뇌졸중은 최소한의 치료 옵션과 잃어버린 뇌 조직을 재생하기위한 현재 임상 치료와 글로벌 문제입니다. 여기에서 우리는 설치류의 모터 피질에 정확한 광혈전 뇌졸중을 만들고 뇌졸중 후 조직 재생에 미치는 영향을 연구하기 위해 하이드로 겔 생체 재료의 후속 주입을 만드는 방법을 설명합니다.
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뇌졸중은 최소한의 치료 옵션과 잃어버린 뇌 조직을 재생하기위한 현재 임상 치료와 글로벌 문제입니다. 여기에서 우리는 설치류의 모터 피질에 정확한 광혈전 뇌졸중을 만들고 뇌졸중 후 조직 재생에 미치는 영향을 연구하기 위해 하이드로 겔 생체 재료의 후속 주입을 만드는 방법을 설명합니다.
뇌졸중은 장애의 주요 원인과 미국에서 다섯 번째 주요 사망 원인입니다. 모든 뇌졸중의 약 87%는 허혈성 뇌졸중이며 뇌에 혈액을 공급하는 혈관의 갑작스런 막힘으로 정의됩니다. 막힘의 분 안에, 세포는 정지하기 시작하고 돌이킬 수 없는 조직 손상을 초래합니다. 현재 치료 치료는 혈전 제거 또는 용해에 초점을 맞추어 재관류를 허용하고 더 심각한 뇌 손상을 예방합니다. 일시적인 뇌 가소성은 시간이 지남에 따라 손상된 조직의 일부를 구출 할 수 있지만, 환자의 상당한 분수는 결코 해결되지 않을 신경 적자로 남아 있습니다. 뇌졸중으로 인한 신경 학적 적자를 치료하는 치료 옵션의 부족이있다, 이 증가하는 환자 인구를 치료하는 새로운 전략을 개발하는 필요성을 강조. 주사용 생체 재료는 현재 뇌 가소성을 향상시키고 활성 제또는 줄기 세포의 전달을 통해 내인성 수리를 개선하도록 설계되고 있습니다. 이러한 접근법을 테스트하는 한 가지 방법은 설치류 스트로크 모델을 활용하고, 생체 물질을 스트로크 코어에 주입하고, 수리를 평가하는 것입니다. 뇌졸중 코어의 정확한 위치를 아는 것은 뇌졸중 후 정확한 치료에 필수적이므로 예측 가능한 뇌졸중 위치를 초래하는 뇌졸중 모델은 주입 전에 이미징의 필요성을 피하는 것이 바람직하다. 다음 프로토콜은 광혈전 뇌졸중을 유도하는 방법, 제어되고 정확한 방식으로 하이드로겔을 주입하는 방법, 생물 물질을 손상시키면서 뇌를 추출하고 저온절하는 방법을 다룰 것입니다. 또한, 이러한 동일한 하이드로겔 물질이 줄기 세포의 공동 전달에 어떻게 사용될 수 있는지 강조할 것입니다. 이 프로토콜은 뇌졸중 코어내로 다른 주사용 생체 물질을 사용하는 것으로 일반화될 수 있다.
뇌졸중은 장애의 주요 원인이며 미국에서 다섯 번째로 주요 사망원인입니다 1. 모든 뇌졸중의 약 87%는 허혈성이며 나머지 13%의 대다수는 출혈2입니다. 허혈성 뇌졸중은 주변 조직에 동맥에서 혈류의 막힘으로 정의됩니다. 이 폐색은 수시로 살아남는 환자에 있는 영원한 무력으로 이끌어 내는 산소 부족 그리고 후속 괴사 귀착됩니다. 뇌졸중3의사망률이 감소했지만, 2030년까지 보급은340만명으로 증가할 것으로 예상된다. 장애인 생존자의 증가와 그에 따른 경제적 부담은 신경 수리 메커니즘에 초점을 맞춘 뇌졸중 연구를 위한 추진으로 이어졌습니다. 뇌졸중 다음에 는 괴사 영역이 팽창하는 것을 방지하는 흉터의 형성으로 이어지는 염증 성 기간이 있습니다. 괴사 코어를 둘러싼 지역은 "peri-farct"라고 하며 혈관 신생, 신경 발생 및 축산 발아증가를 포함하는 이 지역의 가소성이 동물 모델과 인간5에서관찰된 회복에 직접 연결된다는 강력한 증거가 있다. 뇌졸중 후 복잡한 상호 작용을 적절하게 복제 할 수있는 체외 모델이 없기 때문에 동물 모델은 뇌졸중 연구에 필수적입니다.
