이 연구에서 기장 균질 추출물과 면역형광 스테인링을 사용하여 기술된 전 생체 분석법은 기관에서 칸디다 알비칸스의 최면 형태 발생을 검사하는 새로운 방법을 나타낸다. 이 방법은 창자에 있는 형태유전학 전이를 통제하는 환경 신호를 조사하기 위하여 이용될 수 있습니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
위장(GI) 관내 칸디다 알비칸스 최면 형태발생은 다양한 환경 신호에 의해 엄격하게 제어되며, 이 기회성 곰팡이 병원균의 보급 및 병원성 발생에 중요한 역할을 한다. 그러나, 생체 내 기관에서 곰팡이 최해를 시각화하는 방법은 이러한 형태 발생 과정을 제어하는 환경 신호의 이해를 제한하는 도전적이다. 여기에 설명된 프로토콜은 장 동형 추출물에서 최면 형태 발생의 시각화를 위한 새로운 ex vivo 방법을 보여줍니다. 전 생체 분석기를 사용하여, 이 연구는 항생제 처리된 마우스에게서 cecal 내용이, 그러나 처리되지 않은 대조마우스에서, 창자 내용에서 C. albicans 최면 형태발생을 승진시키는 것을 보여줍니다. 또한, 항생제 처리된 마우스로부터 세칼 내용물의 특정 군을 다시 첨가하면 자궁 내형성 전 생체내를 분화한다. 종합하면, 이 프로토콜은 기관에서 C. albicans 최면 형태발생을 제어하는 환경 신호를 식별하고 조사하는 새로운 방법을 나타냅니다.
서론
칸디다 알비칸스는 일반적으로 기만적이지만 면역 절인 개인1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12, 12, 12에서생명을 위협하는 감염을 유발할 수 있는 악성 형태로 형태학적 변화를 겪을 수 있습니다. C. 알비칸은 항진균 치료2,14,
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
프로토콜
모든 동물 프로토콜은57이전에 설명된 바와 같이 중서부 대학 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인되었다. 미드웨스턴 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회는 MWU IACUC 프로토콜 #2894 따라이 연구를 승인했습니다. MWU 동물 관리 정책은 실험실 동물의 인도적 관리 및 사용에 대한 공중 보건 서비스 (PHS) 정책과 동물 복지법 (AWA)에 명시된 정책을 따릅니다.
1. 마우스 연구 표준 프로토콜
- 남성과 여성 C57BL/6J 마우스를 적어도 6 주 오래 사용 하십시오. 체파오레존(0.5 mg/mL)의 유무에 관계없이 멸균물로 보충하십시오.
- 5의 그룹으로 공동 집 마우스, 모든 남성 또는 모든 여성 마우스를 포함하는 각 케이지와. 마우스 표준 마우스 차우와 물(400mL 병을 통해)을 항상 제공합니다.
- 음식과 수위가 충분하도록 매일 케이지를 확인하고, 조난의 징후를 위해 마우스를 검사하십시오.
- 케이지 수유 병에 남은 물에 관계없이 신선한 항생제가 제공되도록 48h마다 물을 cefoperazone로 교체하십시오.
- 5\u20127 일간의 cefoperazone 치료 ....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
결과
이러한 결과는 탄가마니실험실(60)의 이전 연구 결과와 함께 C. 알비칸이 위장에서 가져온 장용 균질 추출물에서 전 생체을 재배할 때, 치료되지 않은 대조군 및 항생제 처리 마우스의 소장 및 대형 장, C. 알비칸스는 일반적으로 효모 형태학(도1B)으로개발된다는 것을 나타낸다. 그러나, 항생제 처리된 마우스에서 세칼 추출물에서 재배될 때, C. 알비칸스는 쉽게 형태발생을 겪으며, 효모와 최면 형태를 함유한 시료(도1B); 이것은 대조군 마우스에서 발생하지 않습니다. 이는 항생제 처리된 세칼 추출물에서 자란 샘플에서 최해 형태의 현저한 증가를 보였지만, 다른 항생제 치료장추출물(60)에서는그렇지 않은 이전 결과를 뒷받침한다. 이러한 결과는 항생제 치료가 C. albicans의 .......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
여기에서 기술된 방법은 기관에 있는 C. albicans 최면 형태발생에 대한 항생제, 규정식, xenobiotic 및 치료 충격의 효력을 조사하는 새로운 방법을 제시합니다. 전신 감염의 대부분은 기관21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
저자는 경쟁 적인 재정적 이익 이나 이해의 다른 충돌.
감사의 글
저자는 미드웨스턴 대학 세포 및 분자 코어 연구 시설에서 자원과 지원을 인정합니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 1 - 10 &마이크로; L 피펫 팁 | Fisher Scientific | 02-707-454 | 기타 |
| 100 - 1000 &마이크로; L 피펫 팁 | Fisher Scientific | 02-707-400 | 기타 |
| 20 - 200 &마이크로; L 피펫 팁 | Fisher Scientific | 02-707-451 | Misc |
| 2-methylbutyric acid | Sigma | 193070-25G | 최면 억제 화합물 |
| 488 염소 항 토끼 IgG | Invitrogen (Fisher) | A11008 | IF 염색 2 차 |
| ab 한 | Fisher BP1423-500 | YPD 한천 구성 | |
| 요소 자동 이미징 현미경 | Keyence | BZX700 | |
| 칸디다 알비칸스 항체 | Invitrogen (Fisher) | PA1-27158 | IF 염색 1차 |
| ab cefoperazone | Cayman | 16113 | 항생제 |
| 데옥시콜산 | Sigma | 30960 | hyphal-inhibitory compound |
| D-Glucose | Fisher | D16-500 | hyphal-promoting compound |
| Fisher | 08-885 | ||
| 젖산 | Alfa Aesar | AAAL13242-06 | 최면 억제 화합물 |
| 리토콜산 | Sigma | L6250-10G | 최면 억제 화합물 |
| 팔미트산 | Sigma | P5585-10G | 최면 억제 화합물 |
| 파라포름알데히드 | Alfa Aesar | A11313 | IF 염색 고정성 |
| 인산염 완충 식염수(PBS), 10x | 알파 Aesar | J62692 | PBS 구성 요소 |
| p-tolylacetic acid | SCBT | sc-257959 | hyphal-inhibitory compound |
| sebacic acid | Sigma | 283258-250G | hyphal-inhibitory compound |
| sharp ended scissors | Fisher | 28301 | |
| sterile Milli-Q water | N/A | /A | Misc |
| YPD Broth | BD Biosciences | 242810 | YPD 한천 구성 요소 |
참고문헌
- Huffnagle, G. B., Noverr, M. C. The emerging world of the fungal microbiome. Trends in Microbiology. 21 (7), 334-341 (2013).
- Wisplinghoff, H., et al. Nosocomial bloodstream infections in US hospitals: analysis o....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
