Method Article

아스티야낙스 멕시코인의 막시달 번식과 산란에 대한 증분 온도 변화

DOI:

10.3791/61708

⸱

February 14th, 2021

 ,  ,  , 
1Department of Biology, University of Maryland

In This Article

Summary

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이 기사에서는 발달 및 진화 연구를 위한 새로운 모델인 멕시코 테트라 Astyanax mexicanus에서최대 산란을 자극하기 위한 증분 온도 정권에 대한 기본 실험실 조건 및 프로토콜을 설명합니다.

Abstract

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멕시코 테트라, Astyanax 멕시코,개발 및 진화 연구를위한 새로운 모델 시스템입니다. 이 종에서 눈 표면 (표면 물고기)과 맹목적인 동굴 (동굴 물고기)의 존재는 형태학적 및 행동 진화의 기본 메커니즘을 심문 할 수있는 기회를 제공합니다. 동굴 물고기는 새로운 건설적이고 회귀적 특성을 진화했다. 건설적인 변화는 미각과 턱의 증가, 측면 선 감각 기관 및 체지방을 포함합니다. 회귀 적 변화는 눈의 손실 또는 감소를 포함한다. 멜라닌 색소 침착, 학교 행동, 침략, 수면. 이러한 변화를 실험적으로 심문하려면 많은 수의 산란 된 배아를 얻는 것이 중요합니다. 1990년대에 텍사스와 멕시코에서 원래 A. 멕시코 어류와 동굴 물고기가 수집된 이후, 그들의 후손들은 제프리 실험실에서 격월에 많은 배아를 번식하고 생성하기 위해 정기적으로 자극을 받았습니다. 사육은 음식의 풍요로움과 품질, 밝은 어두운 주기 및 온도에 의해 제어되지만, 우리는 증분 온도 변화가 최대 산란을 자극하는 데 중요한 역할을한다는 것을 발견했습니다. 사육 주 첫 3일 동안 72°F에서 78°F로 의 온도가 점진적으로 증가하면 고품질 배아의 최대 수로 2-3일 연속 산란일을 제공하며, 그 다음에산란 주간의 마지막 3일 동안 78°F에서 72°F로 점진적으로 온도가 감소합니다. 이 비디오에 표시된 절차는 증분 온도 자극 산란에 대한 실험실 사육 주 전과 동안 워크 플로우를 설명합니다.

Introduction

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텔레OST Astyanax 멕시코는 눈 표면 주거 (표면 물고기) 형태와 많은 다른 블라인드 동굴 주거 (동굴 물고기) 형성1,2. 동굴 물고기는 영원한 어둠과 음식 의 한계에서 진화, 새로운 건설적이고 회귀 특성의 출현의결과로 3. 건설적인 특성에는 미각과 턱 크기, 측면 선의 감각 기관 및 지방 매장량이 포함됩니다. 회귀적 특성에는 멜라닌 색소 침착, 눈 및 수면, 학교 및 침략과 같은 행동의 손실 또는 감소를 포함합니다. Astyanax 시스템의 특성은 두 가지 형태 사이의 완전한 다산이며, 건설적이고 회귀적인 진화4,5,6,7과관련된 게놈 영역(들)을 결정하기 위해 정량적 특성 궤적 로시(QTL) 매핑을 사용할 수 있게 한다. A. 멕시코는 실험실에서 자주 생성하도록 유도 될 수 있기 때문에 개발을 연구하는 유리한 시스템을 제공합니다. A. 멕시코인의

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Protocol

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이 절차는 메릴랜드 대학, 대학 공원의 기관 동물 관리 지침에 의해 승인되었습니다 (현재 IACUC 469 #R-NOV-18-59; 프로젝트 1241065-1).

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그림 1. 번식 주간과 비 번식 주간 달력. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

1. 월요일

  1. 오전 9-10시에 는 물 테스트를 수행하고 아래 1.1.1-4 단계를 수행합니다.
    1. 온도계를 사용하여 방, 탱크 및 저수지 온도를 기록합니다.
    2. 축색 테스트 키트로 암모니아, 질산염 및 질산염 수준을 기록합니다.
    3. 색검사 키트뿐만 아니라 모니터링 시스템에서 pH를 기록합....

