Method Article

난소 조직에서 박테리아의 특성화 및 기능적 예측

DOI:

10.3791/61878

⸱

October 23rd, 2021

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Obstetrics and Gynecology, First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, 2School of Social Sciences, University of Manchester, 3Department of Pathology, First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, 4Omega Bioservices Inc

* These authors contributed equally

In This Article

Summary

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면역조직화학 염색 및 16S 리보소말 RNA 유전자(16S rRNA 유전자) 시퀀싱은 시투에서 암 및 비암 난소 조직에서 박테리아를 발견하고 구별하기 위해 수행되었다. 박테리아의 구성 및 기능적 차이는 관찰되지 않은 국가의 재건에 의해 지역 사회의 BugBase 및 Phylogenetic 조사를 사용하여 예측되었다 (PICRUSt).

Abstract

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"멸균"여성 상부 생식 기관의 이론은 세균 검출의 발전으로 인해 증가 반대가 발생하고있다. 그러나 난소에 박테리아가 포함되어 있는지 여부는 아직 확인되지 않았습니다. 본명, 난소 조직에서 박테리아를 검출하는 실험이 도입되었다. 우리는 대조군에 있는 암 단에 있는 난소암 환자 및 비암 환자를 선택했습니다. 16S rRNA 유전자 염기서열 분석은 암 및 대조군으로부터 난소 조직에서 박테리아를 분화시키는 데 사용되었다. 또한, 우리는 BugBase및 PICRUSt를 사용하여 확인된 박테리아의 기능적 조성을 예측했습니다. 이 방법은 또한 많은 장기가 최근 몇 년 동안 박테리아를 항구 입증되었기 때문에 다른 내장 및 조직에서 사용될 수 있습니다. 내장과 조직에 박테리아의 존재는 과학자가 암과 일반적인 조직을 평가하는 것을 도울 수 있고 암의 처리에 있는 원조일 지도 모릅니다.

Introduction

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최근에는 신장, 비장, 간 및 난소1,2와같은 복부 고체 내장에서 박테리아의 존재를 증명하는 기사가 증가하고 있습니다. 겔러 외. 췌장 종양에서 박테리아를 발견 하 고, 이러한 박테리아는 gemcitabine에 저항 했다, 화학 요법 약물2. S. 만프레도 비에이라 외. 엔테로 코커스 갈리나룸은 림프절, 간 및 비장에 이식하고, 자가 면역3을구동 할 수 있다는 결론을 내렸다.

자궁 경부는 수비수역할을하기 때문에 자궁, 나팔관 및 난소를 포함하는 상부 여성 생식 기관의 박테리아는 최소한으로 연구되었습니다. 그러나 최근 몇 년 동안 몇 가지 새로운 이론이 확립되었습니다. 박테리아는 mucins4,5의변화로 인해 생리 주기 동안 자궁 구멍에 접근할 수 있다. 또한, Zervomanolakis 외. 자궁, 나팔관과 함께, 난소의 내분비 시스템에 의해 제어 되는 연동 성 펌프, 이러한 배열은 박테....

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Protocol

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이 연구는 시안자오퉁 대학 제1부속병원의 의료기관윤리위원회에 의해 승인되었다(No. XJTUIAF2018LSK-139). 모든 등록 된 환자로부터 통보 된 동의를 얻었습니다.

1. 암 그룹 및 대조군 진입 기준

  1. 암 단을 위해, 주로 난소암으로 진단되는 환자를 등록하고, 복강경 후에, 그(것)들은 병리학적인 사실 인정에 의하여 장뇌 난소암이 있다는 것을 증명됩니다.
  2. 대조군의 경우, 난소 질환을 제시하지 않고 자궁 근종 또는 자궁 아데노미증으로 주로 진단되고 자군 절제술과 살핀고-oophorectomy를 겪은 환자를 등록하십시오.
    참고: 이 표준은 명확하지 않습니다. 자군 절제술과 살핀고-난소 절제술을 겪는 난소에 영향을 미치지 않는 질병 환자도 등록할 수 있습니다.
  3. 다음 기준 중 하나 이상을 가진 환자를 제외합니다.
    임신 또는 모유 수유 여성.
    항생제를 복용 2 수술 전에 개월.
    발열 또는 높은 염증 성 마커를 갖는.
    어떤 종류의 염증이 있습니다.
    신애자주반트 화학요법을 받은 후.

2. 샘플 수집

  1. 수술 중, 절제된 난소를 ....

