선천성 횡격막 탈장 및 태아 기관 폐색의 다양한 동물 모델은 윤리적 문제, 비용, 수술 어려움, 크기, 생존율 및 유전 도구의 가용성에 관한 장점과 단점을 제시합니다. 이 모델은 기관 폐색과 폐 발달에 대한 증가된 발광 압력의 영향을 연구하는 새로운 도구를 제공합니다.
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이 논문에서
요약
초록
태아 기관 폐색성 (TO), 확립 된 치료 양식, 심한 선천성 다이어프라진 탈장 (CDH)에서 태아 폐 성장과 생존을 촉진. 다음, 분비 된 상피 액의 보존 발광 압력을 증가 하 고 폐 성장을 유도. 다양한 동물 모델은 CDH 및 TO의 병리생리학을 이해하도록 정의되었습니다. 모든 기술의 어려움, 동물의 크기, 비용, 높은 사망률 및 유전 도구의 가용성과 같은 자신의 장점과 단점이 있습니다. 본명, 뮤린 태아 TO의 새로운 트랜스투테린 모델이 설명된다. 임신 한 마우스는 마취되었고, 자궁은 중간 선 복강경 절제술을 통해 노출되었다. 선택된 태아의 기관체는 기관 뒤에 놓인 단일 transuterine 봉합사, 1개의 경동맥 및 1개의 경정맥으로 합리화되었습니다. 댐은 폐쇄되어 복구할 수 있었습니다. 태아는 부분화 직전에 수집되었습니다. 폐대 체중 비율은 대조군 태아보다 높았다. 이 모델은 연구자가 폐 발달에 대한 TO 및 증가된 발광 압력의 영향을 연구하는 새로운 도구를 제공합니다.
서론
선천성 횡격막 탈장 (CDH)은 1:2500 임신에서 발생하며 폐 성 저형성증 및 신생아 폐 고혈압1,2,3,4,5,6의결과를 초래한다. 태아 기관 폐색(TO)은 26-30번째 임신 주에 태아검사를 수반하는 중증 CDH 환자에서 확립된 산전 요법으로, 풍선은 카리나 바로 위에 놓인 후32nd 임신 주에 제거된다. 이 임시 TO 태아 폐 성장을 유도 하 고 생존을 향상. 선천성 고기도 방해 증후군은 폐 증식과 관련된 치명적인 상태입니다, 이는 분비 된 상피 액의 보존을 촉진하기 위해 기관의 인공 폐색을 수행하도록 외과 의사영감을. 이러한 폐색은 발광 압력을 증가시키고 폐 성장유도 7. 그러나, 폐색은 상피 세포 성숙을 가능하게 하기 위하여 반전되어야 합니다.
CDH와 TO의 다양한 동물 모델 - 소, 토끼, 쥐 및....
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프로토콜
모든 실험은 실험실 동물의 치료 및 사용을위한 국립 보건 원 가이드 (NIH 간행물 번호 80023, 개정 1978)를 준수했습니다. 절차는 신시내티 아동 연구 재단 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 #2016-0068 IACUC 프로토콜으로 승인되었습니다.
1. 준비
- 연령일치 야생형(WT) C57BL/6 마우스를 짝짓기하려면 6:00 p.m에 같은 케이지에 넣고 다음 날 9:00 a.m에 분리합니다.
- 배아일 0(E0)을 결정하려면, 질 벽에 부착된 균일한 외부 영역과 섬유질이 형성되고 플러그 재료의 섬유와 혼합된 매스를 형성하는 일부 정자를 포함하는 질 플러그를 살펴보십시오.
- 짝짓기 시에 마우스의 무게를 기록합니다.
- 지속적인 임신을 보장하기 위해 E10에 마우스를 다시 무게.
- E16.5 (초기 캐날리큘러 스테이지)에서 수술을 수행하십시오.
- 가위, 바늘 홀더, 집게, 클램프, 수술 용 칼 과 손잡이 : 수술 중에 사용될 악기를 살균.
- 수술 플랫폼을 24°C로 예열하고 수술 전에 따뜻한 식염수(24°C)를 준비한다.
- 회복을 위한 따뜻한 환경을 조성하고 젖은 음식을 케이지 안에 넣어 조기 수유를 합니다....
