중요 사지 이혈증을 가진 Angioplasty 처리한 환자에 있는 현지 순환 단핵 전구 세포를 사용하여 절단을 예측합니다

Summary

낮은 사지 절단은 중요한 사지 허혈 (CLI)에 있는 방해한 선박의 혈관 성형술 후에조차 생길 수 있습니다. 단핵 전구 세포 (MpC)는 혈관 수리를 반영합니다. 본 프로토콜은 혈관 성형술에 가까운 순환에서 MpC의 정량화, 내피 기능 장애및 낮은 사지 절단의 예측과의 관계를 설명합니다.

Abstract

중요한 사지 허혈 (CLI)은 말초 동맥 질환의 고급 단계를 나타냅니다. 혈관 성형술은 하반신에 혈류를 향상시킵니다; 그러나 일부 환자는 팔다리 절단으로 돌이킬 수 없이 진행됩니다. 혈관 손상의 정도와 혈관 수리 메커니즘은 혈관 성형술 후 결과에 영향을 미치는 요인입니다. 단핵 전구 세포 (MpC)는 혈관 손상을 반사하는 능력으로 혈관 손상 및 수리에 반응합니다. 본 프로토콜은 혈관 성형술 부위에 가까운 혈관으로부터 혈액 순환에서 얻은 MpC의 정량화뿐만 아니라 내피 기능 장애와의 관계 및 CLI 환자의 혈관 성형술 후 다음 30 일 동안 사지 절단을위한 예측 능력을 설명합니다.

Introduction

말초 동맥 질환(PAD)은 혈액 공급^1의한계를 가진 만성 및 진행성 혈관 방해를 특징으로 한다. 전 세계적으로, 하반신의 PAD는 노인 인구의 약 10%에 영향을 미치고, 그러한 경우의 최대 7%는 사지 절단^2,3에제출된다.

중요 사지 허혈 (CLI)는 PAD^1의가장 심각한 프리젠 테이션을 나타냅니다. 환자는 일반적으로 폐색동맥에 기인하는 휴식, 궤양, 또는 회지에서 고통을 경험합니다; 임상 예후는 불리하고 1 년 동안 사지 절단 및 사망률의 30 % 위험에 의해 표시되는 동안^3,4,5.

혈관 성형술은 CLI환자에서 하반신에 혈류를 회복할 수 있는 최소 침습성 혈관 내 시술이다. 그러나, 몇몇 환자는 혈관 성형술 치료^1,5후에조차, 필연....

Protocol

Centro Médico Nacional "20 de Noviembre"ISSSTE의 기관 연구 윤리 위원회는 이 예비 프로토콜을 승인했으며, 등록된 모든 환자는 서면 동의를 제공했습니다.

1. 하반신, 혈액 샘플링 및 풍선 혈관 성형술의 혈관 블록 평가

참고: 이 실험에 사용된 연구 견본은 20명의 당뇨병 환자, 나이 68 세 및 20의 10의 남성이었습니다 구성되었습니다. 샘플의 절반은 흡연자였고 가장 널리 퍼진 공동 이환율은 타입-2 당뇨병, 전신 동맥 고혈압 및/또는 이상지질혈증이었습니다. 이 샘플은 연령, 성별 및 공동 이환율을 위해 표준화되기 위한 것이었습니다. MPC와 CLI 사이의 관계에 대한 임상 인구 통계학적 영향으로 인해 가능한 편견을 배제할 수 없습니다.

1. Rutherford^분류에 따라 사지 허혈의 임상 심각도 평가 13 (보충 표 1참조).
2. 낮은 사지 혈관 조영술, 혈액 샘플링 및 풍선 혈관 성형술을 수행합니다.
   1. 수술 전에 항응고제와 마취제를 사용하십시오.
   2. 선택된 사타구니 부위에 18G 바늘을 혈관에 넣습니다.
   3. ....

Results

혈관 성형술을 위해 주소가 있는 사이트에서 막힌 동맥에서 혈액 샘플은 20명의 당뇨병 환자에서 수집되었으며, 68세와 20명 중 10명이 남성이었습니다. 표본 인구의 절반은 흡연자였습니다. 혈관 병변은 주로 러더포드 급 VI로 득점되었다; 반면 환자는 타입-2 당뇨병 의 더 높은 보급을 보여주었습니다 (100%), 고혈압 (70%) 및 이상지질혈증 (55%).

