡슐이 3 분 이내에 단단히 부착됩니다. 또한, 캡슐은 미성숙 하드 진드기 종21,22,,23,,.......
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토론
프로토콜에서 가장 중요한 단계는 캡슐을 마우스 피부에 단단히 붙이는 것입니다. 따라서 라텍스 접착제는 캡슐의 전체 EVA-foam 표면에 균질하게 적용되어야 하며 3분 동안 일정한 압력을 가해야 하며, 특히 캡슐의 왼쪽과 오른쪽에 적용되어야 한다. 또한 후면 발을 사용하여 마우스에 의한 제거를 피하기 위해 가능한 한 앞으로 캡슐을 배치하는 것이 좋습니다. 실험에서 EVA 폼과 라텍스 접착제가 마우스 피부에 부착된 것만 검증되었으며, 다양한 재료를 사용하여 동일한 결과의 달성을 보장할 수 없습니다.
우리의 실험 도중, 첫번째 7 일 안에 피부에서 캡슐의 분리는 관찰되지 않았습니다. 플라스틱 대역(도2H)을이용하여 캡슐의 외부 표면을 보호하는 것이 좋습니다. 보호 밴드가 진드기 공급 과정에서 손상된 경우 새 밴드로 교체할 수 있습니다. 캡슐의 직경은 다른 마우스 변형 크기에 대해 수정될 수 있다. 우리는 먹이 진드기를 적어도 하루.......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없습니다.
감사의 글
우리는 알랭 버니어 프랑스 국립 농업 연구소 (INRAE) 및 오세안 르 비델 (ANSES)의 기술 지원을 인정합니다. 연구 결과는 DIM One 건강에 의해 지원되었습니다 - 레기온 일 드 프랑스 (프로젝트의 약어: NeuroPaTick). 마우스는 ANSES에 의해 구입하였다. 제프리 엘 블레어 박사는 원고의 이전 버전을 검토한 것으로 인정됩니다.
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| 마우스 C57BL / 6 | 찰스 리버 | 스트레인 코드 664 | |
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참고문헌
- Sonenshine, D. E., Roe, M. Biology of Ticks. , Oxford University Press. (2014).
- Kröber, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).
- Bonnet, S., et al.
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