방법 논문

사춘기 이전 소녀와 여성의 생식 능력 보존을 최적화하기 위해 난소 조직에서 추출한 난모세포의 동결 보존(Cryopreservation of Oocytes Retrieved from Ovarian Tissue to Optimize Fertility Preservation in Sauberbertal Girls and Women)

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DOI:

10.3791/61777

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2020년 10월 23일

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1Développement Embryonnaire Précoce Humain et Pluripotence, Univ Montpellier, INSERM 1203, 2Département de Biologie de la Reproduction, Biologie de la Reproduction/DPI et CECOS, CHU Montpellier, Univ Montpellier, 3Centre d'AMP-CECOS, CHU Grenoble-Alpes, Univ Grenoble-Alpes

이 논문에서

요약

우리는 사춘기 이전 소녀와 조기 난소 기능 부전의 위험이 있는 여성의 가임력 보존을 위한 프로토콜을 제안합니다. 그것은 난소 조직 동결과 난소 조직에서 채취한 난모세포의 동결 보존을 결합합니다. 이 전략은 안전성을 개선하고 생식력 보존의 생식 잠재력을 최적화하여 출산 가능성을 극대화합니다.

초록

인간 난소 조직 동결 보존(OTC)은 긴급한 성선 독성 치료 또는 난소 수술의 맥락에서 사춘기 이전 소녀와 조기 난소 부전(POI)의 위험이 있는 여성의 여성 생식력을 보존하기 위해 전 세계적으로 점점 더 많이 사용되고 있습니다. 환자 관리, 가임력 보존 전략 또는 기술적 실험실 프로토콜에 대한 합의가 없기 때문에 가임력 보존이 어려운 문제이며, 이는 각 절차가 환자 프로필의 특성과 자체 위험-편익 비율에 맞게 조정되어야 함을 의미합니다. OTC 기간 동안, 성숙한/미성숙한 난모세포는 난소 조직 샘플 내의 크거나 작은 전방 여포에서 직접 흡인할 수 있으며, 사춘기 이전 여아 및 여성의 난소 조직 박리 중에 성장하는 난포에서 배양 배지로 방출될 수 있습니다. 이 원고에서는 난소 조직 동결과 난소 조직 샘플에서 채취한 성숙/미성숙 난모세포의 동결 보존을 결합하여 생식 능력 보존의 생식 가능성을 향상시키는 프로토콜을 제시합니다. 냉동 보존 전, 냉동 보존 중, 후에 난소 조직과 난모세포의 적절한 수집, 취급 및 보관이 설명됩니다. 동결 보존/해동된 난소 조직 샘플 및 난모세포의 후속 사용 및 안전성뿐만 아니라 미성숙 난모세포의 체외 성숙을 위한 최적의 타이밍에 대해서도 논의할 것입니다. 우리는 사춘기 이전 여아와 여성의 생식력 보존에 이 프로토콜을 체계적으로 사용할 것을 권장하는데, 이는 가임력 보존의 전체 생식 가능성을 높이고(즉, OTC를 포함한 난모세포 유리화) 또한 가임력 보존의 안전성과 사용(즉, 난모세포 해동 대 난소 이식편)을 개선하여 POI 위험이 있는 환자의 성공적인 출산 가능성을 극대화하기 때문입니다.

서론

가임력 보존 분야는 조기 난소 기능 부전(POI)의 위험이 있는 환자의 수가 증가함에 따라 지난 20년 동안 성장해 왔습니다1,2,3. 현재 생식력을 보존하기 위해 이용할 수 있는 의료 방법으로는 난소 조직 동결보존(OTC)4, 난소 자극 후 난모세포/배아 동결5, GnRH 유사체 투여6 또는 난소 전치(ovarian transposition)7 등이 있다. OTC는 특히 사춘기 이전 소녀의 생식력 보존을 위한 중요한 진전이며, 현재 생식력을 보존하기 위해 사용할 수 있는 유일한 옵션이며, 성선독성 치료의 시작을 지연시킬 수 없는 여성에게도 2,4.