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Results

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우리는 일반적으로 산 루이스 포토시의 나키미엔토 델 리오 초이에서 원래 수집 된 표면 물고기의 후손을 번식하고 산란합니다. 멕시코(리오 초이 표면 물고기)와 텍사스 주 발모헤아 주립공원의 샌 솔로몬 스프링스와 멕시코 타마울리파스, 쿠에바 데 로스 사비노스(로스 사비노스 동굴 물고기) 및 소타노 데 라 티나야(티나야 동굴 물고기)에서 추출한 동굴 물고기 멕시코.

사육 주간 내내 다양한 탱크에 대한 데이터가 수집됩니다. 각 탱크에 있는 산란된 태아는 양과 질을 위해 관찰됩니다. 수량은 높음, 중간 또는 낮음으로 기록됩니다. 배아수가 500이상이면 높은 양이 기록되고, 배아수가 200-500 사이이고, 배아수가 200미만이면 양이 적어지면 배지의 양이 기록된다. 품질도 마찬가지로 높음, 중간 또는 낮음으로 기록됩니다. 그릇에 있는 배아의 75% 이상이 살아 있다면 높은 품질이 기록되고, 그릇에 있는 배아의 약 25%에서 75%가 살아 있다면 배지의 질이 기록되고, 배아의 25% 미만이.......

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Discussion

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아스티아나엑스멕시카누스는 자주 생성되어 실험실1,2에서쉽게 사육할 수 있는 새로운 생물학적 모델이다. 우리는 A. 멕시코 동굴 물고기의 진화적 변화를 뒷받침하는 발달 메커니즘에 관심이 있기 때문에 배아의 생산과 사용은 연구 목표에 매우 중요합니다. 물고기의 성인 재고를 유지하는 주요 목적은 발달 실험에 사용 및 성인 사육 주식의 보충을 위해 배아와 젊은 튀김의 생산이다. 때때로, 성인은 또한 생리학, 행동, 또는 유전 실험에 이용될 수 있습니다. 유전자 실험은 짝짝 짝짓기 또는 체외 수정18을필요로 한다. 산란 동작을 나타내는 체외 수정 동물의경우(19)는 탱크로부터 제거되어 온도 유도 사육 정권 동안 십자가에 사용될 수 있다.

연구를 위한 배아의 질 그리고 .......

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Disclosures

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저자는 공개 할 것이 없습니다.

Acknowledgements

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데이비드 마르타시안, 디드레 헤이저, 에이미 파크허스트, 크레이그 푸트, 맨디 응에게 제프리 연구소 A. 멕시코 문화 시설에 귀중한 공헌을 해 주셔서 감사합니다. 제프리 연구소의 연구는 현재 NIH 보조금 EY024941에 의해 지원됩니다.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
BlackwormsEastern Aquatics, Lancaster, PA없음
번식 그물맞춤형
소금물 새우 알AquaCave Lake Forest, IL.없음
색도 측정 테스트 키트PetcoSKU:11916API 담수 pH 테스트 키트
달걀 노른자 플레이크Pentair, Minneapolis, MN없음
핑거볼Carolina Biological Supply741004Culture Dish, 4.5 in, 250 mL
핸드헬드 네트모든 애완 동물 상점
인큐베이터Fisher Scientific51-029-321HPM405 L
인스턴트 오션 씨솔트스펙트럼 브랜드, 블랙스버그, 버지니아없음
메틸렌 블루시그마-알드리치, 세인트루이스, MOM9140
파스퇴르 피펫 Fisher Scientific13-678-205.75 in.
그물 담그는 솔루션모든 애완 동물 상점
Nutrafin CycleAmazon없음박테리아 부스트
라이브 피드용 냉장고모든 출처
실체 현미경모든 출처
온도계모든 출처
Tetra Tropical CrispsSpectrum Brands, Blacksburg, VA없음
배아를 위한

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Jeffery, W. R. Cavefish as a model system in evolutionary developmental biology. Developmental Biology. 231, 1-12 (2001).
  2. Jeffery, W. R. Emerging model systems in evo-devo: cavefish and mechanisms of microevolution. Evolution & Development....

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