이 논문은 마우스의 지질 대사를 평가하기 위한 3가지 쉽고 접근 가능한 에세이를 제공합니다.
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이 논문에서
요약
초록
지질 대사를 평가하는 것은 신진 대사 기능을 평가하는 초석이며 생체 대사 연구에 필수적인 것으로 간주됩니다. 지질은 그들의 합성 및 신진 대사에 관련 된 많은 경로와 많은 다른 분자의 클래스. 영양 및 비만 연구를 위한 지질 hemostasis를 평가하기 위한 출발점이 필요합니다. 이 논문은 마스터하기 위하여 작은 전문 지식 또는 사례를 필요로 하는 3개의 쉽고 접근가능한 방법을 설명하고, 마우스에 있는 지질 대사 이상을 위해 검열하기 위하여 대부분의 실험실에 의해 적응될 수 있습니다. 이들 방법은 (1) 구강 내립내성 검사를 통해 식이 지질 처리 기능을 위한 상용 키트(2)를 이용한 여러 금식 혈청 지질 분자를 측정하고, (3) 약제화합물인 CL 316,243, 마우스에 대한 반응을 평가한다. 함께, 이러한 방법은 마우스에서 지질 처리 기능의 높은 수준의 개요를 제공 할 것입니다.
서론
탄수화물과 지질은 에너지 대사를 위한 두 가지 주요 기판입니다. 비정상적인 지질 대사는 타입 II 당뇨병, 심혈관 질환, 지방 간 질환 및 암을 포함한 많은 인간 질환을 초래합니다. 식이 지질, 주로 트리 글리세라이드, 림프계로 내장을 통해 흡수 하 고 심장 근처 chylomicrons에서 정맥 순환을 입력1. 지질은 혈류량의 지단백 입자에 의해 운반되며, 지방산 모이드는 근육 및 지방 조직2와같은 말초 기관에서 지단류 의 작용에 의해 해방된다. 나머지 콜레스테롤이 풍부한 잔재 입자는 간3에의해 지워집니다. 마우스는 지질 대사를 연구하기 위한 연구 모델로 실험실에서 널리 사용되어 왔습니다. 포괄적인 유전 도구 세트를 사용할 수 있고 상대적으로 짧은 번식 주기를 통해 지질이 어떻게 흡수되고 합성되고 대사되는지 연구할 수 있는 강력한 모델입니다.
지질 대사의 복잡성으로 인해, 정교한 지질학 연구 또는 동위원소 추적기 연구는 일반적으로 지질 종 또는 지질 관련 대사 플럭스와운명4,5의수집을 정량화하는 데 사용된다. 이....
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프로토콜
동물은 베일러 의과 대학 (BCM)의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인 된 동물 관리 및 실험 프로토콜에 따라 표준화 된 조건에 보관됩니다. 동물은 표준 또는 특별한 식단, 물 광고 리비툼을 공급하고 12 시간 주 /밤 주기로 유지됩니다.
1. 금식 세럼 지질 의 측정
- 마우스를 오후 5시 이후에 새로운 케이지로 옮기고 밤새 (실험 전에 약 16 시간의 금식)에 무료로 접근할 수 있습니다. 하룻밤 단식은 마우스의 위장관의 완전한 비우는 것을 보장합니다.
참고 : 마우스는 금식 하는 동안 그들의 대변을 먹고, 그래서 음식 철수 적절 하 게 금식 보장 할 수 없습니다. - 다음 아침, 꼬리에 마우스를 잡고 표면에 놓습니다. 마우스의 꼬리를 부드럽게 뒤로 당겨 마우스를 제지에 놓습니다. 마우스가 숨을 쉴 수 있도록 하면서 마우스의 움직임을 재교육하기 위해 코 구속을 놓습니다. 코 구속의 손잡이를 조입니다. 가슴 움직임을 모니터링하여 동물이 정상적으로 호흡하고 있는지 확인하고 마우스가 제지기에서 보내는 시간을 최소화합니다.
- 자유 이동 마우스의 꼬리 정맥에 피상적 절개 (닉)를 만들고, 마우스를 억제하지 않고 유리 모세관 (모세관의 약 1/3 채우기)에 절개에서 혈액의 25 μL을 그립니다....