OTC는 난소 피질의 바깥쪽 1mm에 위치한 많은 수의 원시 여포를 보존할 수 있습니다2. 냉동/해동된 난소 조직은 이식편(orthotopic 또는 heterotopic, 자가 또는 공여자)으로 사용하거나 in vitro에서 배양하여 성숙한 난모세포를 얻을 수 있습니다2. 냉동-해동된 사춘기 전 난소 조직 샘플의 이식은 사춘기를 유발하는 것으로 나타났습니다 8,9. 여성의 경우, 동결-해동된 난소 피질의 정소성 자가이식 후 생식 결과는 안심할 수 있으며, 자연 수정 후 57.5%10, 보조 생식 기술(ART) 수정 후 30%에서 70% 사이11. 2004년 냉동/해동된 인간 난소 조직의 정소외 이식으로 첫 번째 출생 이후, 12 이 기술을 통해 전 세계적으로 최소 130명의 어린이를 출산할 수 있었다2. 이식 조직의 호르몬 및 생식 기능은 일반적으로 수년 동안 지속되며, 11,13,14 이는 장기적인 기능을 확인시켜줍니다.

그러나 난소 조직 샘플의 자동 이식은 일부 환자에서 생존 가능한 악성 세포를 재도입할 수 있는 이론적 위험을 수반합니다 15,16,17,18, 특히 백혈병 생존자에서 19. 현재까지 건강한 암 생존자에게서 동결/해동된 난소 피질의 이식을 통한 암 전파 사례는 보고되지 않았으며11 이는 난소 피질의 섬유성 무혈관 특성이 악성 세포의 확산에 적합하지 않은 미세환경을 나타낼 수 있음을 시사합니다. 그럼에도 불구하고 난소 조직 이식은 여전히 실험적이고 도전적인 기술이며, 이는 현재 난모세포의 사용이 생식력을 회복하기 위해 난소 조직 이식보다 더 쉽고 안전한 접근 방식으로 간주되어야 함을 나타냅니다. 흥미롭게도, 미성숙한 난모세포는 사춘기 이전 여아와 여성 모두에서 OTC 중 난소 조직에서 쉽게 추출할 수 있으며,16 이는 난소 피질 조직 동결 외에도 생식 능력 회복 가능성을 극대화할 수 있는 신뢰할 수 있는 공급원이 될 수 있음을 시사합니다. 이러한 난모세포는 ART 실험실에서 눈에 보이는 전방 여포에서 수동으로 흡인하거나 난소 조직 절제 후 사용된 배지에서 분리할 수 있습니다. 그런 다음 회수된 난모세포는 미성숙 단계에서 직접 유리화하거나 시험관 내 성숙(IVM)을 사용하여 유리화 단계 전에 성숙할 수 있습니다20,21.

이 원고에서는 난소 조직에서 채취한 성숙한(MII 단계 난모세포) 및/또는 미성숙 난모세포(즉, 생식 소포(GV) 및 중기 I(MI) 단계 난모세포)의 분리 및 동결보존과 난소 조직의 동결 보존을 결합하는 프로토콜을 제안합니다. 이 프로토콜은 사춘기 이전 여아와 여성 모두의 생식력 보존 잠재력을 극대화하는 데 필요한 모든 구체적인 단계를 간략하게 설명합니다.

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프로토콜

모든 여성(18세 이상)과 모든 미성년 소녀 및 그들의 부모는 POI 위험이 있는 환자의 생식력을 보존하기 위해 정보에 입각한 동의서에 서명했습니다. 이 프로토콜은 가임력 보존 센터에서 일상적인 ART 절차로 간주됩니다. 이는 우리 기관 인간 연구 윤리 위원회의 지침을 따릅니다.