하반신 혈관 성형술 후 30 일 임상 후속 이 수행되었다. 혈관 성형술 후 기준선 또는 역학에서 MPC 하위 집단의 백분율은 FMD에 의해 평가된 내피 기능 장애의 정도와 상관관계(Spearman 분석)했다; 및 MPC의 기준선 수는 혈관 성형술 (U-Mann Whitney) 후에 사지 절단을 겪고 있거나 하지 않는 환자 사이에서 비교되었습니다. 연구 결과는 기준형 MPC 하위 인구 CD45⁺CD34⁺KDR⁺ FMD와 부정적으로 상관 관계가 있음을 보여주었습니다

Discussion

혈관 블록의 정확한 부위에서 혈액 수집은 기술적 인 어려움을 나타낼 수 있습니다; 따라서, 우리는 혈관 블록에 근접하여 혈액 수집을 수행했습니다. 마찬가지로 혈관 플라크에 가까운 MpC의 양은 매우 역동적인 것으로 보이며 혈관 성형술 전후의 변형을 생성할 수 있습니다. 우리의 관측에 따르면, 그들은 혈관 손상 및 수리 내에서 발생하는 여러 병생리학적 과정을 반영 할 수 있기 때문에, MPC의 수에 기준 선점 및 30 분 후 혈관 성형술 변화를 평가하는 것이 좋습니다.

CFC 판정을 위한 혈액 샘플 처리는 처음 3시간 이내에 수행되는 것이 좋습니다. 따라서, 적당한 조직 계획, 그리고 조차 이전 시뮬레이션 사례는, 통기학 혈관 수술 팀과 실험실 연구원 사이에서 설치될 수 있습니다. MpC 격리는 신중하게 수행해야하며, 특히 혈액 샘플을 밀도 그라데이션으로 탈취하고 MpC를 포함하는 펠릿의 세체로 분해해야 합니다. 우리 그룹은 세포 측정 관으로 세포를 전송하는 데 사용, 기본 항체를.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
BSA	Roche	10735086001	소 혈청 알부민(BSA)을 완충제, 안정제, 표준 및 혼합용입니다.
캘리브레이션 비드	Miltenyi Biotec / MACS	# 130-093-607	MACQuant 캘리브레이션 비드는 0.05 % 아지드 나트륨을 함유 한 수용액으로 공급됩니다. 최대 100 회 테스트를위한 3.5 ml
CD133 / 1 (AC133) -PE	Milteny Biotec / MACS	# 130-080-801	에서 R-Phycoerythrin과 결합 된 항체
			단클론, 동형 재조합 인간 IgG1, 공액
CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-601	PBS/EDTA 완충액
CD34-FITC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-081-001	단클론 항체 클론 AC136은 CD34
CD45- VioBlue	Miltenyi Biotec / MACS	#130-092-880	의 클래스 III 에피토프를 확인합니다.단클론 CD45 항체, human conjugated
Conical Tubes	Thermo SCIENTIFIC	#339651	15ml 원뿔형 원심분리기 튜브
	FALCON Corning Brand	#352052	5 mL 폴리스티렌 라운드 바닥 튜브.12x75 스타일. 메 마른.
EDTA	BIO-RAD	#161-0729	중금속, (Pb로서) < 10ppm, Fe< 0.01%, 그대로< 1ppm, 불용성< 0.005%
Improved Neubauer	브랜드 없음	카탈로그 번호 없음	세포 계수를 위한 혈구계. (범위 0.1000mm, 0.0025mm2)
K2 EDTA 혈액 수집 튜브	BD Vacutainer	#367863	라일락 플라스틱 진공 튜브(K2E) 10.8mg, 6mL.
Lymphoprep	Stemcell Technologies	01-63-12-002-A	멸균 및 내독소의 존재 여부를 확인했습니다. 밀도 : 1.077± 0.001g/mL
파라포름알데히드	SIGMA-ALDRICH		생물학적 시료 고정, (분말, 95%)
피펫 이송 1,3mL	CRM Globe	PF1016, PF1015	이송 피펫은 더 높은 정확도로 액체 이송을 용이하게 하는 도구입니다.
시험관	KIMBLE CHASE	45060 13100	내열 시험관. 크기/캡 13 x 100 mm