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Results

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환자
총 16명의 자격을 갖춘 환자가 연구 결과에 포함되었습니다. 대조군은 양성 자궁 종양진단을 받은 여성 10명이 포함되었다(그 중 3명의 환자는 자궁 근종으로 진단되었고, 7명의 환자는 자궁 아데노마이증으로 진단되었다). 한편, 암 그룹은 장뇌 난소암 진단을 받은 6명의 여성을 포함시켰다(그 중 2명의 환자는 단계 II로 진단되었고, 그 중 2명은 단계 III로 진단되었다). 다음 특성은 대조군과 암군에서 환자 들 사이에 차이가 없음을 보였다: 나이, 갱년기 상태, 패리티, 고혈압의 역사, 당뇨병의 역사(표 1).

표 1: 환자 통계는 여기를 클릭하여 이 표를 다운로드하십시오.

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Discussion

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난소암은 여성의 불임25에주목할 만한 영향을 미칩니다. 대부분의 난소암 환자는 후기 단계에서 진단되고, 5년 생존율은 30%18미만입니다. 간, 췌장 및 비장을 포함한 복부 고체 내장에서 박테리아의 확인이 발표되었습니다. 상부 생식기관에서 박테리아의 존재는자궁경부가2,3,4,5로동봉되지 않기 때문에 발생한다. 그러나 복부 고체 내장인 난소가 멸균인지 여부는 아직 결정되지 않았습니다. 또한 난소의 박테리아가 난소암과 관련이 있는지 여부도 중요한 질문입니다.

우리가 발견 한 박테리아의 중요한 차이는 다른 그룹 사이에서 비교되었습니다. 위에서 언급 한 모든 절차는 기기, 시.......

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Disclosures

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저자는 공개 할 것이 없습니다.

Acknowledgements

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이 작품은 중국 시안자오퉁대학교 제1부속병원 임상연구상(XJTU1AF-2018-017, XJTU1AF-CRF-2019-002), 산시성 과학기술부 자연과학 의 주요 기초연구프로젝트(2018JM707, 2018JM707,7073)의 임상연구상을 수상했다. 2017ZDJC-11), 산시성 과학기술부(2017ZDXM-SF-068, 2019QYPY-138), 산시성 협력기술 혁신 프로젝트(2) 017XT-026, 2018XT-002) 및 시안 사회 개발 지도 계획 (2017117SF / YX011-3)의 의학 연구 프로젝트. 기금은 연구 설계, 데이터 수집 및 분석, 출판 결정 또는 원고 준비에 아무런 역할이 없었습니다.

시안자오퉁대학교 제1부속병원의 산부인과 동료들에게 샘플 수집에 기여한 것에 대해 감사드립니다.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
2200 TapeStation SoftwareAgilgent
미국
AmpliSeq for Illumina 라이브러리 준비, 색인 및 액세서리Illumina
Image-pro plus 7Media Cybernetics
Leica ASP 300SLeica Biosystems Division of Leica Microsystems
라이카 마이크로시스템즈
라이카 RM2235라이카 바이오시스템즈 라이카 마이크로시스템
사업부 LPS 코어 단클론 항체, 클론 WN1 222-5Hycult Biotech
Mag-Bind RxnPure Plus 마그네틱 비드Omega BiotekM1386-00
Mag-Bind Universal Pathogen 96 KitOmega BiotekM4029-01
MiSeqIlluminaSY-410-1003
Silva 데이터베이스, Max Planck Institute for Marine Microbiology 및 Jacobs University
, QuantiFluor dsDNA 시스템PromegaE2670
TrimmomaticBjö rn Usadel
ZytoChem Plus(HRP) Anti-Rabbit(DAB) 키트Zytomed 시스템HRP008DAB-RB
Leica EG 1150 Leica Biosystems Division of Leica Biosystems Division of Leica Microsystems 즈,

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Manfredo Vieira, S., et al. Translocation of a gut pathobiont drives autoimmunity in mice and humans. Science. 359 (6380), 1156-1161 (2018).
  2. Geller, L. T., et al. Potential role of intratumor bacteria in mediating tumor resistanc....

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Ovarian Tissue Bacteria16S rRNA SequencingImmunohistochemistry StainingBugBase AnalysisPICRUSt Functional PredictionSterile Tissue ProcessingDNA Library PreparationQIIME Data AnalysisAlpha Diversity MetricsStatistical Significance Testing

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