1. 품질 관리

  1. 38세 ≤ 여성을 포함하며, 순환 항뮬러관 호르몬 농도>1ng/mL를 포함하고 성선 독성 치료로 인해 POI 위험이 증가했음을 보여줍니다. 가임력 보존 시술을 위해 난모세포 유리화(난모세포 유리화)를 할 수 있는 여성, 충분한 정보에 입각한 동의를 할 수 없는 질환이 있는 여성 또는 마취 또는 수술로 인한 합병증 위험이 높은 여성은 제외합니다.
  2. 이 절차를 시작하기 전에 서명된 환자 동의서가 있는지 확인하십시오.
  3. 두 개의 서로 다른 동결 보존 저장 탱크 내에서 두 개의 빈 위치를 식별합니다. 극저온 튜브/빨대의 절반은 첫 번째 저장 탱크에 보관되고 냉동 튜브/빨대의 나머지 절반은 탱크 고장 시 샘플의 총 손실 위험을 최소화하기 위해 다른 탱크에 보관됩니다.
  4. 이 프로토콜에 필요한 모든 의료 기기의 가용성과 기능을 확인하십시오. 날카롭고 곧은 날과 미세하게 날카로운 끝이 있는 멸균 수술용 해부 가위와 멸균 무외상성 조직 겸자가 해부 단계에 권장됩니다.
  5. 모든 의료기기에 대해 모든 품질 관리 단계가 준수되었는지 확인합니다(특히 멸균 공정의 검증 및 일상적인 관리, 만료/로트 번호 확인 및 추적).
  6. 절차 전반에 걸쳐 무균/멸균 환경을 유지하고 모든 안전 예방 조치를 주의해서 숙지하십시오.
  7. 환자마다 다른 접시, 피펫 및 수술 도구를 사용하십시오.

2. 보존 전날

  1. 미네랄 오일로 덮인 IVF 배지가 들어 있는 멸균 60mm IVF 페트리 접시 하나를 준비하고 접시를 5% O2 및 5% CO2의 분위기에서 37°C에서 밤새 배양합니다. 이 접시를 사용하여 조직에서 잠재적으로 회수할 수 있는 적운-난모세포 복합체(COC)를 수집합니다(섹션 7.2 참조).
  2. IVF 배지를 포함하는 멸균 35mm IVF 페트리 접시 하나를 준비하고 접시를 5% O2 및 5% CO2의 분위기에서 37°C에서 밤새 배양합니다. 이 접시는 난모세포 제거 단계에 사용합니다(섹션 9.1 참조).
  3. 미네랄 오일로 덮인 IVF 배지가 포함된 멸균 35mm IVF 페트리 접시 하나를 준비하고 접시를 5% O2 및 5% CO2의 분위기에서 37°C에서 밤새 배양합니다. 이 접시를 사용하여 탈락 단계 후에 난모세포를 수집합니다(섹션 9.4 참조).

3. 난소 조직 채취 및 수송

  1. 전신 마취 하에 배꼽에 위치한 10mm 포트 1개와 좌하 사분면에 각각 하나, 오른쪽에 위치한 5mm 포트 2개를 사용하여 복강경 수술을 수행합니다.
  2. 난소 예비력, 크기 및 양쪽 난소의 거시적 측면(그림 1, A1–B1) 및 계획된 성선 독성 프로토콜에 따라 종양 전문의, 외과의 및 ART 병동 의료진의 합의된 결정에 따라 부분 또는 전체 편측 난소 절제술을 수행합니다. 날카로운 가위나 수술용 스테이플로 난소 절제술을 시행합니다. 보존할 난소 조직에 측부적, 전기적 또는 열적 손상을 유발할 수 있는 박리 장치를 사용하지 마십시오.
    참고: 완전한 편측 난소 절제술은 일반적으로 사춘기 이전 여아에서 시행되는 반면,16,22 부분적인 편측 난소 절제술은 난소가 크거나 난소 예비력이 높은 성인 환자에서 일반적으로 시행될 수 있습니다.