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결과
이 연구 결과는 37개의 태아를 검토했습니다: 20 (54.1%) TO vs. 17 (45.9%) 제어로. 기관으로 폐색 될 수 없습니다 4 TO 그룹에 태아, 그들은 연구에서 제외 되었다. 두 그룹에서 사망률에 큰 차이가 없었다: 4 태아 (25%) TO 그룹에서 2 태아 (12%) 대조군(p=0.334, 확률비율(OR) 2.5, 95% 신뢰구간(CI) 0.39-16.05). 평균 체중, 폐 중량 및 폐대 체중 비율(LBWR)은 대조군(표1)보다TO 그룹에서 더 높았다. TO와 대조군 사이에 는 LBWR(p=0.006)에 큰 차이가 있었다.
DNA, RNA 및 단백질은 LBWR(도2)의차이에 대한 이유를 결정하기 위해 정량화되었다. 폐 DNA 양과 DNA/단백질 비율은 TO 그룹.......
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토론
이 방법은 마우스에 있는 태아 기관 폐색의 외과 절차 및 폐 발달에 그것의 충격을 기술합니다. 성공적인 TO를 위해 신중하게 수행해야 하는 프로토콜에는 몇 가지 중요한 단계가 있습니다. 수술이 일어나는 플랫폼의 따뜻함과 복막 구멍에 도입 된 식염수는 임신의 진행에 매우 중요합니다. 또한, 목의 노출을 보장하기 위해 새끼의 머리에 약간의 압력을 가해야 한다.
6.0 폴리프로필렌 봉합사는 이 기술에 사용할 수 있는 유일한 봉합사입니다. 6.0보다 큰 봉합사의 바늘은 두껍고 목의 기관 주위의 구조를 파괴하여 태아의 손실을 초래합니다. 얇은 봉합사의 바늘은 매우 짧고 E16.5 새끼 (초기 캐날리큘러 스테이지)의 목을 통과 할 수 없습니다. 또한, 커팅 바늘은 인접한 구조물을 파괴할 수 있기 때문에 적절하지 않다.
이 모델에는 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 첫째, 쥐와 인간 사이의 폐 발달 단계 및 임신 기간의 상관 관계에 차이가 있다.......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없습니다.
감사의 글
이 연구는 공공, 상업 또는 비영리 부문의 자금 조달 기관으로부터 특별한 보조금을 받지 못했습니다. 모든 저자는 데이터의 연구, 수집, 분석 및 해석의 개념 및 설계에 상당한 기여를했으며, 기사를 작성하고 중요한 지적 콘텐츠와 제출 할 버전의 최종 승인을 위해 수정했습니다. 저자는 수술 기술의 작품의 생산에 자신의 친절한 노력에 대한 칸 사툰쿠울루 감사합니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 부프레노르핀 | Par Pharmaceutical | NDC 42023-179-05 | 국소 마취용 |
| Isoflurane | Halocarbon Life Sciences | NDC 66794-017-25 | 일반 마취 |
| 확대 안경 | USA 의료-수술 | SLR-250LBLK | 최소 2.5x |
| Nikon 90i 현미경 | Nikon | 3417 | 전동 형광 |
| 뉴클레오스핀 조직 키트 | Macherey-Nagel, Dü ren, Germany | 740952.5 | DNA 분리 |
| Pierce BCA 단백질 분석 키트 | Thermo Fisher, IL, USA | 23225 | 단백질 수량화 |
| 폴리글락틴 봉합 | Ethicon | VCP451H | 4-0, 24 mm, 절단 |
| 폴리리신 슬라이드 | 폭스바겐 | 48382-117 | 현미경 접착 슬라이드 |
| 폴리프로필렌 봉합 | Ethicon | Y432H | 6-0, 13 mm 1/2c 테이퍼포인트 |
| RIPA 버퍼 | Sigma-Aldrich, 미주리, 미국 | R0278-50ml | 단백질 분리 |
| 실크 봉합 | 사 Ethicon | VCP682G | 4-0, 24 mm, 절단 |
| Trizol | 인비트로젠 | 15596026 | RNA 분리 |
참고문헌
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재인쇄 및 허가