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실험은 듀크 대학과 캘리포니아 로스 앤젤레스 대학의 IUCAC에 따라 수행되었다. 8 에서 12 주 된 남성 C57Bl/6J 마우스는이 연구에서 사용 되었다. 동물은 12h 빛-어두운 주기 기간과 펠릿 식품 및 물 광고 리비툼에 접근할 수 있는 제어 온도(22± 2°C)하에 보관되었습니다. 진통제 및 식기 프로토콜은 IUCAC에 의해 승인된 것으로 설명되지만 다른 실험실에서 사용되는 프로토콜과 다를 수 있습니다.
동물은 과도한 불안, 발성 (통제 할 수없는 통증을 나타내는), 자기 외상, 감소 또는 손상 된 이동성, 진피 감염의 물리적 징후, 식욕 의 손실 및 / 또는 체중 감소가 생존 수술의 결과로 10%-15 % 이상인 경우 조기에 안락사 될 수 있습니다. 젤의 주입에서 예상 되는 부작용이 있다, 그것은 뇌 내에서 자연 발생 중합체로 구성. 동물은 주말과 공휴일을 포함하여 매일 모니터링되어야하며 격일로 재계해야합니다. 우리의 실험실 및 다른 사람에서 연구 ' 그루밍에 적자를 발견, 체중의 손실 또는 이 작은 피 질 또는 피코르탈 뇌졸중 후 쥐에 금 단 또는 만성 스트레스의 징후/증상. 동물이 현지 머리 상처 감염의 징후를 나타내는 경우 안락사해야합니다. 동물은 또한 가난한 그루밍, 상처 상태 및 동물 (허리 상처) 사이의 싸움의 증거에 대....
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이 방법의 목적은 뇌졸중 후 뇌에 생체 물질을 주입하는 방법을 시연하는 것이었습니다. 장미 벵골과 520 nm 레이저를 가진 광혈전 모델은 크기와 위치 모두에서 뇌졸중 병변의 제어 방향에 사용되었다. 뇌졸중 후 5일 동안 경색은수술(도 1B)및 TTC 및 이미징 IHC 염색 슬라이드(도2)에의해 시각화될 수 있다. 2x 렌즈를 가진 레이저 직경의 증가는 레이저만으로 단일 1mm 단면에 비해 2.5 mm 이상에 걸쳐 있는 치기 병변의 시각적 증가로 이끌어 낸다(그림2). PT 모형을 가진 수술 도중 사망은 거의, 최소침습 절차 때문에 1% 미만 일 일어나지 않습니다. 수술 후 사망은 또한 낮았고 마우스의 5% 미만에서 보였습니다.
히알루론산계 하이드로겔 미세입자(HMP)는 뇌졸중 후 5일 만에 주사하였다(도
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여기서 우리는 쉽게 재현 할 수있는, 최소 침습, 영구 뇌졸중 모델을 설명하고 뇌졸중 후 5 일 동안 광원에 생체 물질을 주입하는 방법을 설명합니다. 포토thrombotic 염료 로즈 벵골과 스테레오 탁스 장치에 연결된 520 nm 콜라주 레이저의 사용은 우리에게 향상된 정밀도로 마우스의 모터 피질에 스트로크를 배치 할 수있는 기능을 제공합니다. 뇌졸중 후 5일 후, 경색의 위치는 조사의 중심에 눈으로 볼 수 있으며, 2.0mm 메디오-측면은 브레그마에 있다. 하이드로겔은 주사기 펌프를 사용하여 스트로크 코어에 정확하게 주입됩니다. 수술 중 과 이 모형에 있는 치기 후에 사망은 마취합병증 때문에 수술 후에 정지하는 마우스의 소수와 함께, 사실상 결석합니다. 생체 재료 응용 프로그램에 PT 스트로크를 사용하는 장점에도 불구하고 해결해야 할 몇 가지 생물학적 제한과 기술적 어려움이 있습니다.
생물학적 한계의 관점에서, PT는 뇌 성 재관전옵션을 제공하는 뇌졸중 모델이 아니며, 인간의.......
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저자는 TS가 MAP 하이드로겔을 상용화하고자하는 템포 치료제의 창시자라고 선언합니다.
우리는 건강의 국가 학회 및 자금 조달을 위한 신경 장애 및 치기의 국가 학회 (R01NS079691)를 인정하고 싶습니다.
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