난소 해부 및 절편 과정; 이미지는 난소, SAF 조각, 피질, 수질, CL을 보여줍니다.
그림 1: 난소 조직 동결 보존. 급성 골수성 백혈병을 앓고 있는 사춘기 이전 소녀(A, 7세 환자)와 여성(B, 28세 환자)의 난소 조직 동결 보존. (A1–B1) 난소의 복강경 보기. (A2–B2–B3) 난소 조직 박리. (나4) 피질 난소 조직. CL : 황체. SAF: 작은 전방 여포. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

  1. 수제 또는 상업용 복강경 표본 채취 백을 사용하여 난소 조직을 배출합니다.
  2. 난소 조직을 4°C의 배양 배지가 들어 있는 멸균 튜브에 넣습니다. 조직은 배양 배지에 완전히 담가야 합니다.
  3. 최적의 결과를 위해 난소 조직을 4°C의 절연 파우치에 넣어 즉시 ART 실험실로 운반하십시오.
    참고: 필요한 경우, 난소 조직은 채취 후 최대 26시간 동안 조직의 품질을 위협하지 않고 저온(약 4°C)에서 실험실로 운반할 수 있습니다23.

4. 난소 조직 준비

  1. 난소 조직을 4°C에서 20mL의 예냉각된 배양 배지가 들어 있는 멸균 90mm IVF 페트리 접시로 옮깁니다.
  2. 난소 조직이 들어있는 페트리 접시를 미생물 오염의 위험을 최소화하기 위해 수직 층류 클린 벤치에 놓인 냉각판(4°C)에 놓습니다.

5. 난소 조직 샘플에서 수동 여포 흡인

  1. 1mL 일회용 주사기에 연결된 21G 주사기 바늘로 눈에 보이는 전방 여포(난소 조직 표면에 존재하는 경우)를 흡인합니다.
    참고: 이 단계는 까다로울 수 있습니다. 대안은 메스로 눈에 보이는 각 전방 여포를 부드럽게 열고 각 여포 내부를 IVF 배지로 헹구어 박리 배지 내의 COC를 부드럽게 방출하는 것입니다.
  2. 수집된 여포액을 실온에서 5mL의 IVF 배양 배지가 들어 있는 멸균 60mm IVF 페트리 접시에 플러시합니다.
  3. 실온에서 1mL의 IVF 배양 배지로 주사기를 헹구고 액체를 동일한 IVF 페트리 접시에 플러시합니다. 이 단계를 두 번 반복합니다.
  4. 도립 현미경(50x–200x 배율)에서 COC를 식별하고 분리합니다.
  5. 피펫을 사용하여 건강한 COC를 5% O2 및 5% CO2 분위기에서 37°C에서 오일로 덮인 사전 평형 IVF 배지가 들어 있는 새로운 멸균 60mm IVF 페트리 접시로 옮깁니다.
    참고: 건강한 COC에는 반투명한 난모세포가 포함되어 있습니다. 갈색의 난모세포를 나타내는 폐쇄성 COC를 폐기합니다.
  6. IVF 페트리 접시를 37°C의 인큐베이터에서 5% O2 및 5% CO2 의 분위기에서 폐기 단계까지 보관합니다(9단계 참조).