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결과
우리는 각 분석이 마우스의 지질 대사에 대한 귀중한 정보를 제공한다는 세 가지 발췌문으로 보여줍니다. C57BL/6J 남성 마우스의 경우 8주에서 8주간의 고지방 식단(HFD) 사료를 섭취하여 8주 동안 공급에 어려움을 겪고 있으며, 총 콜레스테롤 수치가 크게 상승했으며 혈청 트리글리세라이드와 NEFA는 그렇지 않았으며혈액내트리글리세라이드와 NEFA가 식이 지방 챌린지에 의해 주로 규제되지 않는다는 것을 시사합니다. 마우스의 두 번째 코호트에서, C57BL6 및 C57BL6/N 서브균소는 8주부터 시작하여 8주 동안 HFD를 공급하였다. 그들의 혈청 트리글리세라이드 수준은 구강 내 지질 도전 후에 비교되었습니다. 그 결과 6N과 6J 서브트레인 의 눈에 띄는 차이를 보였으며, 6J는 인트라피드 투여 후 혈청 트리글리세라이드 수준에서 현저히 높은 피크를 가지며, 흡수가 강화되었음을 나타내거나 훨씬 느린 트리글리세라이드 클리어런스(그림1)를나타냈다. 마지막으로, 일반 차우.......
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토론
세 가지 애서에서는 몇 가지 중요한 고려 사항과 함께 실험실에서 기능을 강력하게 설명했습니다. 야간 금식은 금식 혈청 지질 수준 과 경구 내측 내성 시험을 결정하기 위해 필요합니다. 경구 내립 성 내성 검사의 경우, 특히 1 시간 및 2 시간 지점에서 지방 층의 형성을 최소화하기 위해 실온에서 혈액을 회전하는 것이 중요합니다. 형성하는 경우이 지방 층을 버리지 않는 것이 중요합니다. 상체를 지질 층으로 옮기고 부드럽게 파이펫을 섞어 트리글리세라이드 결단력을 확인하십시오.
금식 혈청 지질 수준의 해석
단식은마우스7에서총 콜레스테롤 수치를 낮추는 것으로 나타났으며, 만성적으로 고지방 함량을 섭취하면 총 콜레스테롤 수치가8을증가시킨다. 콜레스테롤의 두 가지 주요 유형이 있다: 고밀도 지단백-콜레스테롤 (HDL-C) 그리고 저밀도 지단백 콜레스테롤 (LDL-C). H.......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없습니다.
감사의 글
이 작품은 국립 보건원 (NIH), 보조금 R00-DK114498, 미국 농무부 (USDA), 보조금 CRIS에 의해 지원됩니다 : 3092-51000-062 Y. Z. Z.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 20% Intralipid | Sigma Aldrich | I141 | |
| BD 슬립 팁 멸균 주사기 1ml | Shaotong | B07F1KRMYN | |
| CL 316,243 수화물 | Sigma-Aldrich | C5976 | |
| 곡선 공급 바늘(18게이지) | Kent Scientific | FNC-18-2-2 | |
| 유리 글리세롤 시약 | Sigma Aldrich | F6428 | |
| 글리세롤 표준 용액 | 시그마 | G7793 | |
| HR 시리즈 NEFA-HR(2)색상 시약 A | Fujifilm Wako 진단 | 999-34691 | |
| HR 시리즈 NEFA-HR(2)색상 시약 B | Fujifilm Wako 진단 | 991-34891 | |
| HR 시리즈 NEFA-HR(2)솔벤트 A | Fujifilm Wako 진단 | 995-34791 | |
| HR 시리즈 NEFA-HR(2)솔벤트 B | Fujifilm Wako Diagnostics | 993-35191 | |
| Matrix Plus 화학 참조 키트 | Verichem | 9500 | |
| 마이크로 원심분리기 튜브 | Fisher Scientific | 14-222-168 | |
| 미세혈구 모세관, 간화되지 않음 | Fisher Scientific | 22-362-574 | |
| NEFA STANDARD SOLUTION | FUJIFILM Wako Diagnostics | 276-76491 | |
| 인산염 완충 식염수 | Boston Bioproducts | BM-220 | |
| Thermo Scientific 트리글리세리드 시약 | Fisher Scientific | TR22421 | |
| 총 콜레스테롤 시약 | Thermo Scientifi | TR13421 |
참고문헌
- Dixon, J. B. Mechanisms of chylomicron uptake into lacteals. Annals of the New York Academy of Sciences. 1207, Suppl 1 52-57 (2010).
- Nuno, J., de Oya, M. Lipoprotein lipase: review. Revista Clínica Española. 170 (3-4), 83-87 (1983).
- Williams, K. J.
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재인쇄 및 허가