6. 난소 조직 박리

  1. 50mL 멸균 튜브에 새 냉동 용액을 준비합니다. 동결 용액에는 IVF 배양 배지에 1.5M 디메틸설폭사이드(DMSO)와 10%의 인간 혈청 알부민이 포함되어 있습니다. 부드럽게 소용돌이.
    알림: 사용 직전에 준비해야 합니다.
  2. 난소 조직을 절개하고 수질을 최대한 제거합니다(그림 1, B4).
  3. 완전 또는 부분 편측 난소 절제술의 경우 난소 피질을 각각 10mm x 10mm x 1mm 또는 0.5mm x 0.5mm x 1mm 크기의 조각으로 자릅니다(그림 1, A2–B2–B3). 절단은 멸균 수술용 날카로운 가위와 외상성 겸자로 수행됩니다.
    참고: 난소 조직의 한 조각은 추가 조직학적 분석을 위해 난소 피질과 수질과 함께 그대로 유지됩니다(8단계 참조).
  4. 해부 후 1mL의 IVF 배양 배지에서 각 난소 피질 샘플에 대해 두 가지 세척 단계(또는 필요한 경우 그 이상)를 수행하여 혈액을 제거합니다. 세척 후 모든 조직 샘플을 신선한 IVF 배양 배지가 있는 새로운 60mm 페트리 접시에 옮깁니다.
  5. 각 난소 피질 검체를 1mL의 동결 용액이 들어 있는 냉동 튜브에 넣습니다.
    알림: 혼합은 필요하지 않습니다. 추가 조직학적 분석을 위해 보관된 난소 조직 절편은 동결 보존되지 않습니다(8단계 참조).
  6. 냉동 용액과 평형을 이루기 위해 샘플을 4°C에서 30분 동안 보관하십시오.
  7. 저온 동결 기술로 모든 샘플을 동결 보존합니다. 냉각 속도는 +4 °C에서 -9 °C까지 -2 °C/min, -30 °C까지 -50 °C/min입니다. -15 °C까지 1 분, +4 °C / 분, -2 ° C까지 -40 °C / 분 동안 유지; 마지막으로 프로그래밍 가능한 냉동고를 사용하여 -150 °C까지 -25 °C/min.
  8. 냉동 튜브를 즉시 제거하고 -196 °C의 액체 질소에 담그십시오.
  9. 극저온 튜브의 절반을 첫 번째 액체 질소 저장 탱크에 넣고 나머지 절반의 냉동 튜브를 두 번째 액체 질소 탱크에 놓습니다.

7. 해부 사용 매체에서 수동 COC 분리

  1. 현미경(50x–200x 배율)으로 해부된 매체에서 COC를 식별합니다(그림 2).

난자 성숙 단계; 표지된 난뇨, 코로나 라디아타, 폐쇄성 난모세포가 있는 현미경 이미지.
그림 2: 난소 조직에서 채취한 성숙한 COC와 미성숙한 COC. 난소 조직에서 채취한 성숙한(A) 및 미성숙한(B1–B3, C1–C2) COC. (A) 성숙한 난모세포(제1극체, 중기 II기 난모세포의 존재)를 포함하는 성숙한 COC. (나1) 미성숙 난모세포를 포함하는 건강한 미성숙 COC(극성체 없음, 중기 I단계 난모세포). (B2–B3) 미성숙 생식 소포 단계 난모세포를 포함하는 건강한 미성숙 COC(극성체 없음, Prophase I단계 난모세포). (C1–C2) 폐쇄성 갈색 난모세포를 포함하는 건강에 해로운 COC. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

  1. 피펫을 사용하여 건강한 COC를 5% O2 및 5% CO2 의 분위기에서 37°C에서 오일로 덮인 사전 평형 IVF 배지가 포함된 새로운 멸균 60mm IVF 페트리 접시로 옮깁니다(2.1단계 참조).
    참고: 폐쇄성 COC를 폐기하십시오.
  2. IVF 페트리 접시를 37°C의 인큐베이터에서 5% O2 및 5% CO2 의 분위기에서 폐기 단계까지 보관합니다(9단계 참조).

8. 난소 조직 조직학적 분석

  1. 남은 난소 조직 조각(난소 피질과 수질 모두 포함)을 조직학적 검사를 위해 화학적 클린 벤치에서 3% 포르말린 용액에 고정합니다.
    참고: 피질 샘플이 성공적으로 동결 및 보관된 후에만 수행해야 합니다.
    주의: 포르말린 용액은 자극적이고 부식성이 있으며 독성이 있습니다. 이 단계는 IVF 실험실 밖에서 신중하게 수행해야 합니다.
  2. 이 난소 조직 샘플에 대한 완전한 조직학적 분석을 처방하고 악성 세포의 잠재적 존재 여부에 대한 평가와 난포 여포의 수와 유형(즉, 각각 원시, 원발, 이차 및 전방 여포)에 대한 설명을 제공합니다.

9. 난모세포 제거와 선택

  1. 난모세포 제거를 수행합니다. 대구경 피펫 팁(부피 0.1–20 μL, 길이: 40.5 mm, 직경 작업 원뿔: 6 mm, 직경 개구부: 0.36 mm)을 사용하여 부드러운 피펫팅(COC를 탈류 용액으로 반복적으로 흡인 및 배출)하여 COC를 히알루로니다제 용액(80 IU/mL 또는 최종 농도 0.1 mg/mL)에 잠시 노출시킨 후, 과잉 효소를 제거하기 위해 미네랄 오일로 덮인 사전 평형 매체에서 두 번의 세척 단계를 수행합니다(2.1 단계 참조).
  2. 사전 평형 IVF 배지에서 150 μm 피펫 팁을 사용하여 부드러운 피펫팅을 통해 적운 및 코로나 방사선 세포의 제거를 최적화합니다(2.1단계 참조).
  3. 도립 현미경(200x–400x 배율)을 사용하여 건강한 난모세포의 선택 단계를 수행합니다. 건강한 난모세포의 성숙 단계는 GV, MI 또는 MII 단계의 난모세포일 수 있습니다(그림 3). 건강한 난모세포는 다음과 같은 형태학적 특성을 가지고 있습니다: 온전하고 둥근 세포질, 100-150μm 사이의 크기, 옅은 색.
    참고: 폐쇄성 난모세포와 건강하지 않은 난모세포는 폐기합니다(그림 3, D1–D3).

난자 성숙 단계의 현미경 이미지; 일부 세포에서 확인된 배낭(GV).
그림 3: 난소 조직에서 채취한 성숙한 난모세포와 미성숙한 난모세포. (A) 성숙한 난모세포(중기 II단계 난모세포: 첫 번째 극체의 존재(PB, 화살표), 눈에 보이는 핵 없음), (B1–B2) 미성숙 난모세포(중기 I단계 난모세포: 극체 없음, 보이는 핵 없음), (C1–C3) 미성숙 난모세포(Germinal Vesicle-stage(VG) 난모세포: 극체 없음, 세포질 내에 핵이 있는 큰 후광의 존재(화살표)). C1에서 Germinal Vesicle-stage 난모세포는 이질적인 크기를 나타냅니다. (D1–D3) 아트레틱 난모세포. PB: 극체. GV: 생식 소포. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

  1. 유리화 단계까지 37°C, 5% O2 및 5% CO2 에서 인큐베이터 내부의 건강한 난모세포를 배양합니다(2.1단계 참조).

10. 난모세포 유리화

  1. 환자/표본 식별을 확인합니다.
  2. 도립 현미경(200x–400x 배율)을 사용하여 건강한 난모세포의 새로운 선택 단계를 수행합니다.
    참고: 폐쇄성 난모세포와 건강하지 않은 난모세포는 폐기하십시오.
  3. 유리화(vitrification) 단계 직전에 도립 현미경을 사용하여 각 건강한 난모세포의 사진을 찍습니다. 각 난모세포의 성숙 단계를 주목하십시오.
    참고: 이러한 모든 데이터(이미지, 크기, 성숙 단계)를 환자의 파일에 첨부합니다.
  4. 환자당 하나 이상의 빨대를 동결 보존하는 경우 빨대마다 다른 식별 번호를 사용하여 구별하십시오.
  5. 빨대당 하나 또는 두 개의 난모세포를 동결 보존합니다.
    참고: 성숙한 난모세포와 미성숙한 생존 가능한 난모세포는 별도로 동결 보존해야 합니다. 동일한 빨대에 두 개의 난모세포를 함께 동결보존할 때 형태학적 특성이 유사한 난모세포를 선택하는 것이 좋습니다.
  6. 제조업체의 지침에 따라 유리화 키트를 사용하여 건강한 난모세포를 동결 보존합니다( 재료 표 참조).
  7. 제조업체의 지침에 따라 액체 질소에 냉동 보관하기 위해 적절한 장치에 cryopreserve 난모세포를 로드합니다( 재료 표 참조).
  8. 빨대의 절반은 첫 번째 액체 질소 저장 탱크에 넣고 다른 절반은 두 번째 액체 질소 탱크에 넣습니다.

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결과

2007년에서 2020년 사이에 81명의 여성 환자로부터 총 81명의 OTC가 시행되었으며, 이 중 43명은 사춘기 이전 소녀와 38명의 여성이 포함되었습니다. 여성 환자(사춘기 이전 여아와 여성)의 평균 연령은 14.21세± 9.61세(평균 ± 표준 오차)였다. 가장 어린 환자는 생후 5개월이었고 가장 나이가 많은 환자는 33.6세였다(표 1). 사춘기 이전 여아와 여성의 평균 연령은 각각 6.84± 4.81세(최소-최대: 0.5-15.1)와 22.76± 5.92세(최소-최대: 14.2-33.6)였다(Mann-Whitney, p = 3.37 x 10-10).

OTC 이전에 성선독성 치료를 받은 적이 있는 환자의 비율은 사춘기 이전 여아에서 48.84%(21/43), 여성에서 13.16%(5/38)였다(Chi2, p=0.0006). 대다수의 환자(88.89%(72/81), 사춘기 전 여아 43명, 여성 29명)...

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토론

현재 원고는 난소 조직 동결과 난소 조직에서 채취한 난모세포의 동결 보존을 결합한 프로토콜을 제공하여 사춘기 이전 소녀와 POI 위험이 있는 여성의 생식 가능성을 높입니다. 보존된 난모세포의 양(즉, 생존 가능한 난모세포의 수)과 품질(즉, DNA 무결성 및 세포질 역량)을 최적화하고 임상적 사용을 위한 안전성을 최적화하기 위해 성선독성 요법을 시작하기 전에 이 프로토콜을 수행할 것을 강력히 권장합니다24. 어떤 형태의 성선독성 치료 전에 이 프로토콜을 수행할 수 없는 경우, 성선독성 요법을 시작한 후에도 이 프로토콜을 수행할 수 있지만, ART에서 이러한 난모세포를 사용할 때는 각별한 주의가 권장되며, 착상 전 유전자 검사(PGT), 신중한 태아 모니터링 및 양수천자와 같은 특정 예방 조치가 필요합니다16.

가임력 보존을 위해 채취해...

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공개 사항

저자 중 어느 누구도 경쟁 관심사를 가지고 있지 않습니다.

감사의 글

우리는 가임력 보존 활동에 참여한 우리 센터의 모든 구성원(산부인과 전문의, 생물학자, 종양 전문의, 해부병리학자)에게 감사드립니다. 이 연구는 가임력 보존을 위한 일상적인 절차의 일환으로 수행되었습니다. 자금이 접수되지 않았습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
1ml 일회용 주사기CDD1323101/7002655다른 재료 및 크기도 적합할 수 있습니다
21게이지 주사기 바늘MerckZ192481다른 재료 및 크기도 적합할 수 있습니다
35mm IVF 페트리 접시Nunc150255다른 재료 및 크기도 적합할 수 있습니다
60mm IVF 페트리 접시Nunc150270다른 재료 및 크기도 적합할 수 있습니다. 적합
90mm IVF 페트리 접시Nunc150360다른 재료 및 크기도 적합할 수 있습니다
외상성 겸자MedlanePI 299 04다른 재료 및 크기도 적합할 수 있습니다
Irvine Scientific90165로 완성 연속 단일 배양유리화 단계까지 여포액 채취, COC 배양, 난모세포 탈형성 및 난모세포 배양을 위한 IVF 배양 배지.
CryotubeThermo Scientific368632다른 제품도 적합할 수 있습니다
Dimethylsulfoxide (DMSO)MILTENYI BIOTEC SAS170-076-303CryoMACS DMSO 10 (EP)
GT40Air Liquide1,13,517저장 탱크
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